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    稻米來源鎘對生長期豬的生長特性及不同臟器組織鎘蓄積的影響

    2018-08-01 01:25:04夏耀耀黎俊馮澤猛龍次民曾昭英黃瑞林印遇龍
    生態(tài)毒理學(xué)報(bào) 2018年3期
    關(guān)鍵詞:中鎘蓄積稻米

    夏耀耀,黎俊,馮澤猛,龍次民,曾昭英,黃瑞林,印遇龍

    1. 動物營養(yǎng)生理與代謝過程湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,中國科學(xué)院亞熱帶農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所畜禽健康養(yǎng)殖研究中心,中國科學(xué)院亞熱帶農(nóng)業(yè)生態(tài)過程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,畜禽養(yǎng)殖污染控制與資源化技術(shù)國家工程實(shí)驗(yàn)室,湖南省畜禽健康養(yǎng)殖工程技術(shù)研究中心,農(nóng)業(yè)部中南動物營養(yǎng)與飼料科學(xué)觀測實(shí)驗(yàn)站,長沙 410125 2. 中國科學(xué)院大學(xué),北京100049 3. 湖南師范大學(xué)生命學(xué)院動物營養(yǎng)與人體健康實(shí)驗(yàn)室,長沙410081 4. 湖南寶東農(nóng)牧發(fā)展有限公司,邵陽422002 5. 湖南畜禽安全生產(chǎn)協(xié)同創(chuàng)新中心,長沙410128

    隨著我國工業(yè)化進(jìn)程的不斷加快,重金屬對農(nóng)業(yè)生產(chǎn)用地環(huán)境的威脅也日益嚴(yán)重[1-3]。據(jù)統(tǒng)計(jì),全球鎘年排放量約1.0×106t,并將繼續(xù)增長。鎘污染對人類健康和生態(tài)環(huán)境都有極大的危害。環(huán)境中鎘污染會降低植物產(chǎn)量,嚴(yán)重時(shí)會導(dǎo)致植物死亡[4-7]。對于動物和人類來說,鎘暴露可以抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的趨化和管狀結(jié)構(gòu)的形成,引發(fā)動脈粥樣硬化、高血壓、心肌病及血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷等多種心血管疾病[8];長期低劑量鎘接觸可對機(jī)體血液紅細(xì)胞、白細(xì)胞產(chǎn)生毒性,造成血淋巴細(xì)胞的DNA損傷,損害機(jī)體的免疫功能[9]。鎘進(jìn)入機(jī)體后,主要蓄積于肝、腎等器官中,可致大鼠機(jī)體肝過氧化氫酶和超氧化物歧化酶活力降低,肝臟還原型谷胱甘肽的含量減少,影響肝功能,產(chǎn)生氧化應(yīng)激[10];鎘在體內(nèi)蓄積還對哺乳動物的生殖系統(tǒng)具有毒性作用[11-12]。鎘米作為人類食品存在安全隱患,農(nóng)業(yè)工作者從栽培管理、品種選擇、鎘鈍化劑的使用等多種綜合措施入手,或多或少解決了部分鎘米問題,但鎘污染區(qū)的農(nóng)業(yè)生產(chǎn)仍然需要改善。目前有關(guān)鎘的毒理研究多關(guān)注于其無機(jī)態(tài)[13-16],鎘米中的鎘以蛋白結(jié)合態(tài)形式存在,其毒性可能有異于無機(jī)狀態(tài),其對動物的生長代謝是否產(chǎn)生明顯的負(fù)面影響以及蛋白結(jié)合態(tài)鎘在生物體內(nèi)如何遷移、分配鮮有研究。因此,本研究探究稻米來源鎘在豬體內(nèi)的蓄積與分配規(guī)律,并確定其對生長期豬生長代謝的影響,評估稻米來源鎘對生長期豬的毒害程度具有重要現(xiàn)實(shí)意義。

    1 材料與方法(Materials and methods)

    1.1 試驗(yàn)材料

    液相質(zhì)譜聯(lián)用儀(5500 Q TRAP LC-MS/MS,美國,AB公司)和電感耦合等離子體質(zhì)譜儀(ICP-OES720,日本,Agilent公司)。

