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    對綿羊結(jié)核病病原體的研究

    2018-08-01 02:19:08姜德相王立文董桂紅
    畜牧獸醫(yī)科技信息 2018年7期
    關(guān)鍵詞:抗酸羅氏綿羊

    姜德相,王立文,董桂紅

    (吉林省畜牧業(yè)學(xué)校,吉林 白城 137000)

    以往認為綿羊?qū)Y(jié)核病原體易感性差,臨床病歷不常見,很少有人報道和進行深入研究。由于近些年養(yǎng)羊業(yè)特別是育肥羊行業(yè)的興起,飼養(yǎng)規(guī)模和密度增大使結(jié)核病在羊群中進行傳播,同時還威脅著人類的身心健康。作者通過臨床解剖收集27只具有典型病理變化的病歷進行歸納總結(jié),希望能夠認清結(jié)核病在綿羊群中的流行情況并對結(jié)核病防治提供幫助。

    1 綿羊結(jié)核病的實驗室診斷和病原體類型

    目前,按結(jié)核病病原體對易感動物的易感性,將其分為人型、牛型和禽型。關(guān)于綿羊結(jié)核病病原體沒有具體表述,作者把近5年來自不同飼養(yǎng)場臨床送檢的27只病理變化典型的實驗動物進行實驗室診斷和分型。

    1.1 實驗室診斷

    1.1.1 直接厚涂片法

    (1)制片 取疑似結(jié)核結(jié)節(jié)內(nèi)的干酪樣、膿樣標本0.05~0.1g,放于玻片中央,涂成20mm×25mm橢圓形,取不同結(jié)核結(jié)節(jié)至少涂2張片子,進行微火固定。其中有化膿性腹膜炎的病歷,取膿樣標本也同時進行檢測。

    (2)染色 滴加5%石炭酸復(fù)紅液于玻片上,加溫至有蒸汽出現(xiàn)后放置5~10min,水洗。之后,加5%鹽酸酒精脫色數(shù)次,至淡紅色為止,水洗,加美蘭復(fù)染2~3min,水洗,自然干燥后鏡檢。

    (3)鏡檢及報告 鏡檢至少檢查100個視野,不得少于3~4min,未找到抗酸菌者為Z(-)。100個視野找到抗酸菌1~2條者,實報菌數(shù)。100個視野找到抗酸菌3~9條者報O(+)。100個視野找到抗酸菌10~39條者報T(++)。每個視野找到抗酸菌~10條者報N(+++)。每個視野找到抗酸菌10條以上者報 M(++++)。

    (4)統(tǒng)計結(jié)果 以時間先后排序(干:代表干酪物,膿:代表膿汁)見表1。

    (5)結(jié)果 27只臨床病理變化典型病例,檢出陽性率達77.8%,可見綿羊?qū)Y(jié)核病的病原體易感性較強。

    1.1.2 分離培養(yǎng)

    (1)培養(yǎng)基 常用于結(jié)核桿菌的分離培養(yǎng)基有改良羅氏培養(yǎng)基、酸性改良羅氏培養(yǎng)基、丙酮酸培養(yǎng)基和小川培養(yǎng)基。

    (2)病料預(yù)處理法 酸處理法:此法適用改良羅氏培養(yǎng)基和丙酮酸培養(yǎng)基。取痰液標本或其它標本(剪碎后研磨)加2~4倍量4%硫酸液,室溫處理20min,其間振蕩2~3次,促進液化。堿處理法:取標本加2~4倍量的2%NaOH溶液,37℃處理30min。此法適用于酸性改良羅氏培養(yǎng)基和小川培養(yǎng)基。

    (3)接種 取混勻的消化的病料液0.1mL,均勻地接種于培養(yǎng)基斜面上,每份標本至少接種兩管。接種后,將試管斜放,1d后,豎立直于試管架上。也可以將消化的病料離心后,取沉淀接種效果更好。

    (4)結(jié)果判定 接種后置37℃培養(yǎng),每周觀察一次,陽性者隨時報告,陰性者在8周時報告之。陽性者報告抗酸菌培養(yǎng)陽性或以菌落數(shù)報告。菌落數(shù)占據(jù)培養(yǎng)基面1/4以下者為(+);菌落數(shù)占據(jù)培養(yǎng)基面1/4以上,1/2以下者為(++);菌落數(shù)占據(jù)培養(yǎng)基面1/2以上、3/4以下者為(+++);菌落數(shù)占據(jù)全斜面者為(++++)。陰性者報告抗酸性菌培養(yǎng)陰性。

    表1 涂片鏡檢結(jié)果

    表2 菌型鑒定

    根據(jù)結(jié)核分枝桿菌和其他分枝桿菌的鑒別依據(jù):結(jié)核分枝桿菌(L-J:+ PNB:- T2H:+),牛分枝桿菌(L-J:+ PNB:- T2H:-),其他分枝桿菌(L-J:+ PNB:+ T2H:+)。

    1.2 菌型鑒定

    分離出抗酸性菌后,為了確定是哪一個型的分枝桿菌,則必須進一步進行鑒定。

    鑒定培養(yǎng)基:改良羅氏培養(yǎng)基(L-J)。對氨基苯甲酸培養(yǎng)基(PNB),按0.5mg/mL(最終濃度)的PNB加入小川培養(yǎng)基。噻吩二羧酸酰肼培養(yǎng)基(T2H),取T2H 50mg,加入蒸餾水100mL中,使成為500μg/mL,取其1mL加入小川培養(yǎng)基中,混勻分裝,凝固滅菌,最終濃度5μg/mL。

    將21個陽性菌株制成懸液,按濕菌10μm重接種于鑒定培養(yǎng)基。觀察結(jié)果見表2。

    經(jīng)過鑒別培養(yǎng)基培養(yǎng)后的結(jié)果和其他分枝桿菌鑒別對照,發(fā)現(xiàn)21個結(jié)核陽性病歷均為牛型分枝桿菌感染,因為這些病歷是來自不同時間,歷時5年,又來自不同地區(qū)和不同飼養(yǎng)場搜集,整理,經(jīng)過實驗獲得,可以說明綿羊的結(jié)核病基本上都是由牛型分枝桿菌的病原體感染造成的。

    1.3 展望

    加強對綿羊結(jié)核病調(diào)查和研究,摸清病原的特點,探索病原的流行和演化規(guī)律,制定相應(yīng)的防治方法;加強對綿羊結(jié)核病耐藥機制的研究,研制新型抗結(jié)核藥物和新型疫苗。

    隨著綿羊結(jié)核病檢測水平的不斷提高、預(yù)警預(yù)報監(jiān)測體系的不斷完善和牛分枝桿菌功能基因組研究的深入,必將為綿羊結(jié)核病的防治帶來更多的機遇,但也面臨著巨大的挑戰(zhàn),對綿羊結(jié)核病的研究仍然是任重而道遠。

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