蜜蜂病毒病診斷

中國農業(yè)科學院蜜蜂研究所，北京100093

病毒是一種由核酸與蛋白質或僅由蛋白質構成的非細胞型病原。病毒個體微小，結構簡單，完全寄生。蜜蜂病毒病具有感染不易發(fā)現(xiàn)，潛伏期長等特點。大部分蜜蜂病毒都是小RNA病毒，屬于小核糖核酸RNA病毒科。由于其病毒的感染具有較強的潛伏性，具有較強的存活能力，因此對蜜蜂的健康構成極大的危害。至今已發(fā)現(xiàn)超過20種病毒能夠感染蜜蜂并具有較強的致病性。本文只介紹我國分布最廣及危害較為嚴重的主要蜜蜂病毒。

一、蜜蜂卷翅病毒

1.病原

蜜蜂卷翅病毒能引起蜜蜂的翅發(fā)育不全或畸形，無法呈現(xiàn)正常平整狀態(tài)，造成蜜蜂不能飛翔。蜜蜂卷翅病毒為正義單鏈RNA病毒，屬于傳染性軟腐病病毒屬。現(xiàn)全球已獲得超過100個毒株，但其毒株的致病性具有明顯的差異性。

2.癥狀與判別方法

圖1 感染蜜蜂卷翅病毒的典型癥狀

該病毒主要感染新出房的蜜蜂工蜂，其翅是不完整或畸形的，不能飛翔，在巢門前爬行。其最典型癥狀為蜜蜂成蜂的翅殘缺不完整（見圖1），其體形變小，失去正常顏色，而與卷翅病毒最為緊密的還有另一個病害，狄斯瓦螨，俗稱大蜂螨。一般情況下，此類病毒的蜂群一定能夠發(fā)現(xiàn)大蜂螨的危害。剝開幼蟲體表或蛹巢房能發(fā)現(xiàn)蜂螨在幼蟲或蛹的身體上，如發(fā)現(xiàn)螨害嚴重，大多時候已經感染卷翅病毒。顯微鏡下能觀察到形狀為二十面體的大小為30nm的病毒粒子。

3.主要防治措施

由于此病毒能與螨緊密互作，在上一年越冬前處理螨的過程中，一定要徹底殺螨。在卷翅病毒感染早期可以采取殺螨或換王的方式，阻止病毒進一步傳播與擴散。也可以將弱群合并，強群飼養(yǎng)，增加蜂群的整體抵抗力。盡量減少蜂具及蜂糧在蜂群間的共用率，尤其是感染嚴重的蜂群的巢框、巢脾、蜜脾及蜂刷不要放入其他健康或染病較輕的蜂群，以防帶入感染源。當卷翅病毒感染非常嚴重時，可將整箱蜜蜂進行搬離原場（也要遠離其他蜂箱或蜂場）或銷毀。同時，為了整體蜂群的健康，不能判別癥狀時禁止亂用藥。蜜蜂保護研究室已開發(fā)相關藥物，正在中試階段。

二、慢性麻痹病毒

蜜蜂慢性麻痹病毒是主要感染成蜂的一種病毒病，近幾年對蜂群的影響更為嚴重，此病毒有兩種不同的感染型，即黑亮型和大肚型。

（一）黑亮型

1.病原

蜜蜂慢性麻痹病毒也是一種正義單鏈小RNA病毒，目前由于慢性麻痹病毒的結構與功能尚未完全解析，并且其病毒粒子的大小與形狀也與其他蜜蜂小RNA病毒不相近，因此，國際病毒分類委員會在其病毒的種屬分類上至今未歸入任何科屬。其毒株基因組主要是由兩個RNA分子片段組成，為RNA 1與RNA 2。

圖2 感染蜜蜂慢性麻痹病毒的典型癥狀（黑亮型）

圖3 感染蜜蜂慢性麻痹病毒的典型癥狀（大肚型）

2.癥狀與判別方法

該病毒主要感染成蜂，在過去主要發(fā)生于春末或秋初，現(xiàn)在發(fā)生并流行于春初秋末或冬初。其典型癥狀為背腹部油黑發(fā)亮，絨毛脫落，感染此病毒的蜂主要在蜂箱門前及附近進行爬行，不能飛翔，或大部分在巢框上爬行。顯微鏡下的病毒粒子為不規(guī)則的大小為28nm左右。

