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    曲霉菌感染對雛雞血液生理生化指標(biāo)的影響

    2018-07-28 02:19:16李新正肖曙光黃安群陳理盾宋玉萍張桂枝黃炎坤
    家畜生態(tài)學(xué)報 2018年7期
    關(guān)鍵詞:曲霉菌轉(zhuǎn)氨酶懸液

    李新正,肖曙光,黃安群,陳理盾,宋玉萍,張桂枝,黃炎坤

    (河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院 動物科技學(xué)院,河南 鄭州 450046)

    禽曲霉菌病是一種嚴(yán)重危害家禽生產(chǎn)的真菌性疾病[1],近年來因免疫抑制性疾病頻發(fā)以及臨床中大量使用抗生素引起曲霉菌感染頻發(fā),導(dǎo)致家禽死亡率增加。同時發(fā)病后機(jī)體產(chǎn)生霉菌毒素,引起免疫器官萎縮,免疫細(xì)胞數(shù)量減少,使機(jī)體抵抗體力下降,產(chǎn)生免疫失敗[2],易感其他疾病,且引起肝臟、腎臟機(jī)能受損,影響生長發(fā)育,降低養(yǎng)殖效益。曲霉菌病主要病原有煙曲霉、黃曲霉和黑曲霉等[3-4]。雞感染曲霉菌病后,因霉菌的增殖產(chǎn)生大量毒素,如黃曲霉毒素、玉米赤霉烯酮毒素、嘔吐毒素、T-2毒素及付馬毒素等[5],這些毒素引起肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞壞死,變性,膽管上皮細(xì)胞及纖維細(xì)胞增生,形成再生結(jié)節(jié)和脂肪肝,剖檢可見肝臟腫脹,黃染,呈斑駁狀,質(zhì)脆易碎。并能引起腎臟腫脹,尿酸鹽沉積等,同時肝功能和腎功能出現(xiàn)異常,如血液中谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶、堿性磷酸酶活性降低;球蛋白、白蛋白、非蛋白氮、肝糖原降低,尿素尿酸含量增加。因此研究曲霉菌感染對血液理化指標(biāo)影響,對判斷該病感染程度和該病的防控具有十分重要意義。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料

    1.1.1 14日齡健康海蘭褐蛋公雞80只,由鄭州某種雞場提供;新城疫低毒力活疫苗(IV系)購自哈藥集團(tuán)生物疫苗有限有限公司(生產(chǎn)批號201659,生產(chǎn)日期:20160921);曲霉菌孢子,由本實(shí)驗(yàn)室從病禽體內(nèi)分離培養(yǎng)并鑒定為煙曲霉菌,培養(yǎng)制成孢子懸液。

    1.1.2 儀器設(shè)備 Monarch全自動生化分析儀(美國實(shí)驗(yàn)儀器公司),Coulter JT-IR血細(xì)胞分析儀。

    1.2 試驗(yàn)方法

    1.2.1 煙曲霉菌孢子懸液制備 用金屬接種環(huán)挑取煙曲霉菌接種于沙氏瓊脂培養(yǎng)基上,37 ℃培養(yǎng)3 d,30 ℃培養(yǎng)3 d,用10 mL含有0.1%吐溫的PBS液沖洗瓊脂表面并收集孢子懸液,用8層無菌紗布過濾,將過濾后的懸液用含0.1%吐溫的PBS液清洗2次,然后轉(zhuǎn)入離心管中,3 500 r/min離心15 min,去除上清液,在顯微鏡下用血細(xì)胞計數(shù)板計數(shù),調(diào)整孢子懸液濃度為1.0×108/mL。

    1.2.2 試驗(yàn)分組 將14日齡80只海蘭褐商品代公雛雞,隨機(jī)分成2組,試驗(yàn)組從14日齡開始用制好的霉菌孢子懸液嗉囊注射1 mL,1次/d,連續(xù)注射3 d,接種后正常飼養(yǎng)管理,每日觀察精神狀態(tài)、采食、糞便和有無呼吸困難等癥狀并進(jìn)行記錄。對照組不接種。兩組的飼養(yǎng)管理措施和條件、衛(wèi)生防疫措施均相同。

    1.2.3 飼養(yǎng)管理與免疫 采用網(wǎng)上平養(yǎng)方式,前三周舍溫控制在32~35 ℃,雞舍內(nèi)濕度60%~65%。雞自由采食,自由飲水,正常免疫,對照組和試驗(yàn)組雞1日齡注射馬立克氏疫苗,7日齡新城疫疫苗點(diǎn)眼滴鼻,14日齡傳染性法氏囊疫苗飲水。按雞場的管理程序進(jìn)行飼養(yǎng)管理。

    1.2.4 稱重與采血 21日齡從試驗(yàn)組選擇典型臨床癥狀雞和對照組各抽取10只雞,空腹稱重,心臟采血5 mL置于含抗凝劑采血管和不含抗凝劑采血管中。凝血管待凝血后,3 000 r/min離心10 min,取上清液于-20 ℃保存,抗凝血放入4 ℃冰箱中待檢。

