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    滴施生物藥劑對棉花生長、黃萎病防治及土壤微生物數(shù)量的影響

    2018-08-02 05:45:22周光海李全勝張國麗
    西北農(nóng)業(yè)學(xué)報 2018年7期
    關(guān)鍵詞:黃萎病植保芽孢

    呂 寧,周光海,陳 云,石 磊,李全勝,張國麗

    (1.新疆農(nóng)墾科學(xué)院,新疆石河子 832000;2.新疆石河子大學(xué),經(jīng)濟與管理學(xué)院,新疆石河子 832003;3.新疆農(nóng)墾科學(xué)院,農(nóng)田水利與土壤肥料研究所,新疆石河子 832000;4.新疆農(nóng)墾科學(xué)院 生物技術(shù)研究所,新疆石河子 832000)

    新疆是中國最大的適宜種植棉花的區(qū)域。據(jù)統(tǒng)計,新疆棉花總產(chǎn)量占全國的33%[1]。棉花是新疆的重要經(jīng)濟作物,棉花產(chǎn)值占全疆農(nóng)業(yè)總產(chǎn)值的45%,棉花產(chǎn)業(yè)在新疆的經(jīng)濟生產(chǎn)中占有舉足輕重的地位[2-3]。但是由于連年種植、不合理的施用化肥,以及高密度覆膜栽培等,新疆棉區(qū)黃萎病害日趨嚴重。據(jù)不完全統(tǒng)計,每年由于“兩萎”病害造成的經(jīng)濟損失達到15%左右[4],成為當(dāng)前制約新疆棉花可持續(xù)生產(chǎn)的主要障礙因素。

    長期以來棉花黃萎病防治主要依賴化學(xué)藥劑,大量使用化學(xué)殺菌劑帶來嚴重的環(huán)境污染和藥品殘留問題[5-6]。生物農(nóng)藥是利用有益微生物活體或微生物代謝產(chǎn)物進行植病防治的一類藥劑,主要包括拮抗微生物菌劑、植物源農(nóng)藥、植物生長調(diào)節(jié)劑、抗生素農(nóng)藥等[7-8],具有易降解、生態(tài)安全、改善土壤環(huán)境等優(yōu)點,因此成為植病防治中的新途徑。有關(guān)棉花黃萎病的生物防治,目前集中在功能菌生防因子的篩選、作用機理及生物制劑的研究開發(fā)[9-13]方面,施藥方式主要是噴施、拌種和灌根[14]。棉花黃萎病是典型的土傳病害,利用滴灌管道可將藥劑直接隨水施入棉花根部,實現(xiàn)藥劑的可控、均勻和靶向施入,對土壤病原菌起到更為直接的抑制作用[15-16]。新疆地區(qū)90%以上棉田均采用滴灌模式[17],開展隨水施藥技術(shù)研究十分必要。一些植保學(xué)者陸續(xù)開展生物菌劑隨水滴施防治棉花黃萎病的藥效試驗[18-22],婁善偉等[19]提出每公頃滴施枯草芽胞桿菌9 kg防效顯著提高,劉政等[20]研究發(fā)現(xiàn)每公頃滴施木霉菌厚垣孢子制劑60 kg,對棉花黃萎病防效可達到57.81%。不同的植棉區(qū),因氣候因素、土壤理化性質(zhì)及種植品種的不同,不同的生物藥劑的施用量存在顯著差異。已有報道中在滴施用量、滴施時間方面缺乏梯度設(shè)計,因此尚未有一致性結(jié)論;另外,生物藥劑滴施后必然會引起土壤微生物菌群變化,但具體的影響效應(yīng)尚不明確。

    本研究設(shè)置施藥量梯度試驗,于2015-2016年開展3種不同生物藥劑隨水滴施防治棉花黃萎病的試驗研究,通過調(diào)查各生育期棉花生長性狀,統(tǒng)計棉田黃萎病發(fā)病率和防效,測定分析施藥后土壤微生物數(shù)量變化,明確3種生物藥劑合理的滴施用量,旨在為科學(xué)使用生物藥劑和滴灌施藥技術(shù)防治棉花黃萎病提供理論指導(dǎo)。