    1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼糧

    試驗(yàn)組鎘超標(biāo)稻米購自鎘污染區(qū)農(nóng)戶,鎘含量(0.75±0.06) mg·kg-1(n=6);對照組同品種稻米從非污染區(qū)農(nóng)戶購得,鎘含量(0.19±0.01) mg·kg-1(n=6)。采用單因子試驗(yàn)設(shè)計(jì),選擇同批次二元雜(長白×大白)生長豬28頭(體重約30 kg),隨機(jī)分為體重沒有明顯差異的對照組和試驗(yàn)組。試驗(yàn)在湖南新五豐股份有限公司永安分公司豬場同個豬舍進(jìn)行(分生長和育肥2個階段)。參考NRC(2012)配制生長期豬基礎(chǔ)飼糧,組成及營養(yǎng)水平見表1。配合飼料鎘含量對照組(0.15±0.01) mg·kg-1(n=6);試驗(yàn)組(0.55±0.04) mg·kg-1(n=6)。單欄飼養(yǎng),自由采食、飲水,生長階段飼喂至均重達(dá)60 kg,生長育肥全階段飼喂至均重達(dá)90 kg。

    1.3 樣品采集

    生長階段試驗(yàn)豬空腹均重達(dá)約60 kg時(shí),每組選6頭進(jìn)行心臟放血屠宰;生長育肥階段試驗(yàn)豬空腹均重達(dá)約90 kg時(shí),在每組余下8頭于屠宰場電暈后再進(jìn)行心臟放血屠宰,分別采集樣品。用肝素管收集血液,4 ℃靜置2 h后,3 500 r·min-1離心10 min,取上清得血漿,-20 ℃保存。分別取肝、腎臟和背最長肌各50 g于-20 ℃保存,待測游離氨基酸含量。取心、肝、脾、肺、腎、胃、小腸、大腸、背肌、腿肌、皮、脂肪、骨頭各200 g于-20 ℃保存,待測鎘的含量。

    1.4 指標(biāo)檢測與測定方法

    1.4.1 生長特性

    根據(jù)試驗(yàn)豬初始體重/%(IW/%)、末重/%(FW/%)、每天記錄耗料量及試驗(yàn)天數(shù)計(jì)算平均日增重/g(ADG/g),平均日采食量/g(ADFI/g),料肉比(F/G)。

    1.4.2 游離氨基酸

    各組織中游離氨基酸的檢測利用LC-MS/MS,參照文獻(xiàn)方法進(jìn)行[17]。

    1.4.3 鎘含量檢測

    樣品中鎘含量的檢測嚴(yán)格按照國標(biāo)法食品中金屬元素檢測標(biāo)準(zhǔn)(鎘 GB 5009.15—2014);利用720系列ICP-OES進(jìn)行。

    1.5 數(shù)據(jù)處理與分析

    表1 試驗(yàn)飼糧組成及營養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))Table 1 Ingredient and nutrient levels of basal diet (dry mass basis)

    注:a預(yù)混料為每千克飼糧提供。生長期:維生素A,1 300 IU;維生素D3,150 IU;維生素E,11 IU;維生素B1,1.0 mg;維生素B6,1.0 mg;葉酸,0.3 mg;生物素,0.05 mg;尼克酸,30 mg;泛酸,7.0 mg;氯化膽堿,0.3 mg;NaCl,1.0 g;銅,4.5 mg;鐵,100 mg;鋅,80 mg;錳,3.0 mg;碘,0.14 mg。育肥期:維生素A,1 300 IU;維生素D3,150 IU;維生素E,11 IU;維生素B1,1.0 mg;維生素B6,1.0 mg;葉酸,0.3 mg;生物素,0.05 mg;尼克酸,30 mg;泛酸,7.0 mg;氯化膽堿,0.3 mg;NaCl,1.0 g;銅,4.0 mg;鐵,60 mg;鋅,50 mg;錳,2.0 mg;碘,0.13 mg。b計(jì)算值。Note:aPremix provided the following per kilogram of the diet. Growth period: Vitamin A, 1 300 IU; Vitamin D3, 150 IU; Vitamin E, 11 IU; Vitamin B1, 1.0 mg; Vitamin B6, 1.0 mg; Folic acid, 0.3 mg; Biotin, 0.05 mg; Nicotinic acid, 30 mg; Pantothenic acid, 7.0 mg; Choline chloride, 0.3 mg; NaCl, 1.0 g; Cu, 4.5 mg; Fe, 100 mg; Zn, 80 mg; Mn, 3.0 mg; I, 0.14 mg. Fattening period: Vitamin A, 1 300 IU; Vitamin D3, 150 IU; Vitamin E, 11 IU; Vitamin B1, 1.0 mg; Vitamin B6, 1.0 mg; Folic acid, 0.3 mg; Biotin, 0.05 mg; Nicotinic acid, 30 mg; Pantothenic acid, 7.0 mg; Choline chloride, 0.3 mg; NaCl, 1.0 g; Cu, 4.0 mg; Fe, 60 mg; Zn, 50 mg; Mn, 2.0 mg; I, 0.13 mg.bCalculated values.