    1.2.5 測定項(xiàng)目 血液生理指標(biāo)項(xiàng)目:紅細(xì)胞總數(shù)(RBC)、血紅蛋白(HGB)、白細(xì)胞總數(shù)(WBC)、中間細(xì)胞數(shù)量(MID)、淋巴細(xì)胞數(shù)量(LYM)、粒細(xì)胞數(shù)量(GRA)、淋巴細(xì)胞比率(LR)、中間細(xì)胞比率(MXD)、單核細(xì)胞比率和血小板數(shù)量(PLT)。

    血液生化指標(biāo)項(xiàng)目:總膽紅素(TBIL)、間接膽紅素(IBIL)、直接膽紅素(DB)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)、谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(r-GT)和尿酸(UA)。

    1.2.6 數(shù)據(jù)處理 數(shù)據(jù)用SPSS15.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn),數(shù)據(jù)均采用Mean±SD表示。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 曲霉菌感染對雞只生長速度的影響

    由表1可知,兩組間差異極顯著(P<0.01),試驗(yàn)組比對照組雞體重減少18%,說明曲霉菌感染影響雞生長發(fā)育。

    表1 曲霉菌感染對雞只生長速度的影響Table 1 The influence of aspergillus infection on chicken growth

    注:肩標(biāo)小寫字母表示差異顯著(P<0.05),大寫字母表示差異極顯著(P<0.01)。下同。
    Note: Values with different lowercase superscripts show significant difference, different capital superscripts show extremely significant difference.The same below.

    2.2 曲霉菌感染對血液生理指標(biāo)的影響

    由表2可知,試驗(yàn)組白細(xì)胞總數(shù)、淋巴細(xì)胞數(shù)明顯高于對照組,且差異顯著(P<0.05);紅細(xì)胞、血紅蛋白濃度明顯低于對照組且差異顯著(P<0.05);試驗(yàn)組淋巴細(xì)胞比率、中間細(xì)胞比率、中間細(xì)胞、粒細(xì)胞、血小板含量明顯高于對照組,且差異極顯著(P<0.01);而血紅蛋白含量明顯低于對照組,且差異極顯著(P<0.01)。

    表2 曲霉菌感染對血液生理指標(biāo)的影響Table 2 The influence of aspergillus infection on blood physiological indexes

    2.3 曲霉菌感染對血液生化指標(biāo)指數(shù)的影響

    由表3可知,試驗(yàn)組谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶、氨酰轉(zhuǎn)肽酶、總膽紅素、直接膽紅素、間接膽紅素及尿酸指標(biāo)均高于對照組,差異顯著(P<0.05);而血清中總蛋白、白蛋白、球蛋白數(shù)量低于對照組且差異顯著(P<0.05)。

    表3 曲霉菌感染對血液生化指標(biāo)指數(shù)的影響Table 3 The influence of aspergillus infection on blood biochemical indexes

    3 討 論

    曲霉菌感染雛雞,引起急性肺水腫且產(chǎn)生煙曲霉毒素,使體溫升高,采食量下降,精神委頓、嗜睡,呼吸困難,拉稀等癥狀[6],除導(dǎo)致死亡率增高外,嚴(yán)重影響到雛雞生長發(fā)育。試驗(yàn)組體重比對照組低18%,且差異顯著,說明曲霉菌感染,直接影響雛雞生長發(fā)育。

    曲霉菌感染可引起發(fā)熱,采食量減少,羽毛松亂,拉稀,引起貧血[7]。試驗(yàn)中試驗(yàn)組紅細(xì)胞、血紅蛋白明顯低于對照組,說明曲霉菌感染引起貧血,這與試驗(yàn)中雛雞感染曲霉菌體重差異相一致。

    肝臟是家禽最大的腺體,是最重要的消化器官和機(jī)體新陳代謝的樞紐,肝臟的生理功能包括解毒功能、代謝功能、造血功能、分泌功能和免疫功能等[8],實(shí)驗(yàn)表明,曲霉菌感染引起雛雞血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶、氨酰轉(zhuǎn)肽酶、總膽紅素、直接膽紅素、間接膽紅素濃度增高,總蛋白、球蛋白、白蛋白明顯降低,說明曲霉菌感染可引起肝臟損傷和壞死,這與臨床曲霉病病例剖檢肝臟腫脹、出血、顏色發(fā)黃相一致。

    腎臟是動物的主要泌尿器官和排泄器官[9],曲霉菌感染可引起腎臟腫脹,尿酸鹽在腎臟排泄受阻,形成花斑腎,其中血清中尿酸含量是反映腎功能的主要指標(biāo)[6]。試驗(yàn)表明試驗(yàn)組尿酸明顯增高,說明曲霉菌感染對腎臟損傷嚴(yán)重。

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