    1 材料與方法

    1.1 試驗地概況

    2016年,試驗地點設(shè)在新疆農(nóng)墾科學(xué)院3輪5號試驗地。該試驗地連續(xù)種植棉花5 a,屬黃萎病發(fā)病中等偏重地塊。土壤類型、質(zhì)地及主要理化性狀見表1。

    表1 試驗點基本情況Table 1 Physical and chemical properties of tested soils

    1.2 供試材料

    1.2.1 供試藥劑 枯草芽孢桿菌可濕性粉劑(Bacillussubtilisagent,由河北農(nóng)科院提供,功能菌為枯草芽孢桿菌、側(cè)孢芽孢桿菌,10億個活芽孢菌/g);“施倍健”哈茨木霉菌劑(Trichodermahumatumagent,主要菌種:木霉菌,哈氏木霉厚垣孢子≥2.0億/g,海南金雨豐生物工程有限公司生產(chǎn));渝峰“99植?!?重慶市聯(lián)普農(nóng)業(yè)發(fā)展股份有限公司生產(chǎn),主要成分:銅、鐵、鋅、錳、硼、鉬等微量元素,以及氨基酸和有機活性物質(zhì))。

    1.2.2 供試棉花品種 ‘新陸早60’,由新疆農(nóng)墾科學(xué)院棉花研究所選育。該品種具有早熟、豐產(chǎn)及抗逆性較好等特點。

    1.3 試驗設(shè)計

    田間試驗采取裂區(qū)設(shè)計。設(shè)置4個主處理(3種藥劑+清水對照),每種藥劑的3個施藥量為副處理,重復(fù)3次,隨機排列。主區(qū)面積為667 m2,副區(qū)面積6.15 m2(2.05 m×3.00 m)。

    根據(jù)不同藥劑有效成分含量、推薦使用劑量及試驗地棉花黃萎病的發(fā)病表現(xiàn),每種藥劑設(shè)置3個施藥量水平??莶菅挎邨U菌可濕粉劑,記為T1處理,3個施藥量分別為15.0 kg/hm2、30.0 kg/hm2、45.0 kg/hm2;“施倍健”哈茨木霉菌劑,記為T2處理,3個施藥量分別為15.0 kg/hm2、18.0 kg/hm2、24.0 kg/hm2;渝峰“99植?!保洖門3處理,3個用藥量分別為15.0 kg/hm2、22.5 kg/hm2、30.0 kg/hm2;以相鄰不施藥劑的棉花為對照,設(shè)為處理T4,除施藥處理外,其余田管措施各處理均相同。根據(jù)當(dāng)?shù)攸S萎病的發(fā)病規(guī)律,在棉花生育前期(6月15日、7月10日)將藥劑分2次施入,各滴施50%。

    滴灌施藥方式全部采用移動加壓滴灌模式,于滴水結(jié)束前約2 h內(nèi)進行,將藥劑加入到滴灌系統(tǒng)的配藥箱中,隨水滴入完成施藥。試驗于棉花發(fā)病前期開始施藥,整個生育期滴施2次。

    1.4 調(diào)查指標(biāo)及方法

    1.4.1 棉花生長性狀及產(chǎn)量指標(biāo)調(diào)查 記錄各處理黃萎病發(fā)病的時間。調(diào)查各生育階段棉花株高,測定各處理棉花的蕾數(shù)(直徑≥3 cm的計數(shù))、果枝臺數(shù)和有效結(jié)鈴數(shù)。

    1.4.2 棉花黃萎病發(fā)病率、病指及防效計算 從各處理出現(xiàn)病株起,開始調(diào)查記錄棉田發(fā)病情況。棉花蕾鈴期通過觀察病葉、吐絮期通過觀察棉稈木質(zhì)部顏色變化,統(tǒng)計發(fā)病株數(shù),計算發(fā)病率、病指和防治效果。調(diào)查記載中按照沈其益5級分級標(biāo)準(zhǔn)[23]表述病情。