3.主要防治措施

由于病毒感染多數(shù)發(fā)生于隱性感染，發(fā)現(xiàn)典型癥狀時，已危害嚴重。在防治上，要注意保溫及干燥，尤其是早春時，加強保溫。另外，要注意飼料及蜂糧的衛(wèi)生，當飼喂花粉時應先經過輻照或其他類似的方法殺菌。同時，在感染初期如發(fā)現(xiàn)有爬蜂但癥狀不明顯時，可拉出蜜蜂的中腸，觀察其中腸是否正常，如發(fā)現(xiàn)環(huán)紋消失或發(fā)現(xiàn)微孢子蟲感染，要及時處理蜂群。再之，發(fā)現(xiàn)蜂群感染嚴重，及時換王或銷毀嚴重蜂群。蜜蜂保護研究室已開發(fā)相關藥物，正在中試階段。

（二）大肚型

1.病原

其病原相同于黑亮型。由于其病毒的分子生物學特點、基因結構及分類尚未完全理解，因此不能判斷其導致不同癥狀的原因。

2.癥狀與判別方法

大肚型是此類感染蜜蜂的典型癥狀。感染的病蜂腹部明顯膨大，不能消化，在巢門前或蜂箱附近緩慢爬行，不能飛翔，在爬行過程中翅和身體經常性顫抖，有時一些蜂會在蜂箱頂部結團，拉出中腸后可見黃色液體、黑褐色或水樣狀液體。

3.主要防治措施

主要防治措施等同于黑亮型。

三、黑蜂王臺病毒

1.病原

蜜蜂黑蜂王臺病是由黑蜂王臺病毒引起的一種小RNA病毒。在病毒分類學上，屬于雙順反子病毒科，蟋蟀麻痹病毒屬，其病毒粒子大小為30 nm。

2.癥狀與判別方法

最初發(fā)現(xiàn)該病時，在蜂王幼蟲的巢房里，死亡的幼蟲為黑色，其巢房也為深黑色。黑蜂王臺病毒于1977年第一次被分離自死蜂王幼蟲和預蛹。在感染此病毒的初期，染病的幼蟲呈現(xiàn)灰黃色，然后呈囊狀型，類似于囊狀幼蟲病的癥狀。黑蜂王臺病毒與蜜蜂微孢子蟲及狄斯瓦螨緊密相關，當發(fā)現(xiàn)有螨或拉開蜜蜂中腸可見微孢子，要及時防治。

圖4 感染黑蜂王臺病毒的典型癥狀

3.主要防治措施

近年來，由于黑蜂王臺病在我國流行范圍較廣，危害涉及面較大，并且大部分情況下均建立隱性持續(xù)性感染，當遇到其他壓力因素，如蜂螨或微孢子蟲，會出現(xiàn)大量爬蜂的現(xiàn)象。當前蜂群實際感染黑蜂王臺病相當普遍，工蜂尤其突出，并且癥狀不如以前那樣明顯，幼蟲感染的幾率相對小。當發(fā)現(xiàn)疑似蜂群可將蜂樣送檢，采用分子手段進行檢測進一步確認。首先，發(fā)現(xiàn)巢房與幼蟲有變黑色的癥狀，應立即換王，將原有幼蟲脾移出，隔離或銷毀。其次重點檢查蜂群是否感染微孢子蟲，如果鏡檢發(fā)現(xiàn)感染了微孢子蟲，立即采取飼喂檸檬酸或米醋等防治。同時，在飼喂花粉時，一定要將花粉先消毒，尤其是春季，濕冷天氣，必須保證花粉的衛(wèi)生質量，保證其巢箱的干燥。

四、蜜蜂絲狀病毒

1.病原

蜜蜂絲狀病毒是感染蜜蜂的DNA病毒，在病毒學分類上暫未分類。在本研究團隊的前期調查研究過程中，發(fā)現(xiàn)蜜蜂絲狀病毒在蜂群中有較高的流行率，而且大部分為隱性感染。該病毒于1977年首次于美國發(fā)現(xiàn)，其形狀呈線或絲狀，病毒粒子大小為0.3～0.47 μm。

2.癥狀與判別方法

最初發(fā)現(xiàn)該病毒是在爬蜂中，感染此病毒的蜜蜂不能飛翔，在巢門口附近亂爬，多發(fā)病于春季或秋季。當取少量蜜蜂血淋巴，其狀態(tài)呈乳白色血淋巴，當置于顯微鏡下，可見血淋巴充滿了小顆粒，這些小顆粒的形狀從圓形到棒形，含有細絲。