    2 結(jié)果(Results)

    2.1 稻米來源鎘對生長期豬生長特性的影響

    與對照組相比,生長期豬飼糧中添加稻米來源鎘后,ADFI、ADG及F/G均不存在顯著差異(P>0.05)(表2)。

    2.2 稻米來源鎘對生長期豬組織中游離氨基酸含量的影響

    生長期豬飼喂含有稻米來源鎘飼糧后,與對照組相比,除肌肉中賴氨酸含量顯著降低外(P<0.05),血漿、肝臟、腎臟中各游離氨基酸含量均無顯著差異(P>0.05) (表3和4)。

    2.3 稻米來源鎘在生長期豬體內(nèi)的蓄積規(guī)律

    與對照組相比,無論生長階段,還是生長育肥全階段,飼糧中添加稻米來源鎘后,除肌肉、血漿中鎘蓄積量無顯著差異外(P>0.05),其他各內(nèi)臟器官中鎘蓄積量均顯著增高(P<0.05),皮和脂肪中均未檢出鎘;各組織中鎘蓄積量由多到少依次為:腎臟>肝臟>小腸>脾>肺>大腸>胃>血液>骨頭>心>腿肌>背肌>脂肪、皮;且腎臟、肝臟和脾臟中鎘的蓄積量隨著飼喂時(shí)間的延長而增加(表5)。

    表2 稻米來源鎘對生長期豬生長特性的影響Table 2 Effects of cadmium supplied via cadmium contaminated rice on the growth performance of growing-finishing pigs

    表3 稻米來源鎘對生長期豬(30~90 kg, n=8)血漿、肌肉中游離氨基酸含量的影響Table 3 Effects of cadmium supplied via cadmium contaminated rice on free amino acids for the plasma and muscle of growing-finishing pigs (30-90 kg, n=8)

    注:與對照組相比,不同字母表示差異顯著(P<0.05),下同。Note: Compared with control, different letters indicate significant differences (P<0.05). The same below.

    表4 稻米來源鎘對生長期豬(30~90 kg,n=8)肝臟、腎臟中游離氨基酸含量的影響Table 4 Effects of cadmium supplied via cadmium contaminated rice on free amino acids for the liver and kidney of growing-finishing pigs (30-90 kg, n=8)

    表5 稻米來源鎘在生長期豬體內(nèi)的沉積規(guī)律Table 5 The accumulation of cadmium supplied via cadmium contaminated rice in growing-finishing pigs

    注:“ND”表示未檢出;“—”表示未檢測。Note: “ND” means no results detected; “-” means no detection.

    3 討論(Discussion)

    戴清文等[18]的研究表明,在動物飼糧中添加無機(jī)鎘,會降低動物的生長特性,但是對于引起動物生長特性下降的確切飼糧鎘含量,觀點(diǎn)不一。斷奶仔豬飼糧中添加3 mg·kg-1鎘對其生長發(fā)育和料重比無明顯影響,而添加50 mg·kg-1鎘則導(dǎo)致豬生長緩慢。生長育肥豬飼糧中隨著鎘含量的增多,采食量和日增重相應(yīng)降低[19]。Combs等[20]報(bào)道,在山羊飼糧中分別添加10.4、18.0和28.5 mg·kg-1的鎘,飼喂125 d,期間生長特性并未下降。Bundscherer等[21]的研究表明,肉雞飼糧中添加50 mg·kg-1鎘,對肉仔雞身體狀況和生長速度亦無顯著影響。飼糧中添加50、300 mg·kg-1的鎘對北京鴨體重未產(chǎn)生顯著影響[22]。Lisk等[23]指出,生長育肥階段(17.6~90 kg)飼喂鎘含量為0.24 mg·kg-1的玉米來源鎘飼糧后試驗(yàn)豬的ADG、F/G和ADFI均無明顯變化。我國飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定全價(jià)配合飼料中鎘含量不得超過0.50 mg·kg-1。本試驗(yàn)中,試驗(yàn)組鎘含量約0.55 mg·kg-1,全部來源于超標(biāo)稻米,生長特性試驗(yàn)結(jié)果表明,試驗(yàn)豬的生長特性及采食量并沒有得到明顯的抑制,這與Lisk等[23]的研究結(jié)果一致。可見,稻米來源鎘對豬生長健康狀況的影響與無機(jī)鎘效果類似,即隨劑量而異,高劑量時(shí)降低豬的生長速度,而低劑量時(shí)不產(chǎn)生顯著的抑制作用。