    發(fā)病率=發(fā)病植株數(shù)/全部調(diào)查植株數(shù)×100%,記作Ri。

    病情指數(shù)=發(fā)病植株的總病級數(shù)/全部調(diào)查植株的理論最高總病級數(shù),記作Di。

    防病效果=(CK處理病情指數(shù)-施藥處理病情指數(shù))/CK處理病情指數(shù)×100%。

    1.4.3 土壤微生物數(shù)量測定 在棉花吐絮期(9月21日),采集0 ~ 15 cm土層新鮮土樣,采用平板培養(yǎng)法、分離計數(shù)法測定土壤微生物數(shù)量[24]。其中,細菌分離用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基,真菌采用馬鈴薯培養(yǎng)基,放線菌采用改良高氏一號培養(yǎng)基。稱取5 g制備好的土壤樣品,加入盛有45 mL無菌水的三角瓶中,在混勻器上振蕩30 min,即成10-1土壤懸浮液。按上述方法依次稀釋成10-2、10-3、10-4的土壤懸浮液。根據(jù)分離的微生物種類選用不同稀釋度的土壤懸浮液,真菌用10-2、細菌用10-4、放線菌用10-3涂板。真菌、細菌板在28 ℃黑暗中培養(yǎng)2 d,而放線菌板培養(yǎng)7 d。記錄每皿各種菌的菌落數(shù),直至同類微生物的菌落數(shù)不再增加為止。土壤中菌落數(shù)的單位為 cfu/g。

    1.5 數(shù)據(jù)處理分析

    采用SPSS 11.5進行方差分析,并用Duncan’s法進行差異顯著性檢驗(P=0.05),分析不同施藥量處理對棉花株高、結(jié)鈴數(shù)、黃萎病發(fā)病率、病指、防效及土壤微生物數(shù)量的影響。數(shù)據(jù)均為3次重復(fù)的“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 不同施藥處理對棉花黃萎病的防治效果

    通過各生育期棉花黃萎病發(fā)病情況的跟蹤調(diào)查和統(tǒng)計,研究發(fā)現(xiàn),3種生物藥劑滴施后顯著降低棉田黃萎病的發(fā)病率和病指,不同程度地提高防病效果,每種藥劑不同的施藥量處理防病效果顯著不同(表2)。

    發(fā)病率數(shù)據(jù)顯示,棉花蕾期T1、T2、T3 3個處理平均發(fā)病率分別為17.44%、17.94%、9.38%,較對照(40.11%)依次降低56.52%、55.27%、76.61%,降低程度十分顯著(P值分別為0.001、0.002、0.001)。每種藥劑不同施藥量處理對發(fā)病率的影響,T1表現(xiàn)出隨施藥量的增加而顯著降低的趨勢(P=0.011);T2施藥量由低到高發(fā)病率依次為20.34%、15.36%、18.11%,施藥量18.0 kg/hm2發(fā)病率顯著低于15.0 kg/hm2和24.0 kg/hm2(P=0.007);T3處理3個施藥量15.0 kg/hm2、22.5 kg/hm2、30.0 kg/hm2發(fā)病率依次為12.22%、8.44%、7.49%,隨施藥量增加發(fā)病率呈現(xiàn)降低趨勢,但中、高施藥量之間差異不大。隨著生育期推進,進入棉花花鈴期、吐絮期,T1、T2、T3、T4各處理平均發(fā)病率分別為26.90%、30.88%、20.62%、52.12%和35.19%、35.16%、30.94%、58.18%,較蕾期棉田發(fā)病明顯增加,但與對照相比,施藥后均不同程度降低黃萎病發(fā)病率,降低效果大小為T3>T1>T2,各處理不同施藥量之間發(fā)病率的變化趨勢與棉花蕾期相一致。