3.主要防治措施

由于蜜蜂的DNA病毒相對RNA病毒了解的太少，而且其基因組結構尚未完全解析?，F(xiàn)無有效的防控措施。

五、KaKugo病毒

1.病原

該病毒首次在日本防御工蜂的頭部分離獲得，屬于傳染性軟化病毒屬，粒子大小類似于卷翅病毒，約30 nm。

2.癥狀與判別方法

該病毒最明顯的特征是巢門口的守衛(wèi)蜂，尤其是注意觀察守衛(wèi)蜂的行為，如發(fā)現(xiàn)攻擊性較強的蜜蜂，多數(shù)為感染了此病毒。或者當管理人員檢查某一群蜂時，發(fā)現(xiàn)某一群蜂易攻擊人，尤其是在蜜、粉充足的情況下，具有較強攻擊性的蜂群很可能感染了此病毒。

3.主要防治措施

此病毒主要是由于感染蜜蜂的腦部神經基因的變化引起的，至目前為止，并無有效的防治藥物。另外，由于該病毒與卷翅病毒在遺傳結構上緊密相關，因此在飼養(yǎng)管理上，加強螨害的防治，如發(fā)現(xiàn)蜂螨危害，立即采取藥物治療蜂螨。

六、以色列急性麻痹病毒

1.病原

以色列急性麻痹病毒于2002年首次在以色列死蜂中分離到，屬于雙順反子病毒科。病毒粒子大約28～30 nm，二十面體狀。在全世界現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)20個以上的毒株，不同毒株間的致病力差異性較大。

2.癥狀與判別方法

感染以色列急性麻痹病毒的蜜蜂，其典型癥狀為顫抖，亂爬，不能飛翔，進而蜜蜂出現(xiàn)麻痹癥狀，尤其是清晰可見蜜蜂的足麻痹顫抖，進而身體變黑，體毛脫光。

圖5 蜜蜂絲狀蜜蜂病毒的形態(tài)（A）及感染蜜蜂的典型癥狀（B、C）

圖6 感染Kakugo病毒的典型行為特征（引自《Tomoko,et al.2004》）

圖7 感染囊狀幼蟲病毒的典型癥狀

3.主要防治措施

雖然以色列急性麻痹病毒在我國并不是危害蜜蜂的主要病原，但是在最近的病原調查中發(fā)現(xiàn)，感染以色列急性麻痹病毒的感染率不斷提高。最主要的防治措施是加強飼養(yǎng)管理，強群飼養(yǎng)，增加群體抵抗力。其次是飼喂dsRNA為主要制劑的生物防治藥物，但是其成本較高。蜜蜂保護研究室已開發(fā)相關藥物，正在中試階段。

七、中華蜜蜂囊狀幼蟲病毒

1.病原

中華蜜蜂囊狀幼蟲病毒是囊狀幼蟲病毒的一個毒株。囊狀幼蟲病毒主要有西方蜜蜂囊狀幼蟲病毒、中蜂囊狀幼蟲病毒與泰國囊狀幼蟲病毒。該病毒粒子呈球形，粒子大小約為30nm。在我國中蜂囊狀幼蟲病對中蜂產業(yè)構成嚴重威脅。

2.癥狀與判別方法

該病毒最初1971年在我國廣東發(fā)生并流行。此病毒最典型的癥狀是導致感染的幼蟲具有囊狀水樣外觀。而感染此病毒的幼蟲不能化蛹，蟲體的顏色是由白到淡黃，最后變成棕褐色而死亡。大日齡幼蟲在感染此病毒后，頭部上翹，體表失去光澤。另一個典型的癥狀是，整個子脾容易出現(xiàn)花子的現(xiàn)象。

3.主要防治措施

中蜂囊狀幼蟲病是當前中蜂最為嚴重的病害。當感染初期不嚴重時發(fā)現(xiàn)，可采取中草藥半枝蓮（50g）與金銀花（50g）煎熬后，將藥汁與糖水（1∶1）喂于蜜蜂，飼喂4～5次后觀察其治療效果，如果有效，再繼續(xù)飼喂2～3次。其次，在早春時，營養(yǎng)飼料必須充足，加強群勢，以強群為主，增加抵抗力，如分蜂群感染囊狀幼蟲病，應將多個弱群合并后組成強群飼養(yǎng)。如果仍無效時，應立即換王，改變子一代感染的情況。當發(fā)現(xiàn)蜂群感染此病毒非常嚴重時，子脾呈現(xiàn)幼蟲分布不均，花子現(xiàn)象特別厲害時，應隔離蜂群，將病群搬離原場，禁止將病群的子脾，巢框等設備移入健康群進行使用。蜜蜂保護研究室已開發(fā)相關藥物，正在中試階段。