    有研究表明,鎘脅迫導(dǎo)致家蠅3日齡幼蟲血淋巴中游離氨基酸組成發(fā)生變化(如丙氨酸降低、賴氨酸升高)[24]。大鼠鎘中毒時(shí),血漿中絲氨酸和異亮氨酸含量顯著降低[25]。本試驗(yàn)中,肌肉、肝臟、腎臟及血液中游離氨基酸含量,與對照組相比,除肌肉中賴氨酸顯著降低外(P<0.05),其余氨基酸都沒有明顯變化(P>0.05),推測低劑量鎘對氨基酸代謝影響不大,但導(dǎo)致肌肉賴氨酸下降的具體原因有待進(jìn)一步研究。

    動物機(jī)體為了維持正常的生命活動,必須從飼糧中吸收一些微量金屬元素,如銅、鐵、錳、鋅等。它們直接參與機(jī)體組成以及影響酶的活性,與許多疾病的發(fā)生、發(fā)展以及動物生長發(fā)育過程都有著非常重要的關(guān)系。這些金屬元素在機(jī)體內(nèi)的吸收、蓄積及排出過程也具有一定的互作關(guān)系,鎘作為機(jī)體非必需元素,可以借助這些必需元素的吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)通道進(jìn)入機(jī)體[26-27]。

    吳景初等[28]研究發(fā)現(xiàn),鎘在染毒大鼠體內(nèi)的分布為:腎>肝>胰>心>肺>毛,血液及骨中含量均較低。凡強(qiáng)勝[19]的研究報(bào)道,生長期豬飼糧中添加一定劑量的無機(jī)鎘,其在體內(nèi)的蓄積分配規(guī)律為:腎臟>肝臟>肌肉,三者含量之間存在顯著正相關(guān)關(guān)系。鎘在動物體內(nèi)的累積隨飼喂時(shí)間增長而增加,肝臟和腎臟中鎘濃度隨著飼糧中鎘含量的增加而增加[29]。機(jī)體在鎘暴露下可迅速生成金屬硫蛋白(MT),飼糧中的鎘可與體內(nèi)MT形成Cd-MT復(fù)合物,而該復(fù)合物能大量轉(zhuǎn)運(yùn)至肝腎[30-31]。本試驗(yàn)中對照組和試驗(yàn)組相比,各臟器和組織中鎘的蓄積量除脂肪、皮、肌肉和血液中無顯著差異外(P>0.05),其他組織均存在明顯差異(P<0.05),尤其以腎臟和肝臟中蓄積最多,可能原因是肝腎可以快速大量合成MT使鎘得以大量蓄積,所以腎臟和肝臟成為鎘蓄積的重要靶器官,這與前面所述試驗(yàn)的研究結(jié)果基本一致。總的來說,在生長期豬飼糧中添加稻米來源鎘(0.55 mg·kg-1)后,鎘在腎臟(2.66 mg·kg-1)中沉積最多,超過國家食品標(biāo)準(zhǔn)(1.00 mg·kg-1),肝臟(0.40 mg·kg-1)次之,略低于國家食品標(biāo)準(zhǔn)(0.50 mg·kg-1);肌肉(0.003 mg·kg-1)、脂肪(未檢出)沉積量很少,遠(yuǎn)低于國家食品標(biāo)準(zhǔn)(0.10 mg·kg-1)。

    因此,生長期豬飼糧中添加稻米來源鎘(0.55 mg·kg-1)后,不影響主流食用組織的食用安全性,其毒害作用主要體現(xiàn)在肝臟和腎臟,故需對肝腎做無害化處理。

    致謝:感謝包顯穎、陳頎等在本試驗(yàn)進(jìn)行過程中給予的熱情幫助。

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