    病指數(shù)據(jù)分析顯示,各生育期T1、T2、T3處理病指較對照(T4)降低幅度依次為:蕾期62.00%、71.14%、85.94%,花鈴期45.24%、41.44%、70.69%,吐絮期42.78%、39.99%、63.92%,全生育期總體降低比例49.04%、48.62%、71.55%,T3處理病害程度最輕。各藥劑不同的施藥量下,T1處理隨著施藥量的增加病指顯著降低(P=0.031),T2處理的中施藥量18.0 kg/hm2其病害程度顯著低于其他施藥水平,T3處理總體上表現(xiàn)為隨施藥量的加大病指依次降低。

    基于病指數(shù)據(jù)的防病效果計算結(jié)果顯示,施藥處理T1、T2、T3在不同生育期對棉花黃萎病的防治效果為:蕾期59.30%、68.28%、84.99%,花鈴期46.78%、43.44%、70.19%,吐絮期42.17%、39.33%、62.18%,3種藥劑對棉花黃萎病防治作用顯著,且生育前期防效明顯高于生育后期。每種藥劑施藥量的增減變化對黃萎病抑菌效果差異顯著,其中,T1處理全生育期平均防效隨施藥量的增加顯著提高(P=0.017),施藥量45.0 kg/hm2防效較15.0 kg/hm2、30.0 kg/hm2提高24.72%、7.09%,符合一般的施藥效應(yīng);T2處理的防病效果未隨施藥量的增加而增加,防病效果以中施藥量18.0 kg/hm2最明顯;T3處理的防病效果總體上隨施藥量的增加而增加,3個施藥量整個生育期的平均防效依次達到67.97%、72.00%、77.39%,中、高施藥量之間無顯著差異(P=0.073)。

    2.2 不同施藥處理對棉花生長性狀的影響

    通過棉花生長性狀數(shù)據(jù)統(tǒng)計,研究表明,施用生物藥劑后除對棉花黃萎病害具有不同程度的防治效果外,對棉花的生長發(fā)育及產(chǎn)量也表現(xiàn)出較好的促進作用(表3)。與清水對照相比,T1、T2、T3處理棉花的株高分別增加11.56%、15.50%、18.34%,果枝臺數(shù)分別增加51.07%、31.87%、58.53%,結(jié)蕾數(shù)分別增加60.10%、53.09%、66.29%,有效結(jié)鈴數(shù)分別增加35.67%、8.06%、42.99%,3種生物滴施后對棉花促生作用效果大小表現(xiàn)為T3>T1>T2,這與T3(“99植?!?本身含有多種微量元素、氨基酸和有機活性物質(zhì)密切相關(guān)。

    每種藥劑不同的滴施用量對棉花生長及產(chǎn)量因子的影響顯著不同,其中,對株高的影響,T1表現(xiàn)為隨著施藥量的增加顯著增加(P=0.008);T2和T3處理各施藥量之間差異不大。對果枝數(shù)的影響,T1和T3處理隨施藥量的增加而依次增加(P值分別為0.010、0.009),T2處理的3個施藥量之間果枝臺數(shù)無顯著差異(P=0.058)。對結(jié)蕾數(shù)和有效結(jié)鈴數(shù)的影響,3種施藥處理均隨施藥量的增加而增加,其中,T2和T3處理的中、高施藥量之間結(jié)蕾數(shù)差異不顯著(P值分別為0.075、0.133),T2施藥量18.0 kg/hm2、24.0 kg/hm2蕾數(shù)分別為15.23、15.63,T3施藥量22.5 kg/hm2和30.0 kg/hm2蕾數(shù)為16.23、16.60。總體上,各施藥處理均表現(xiàn)為隨施藥量的增加對棉花的促生增產(chǎn)效果顯著增加。

    2.3 不同施藥處理對棉田土壤微生物數(shù)量的影響

    通過對棉花耕層土壤中微生物的分離計數(shù),研究發(fā)現(xiàn),較不施藥處理,3種生物藥劑隨水滴施后土壤中細菌和放線菌數(shù)量顯著增加(P值分別為0.008、0.035),而真菌數(shù)量顯著降低(P=0.017)(表4)。T1處理土壤中細菌數(shù)量增加比例顯著高于T2和T3,T3處理土壤真菌數(shù)量降低最明顯。表明生物藥劑施入土壤后豐富了土壤微生物菌群結(jié)構(gòu)。

    表2 不同施藥處理下棉花黃萎病的發(fā)病率、病情指數(shù)和防病效果Table 2 Disease incidence and disease severity and control efficiency of different biological agents application against cotton Vertilillium wilt

    注:同列不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。下同。

    Note:Vertical bars labeled with different lowercase letters are significant difference(P<0.05).The same below.

    表3 不同施藥處理下棉花生長表現(xiàn)及產(chǎn)量因子變化Table 3 Changes of different biological agents application on cotton growth and production

    每種藥劑不同的施藥量對土壤微生物數(shù)量的影響也顯著不同。T1處理隨著施藥量的增加,細菌數(shù)量分別增加43.74%、50.33%,54.98%,放線菌數(shù)量分別增加11.36%、28.57%、39.06%,真菌數(shù)量分別降低43.52%、46.30%、54.63%,施藥量的增加對土壤真菌數(shù)量的影響顯著(P=0.025)。T2處理土壤細菌和真菌數(shù)量隨著施藥量的增加而顯著增加,而施藥量為18.0 kg/hm2的放線菌數(shù)量高出其他施藥量近2倍,施藥量18.0 kg/hm2對黃萎病的防效顯著高于15.0 kg/hm2和24.0 kg/hm2,可能與土壤放線菌數(shù)量的顯著增加密切相關(guān)。T3處理土壤細菌、放線菌和真菌的數(shù)量增減變化與T1處理趨勢相同,且不同施藥量之間差異顯著。

    表4 不同施藥處理下0~15 cm土層土壤微生物數(shù)量變化Table 4 Changes of different biological agents application on soil microbial quantity at 0-15 cm soil layer

    3 討 論

    本試驗結(jié)果顯示,3種生物藥劑枯草芽孢桿菌劑、木霉菌劑和“99植?!痹诿藁ㄉ捌陔S水滴施后對黃萎病的防病效果顯著提高,全生育期平均防效分別達到52.05%、50.33%和72.46%,但并不都是隨施藥量的增加而增加。其中,枯草芽孢桿菌劑處理黃萎病的發(fā)病率、病指隨施藥量增加顯著降低,防病效果明顯增加,在45.0 kg/hm2的高施藥量下可達到59.23%,符合一般的施藥效應(yīng),而木霉菌劑施藥量18.0 kg/hm2的防病效果顯著高于15.0 kg/hm2和24.0 kg/hm2,“99植保”施藥量22.5 kg/hm2、30.0 kg/hm2之間差異并不明顯。目前,生產(chǎn)上用于防治棉花黃萎病的生物農(nóng)藥相對較少,報道較多的主要有枯草芽孢桿菌制劑、木霉菌制劑、“99植?!薄被烟撬?、植物激活蛋白、寧南霉素等,相關(guān)的藥效試驗數(shù)據(jù)顯示,不同的植棉區(qū)因土壤環(huán)境等不同,生物藥劑的施藥方式不同,在施藥量上存在顯著差異[20, 25-30]。生物藥劑以滴灌的方式隨水施入土壤,合適的施用量對于藥效作用的發(fā)揮尤為關(guān)鍵。生物藥劑尤其是微生物菌劑,如果用量過少,藥劑本身的抗病菌不能穩(wěn)定繁殖并在根際微生物群落中占據(jù)優(yōu)勢地位,就無法與土壤病原菌形成有效競爭;如果施用量過多,勢必會對土壤其他有益菌群產(chǎn)生影響,也必然影響防病效果[21, 31]。另外,試驗還發(fā)現(xiàn),棉花生育前期防效明顯高于生育后期,原因可能是生防菌進入土壤并且生長繁殖,打破原有的土壤微生物菌群結(jié)構(gòu),但隨著時間的推移,這種被破壞的微生態(tài)平衡會趨于恢復(fù)正常[32]。

    本研究顯示,3種生物藥劑滴施后除棉花黃萎病害具有不同程度的防病效果外,對棉花的生長發(fā)育及產(chǎn)量也表現(xiàn)出一定的促進作用,尤其表現(xiàn)在果枝數(shù)和蕾鈴數(shù)的顯著增加,這種促生效果基本上與施藥量呈正相關(guān)。本試驗前期開展生物藥劑施用對土壤理化性狀的影響研究,發(fā)現(xiàn)滴施枯草芽孢桿菌劑、木霉菌劑和“99植保”后土壤有機質(zhì)含量分別增加33.91%、25.14%和45.29%。土壤有機質(zhì)是微生物生命活動的重要碳源,而土壤微生物是土壤養(yǎng)分分解和轉(zhuǎn)化的活性庫,表明生物藥劑滴施后促進土壤養(yǎng)分的釋放,養(yǎng)分隨棉花根系的生長會不斷向地上部分輸送,從而為地上植株的生長發(fā)育奠定物質(zhì)基礎(chǔ)[33]。

    本研究發(fā)現(xiàn),3種藥劑滴施后對土壤微生物結(jié)構(gòu)具有明顯改善作用,其中,土壤細菌數(shù)量隨施藥量的增加呈倍數(shù)增加,枯草芽孢桿菌劑和“99植?!碧幚黼S施藥量增加真菌數(shù)量有不同程度的降低、放線菌數(shù)量依次增加,施藥量為18.0 kg/hm2時木霉菌劑的放線菌數(shù)量高出其他施藥量的近2倍,而該施藥量的防病效果也顯著高于另外兩個施藥量。諸多學(xué)者研究表明,植物健康狀況與土壤微生物群落結(jié)構(gòu)變化密切相關(guān)[34-36]。生物藥劑施入土壤必然會引起土壤微生物數(shù)量變化,而土壤微生物之間,又通過錯綜復(fù)雜的作用,影響不同物種的增減消漲,從而間接影響地上植株的抗病性和生長代謝。

    4 結(jié) 論

    通過綜合分析棉花黃萎病防病率及防病效果、生長表現(xiàn)和土壤微生物數(shù)量變化,本試驗條件下3種生物藥劑隨水滴施對棉花防病促生大小依次為渝峰“99植?!?、“施倍健”哈茨木霉菌劑、枯草芽孢桿菌劑。渝峰“99植?!彪S施藥量的增加,棉田黃萎病發(fā)病率顯著降低、果枝數(shù)和蕾鈴數(shù)明顯增加,但施藥量22.5 kg/hm2與30.0 kg/hm2差異不大;“施倍健”哈茨木霉菌劑施藥量18.0 kg/hm2的防病效果顯著高于15.0 kg/hm2和24.0 kg/hm2,但18.0 kg/hm2與24.0 kg/hm2對棉花生長表現(xiàn)及增產(chǎn)效果差異不明顯;枯草芽孢桿菌劑的防病效果及促生作用隨施藥量的增加而顯著增加??紤]生物藥劑成本較高,所以生產(chǎn)中對于黃萎病害較為嚴重的棉田,建議3種生物藥劑的滴施用量為:渝峰“99植保”22.5 kg/hm2、“施倍健”哈茨木霉菌劑18.0 kg/hm2、枯草芽孢桿菌可濕粉劑45.0 kg/hm2。

    生物藥劑施入土壤藥效的發(fā)揮需要一定的周期,故合適的施藥時間很關(guān)鍵;另外,生物藥劑藥效較慢且不穩(wěn)定,單施成本較高。因此,滴施最佳時間以及不同生物藥劑與有機肥配施是今后的研究方向。

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