離子液體輔助提取刺玫果中木犀草素與金絲桃苷的工藝研究

雷永平，鐘方麗，王曉林，陳 帥，陳鐸鑫

（吉林化工學(xué)院 化學(xué)與制藥工程學(xué)院，吉林 吉林 132022）

山刺玫屬于喜光的薔薇科小灌木，主要生長在雜木林及山坡灌木中，其果實稱為刺玫果，屬于可在保健食品中添加的中藥材。刺玫果系薔薇科薔薇屬植物山刺玫Fruit of Rosa davurica Pall.的成熟果實，其味酸甜，具有濃郁的香甜氣息，廣泛分布于我國東北地區(qū)，其富含黃酮類、皂苷類等活性成分及維生素、氨基酸等物質(zhì)[1-3]，具有顯著的抗氧化、降血脂、降血糖、健腦增智、延年益壽等功效[4-6]，故其具有廣泛種植的價值[7-8]。

本課題組對刺玫果總黃酮、總皂苷的提取、純化工藝進行了詳細(xì)研究[9-14]。市場上含有刺玫果的保健食品或中成藥其主要含量測定指標(biāo)為總黃酮，總黃酮具有抗氧化、增強人體免疫力等生理活性[15]。離子液體是在室溫下呈液體的有機離子體系，具有性質(zhì)穩(wěn)定、揮發(fā)性低、溶解能力強等獨特的物理化學(xué)性質(zhì)，與傳統(tǒng)有機溶劑相比，具有綠色環(huán)保、不易燃燒等特點，其在天然植物活性成分提取領(lǐng)域已有所應(yīng)用[16-18]。因此，本研究采用離子液體輔助超聲技術(shù)，通過單因素和正交試驗優(yōu)化了刺玫果中木犀草素、金絲桃苷的提取工藝條件，為刺玫果的深入開發(fā)提供了試驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

試材：供試刺玫果采自吉林省吉林市豐滿區(qū)小白山，經(jīng)吉林化工學(xué)院藥學(xué)系薛健飛博士鑒定為薔薇科植物山刺玫Fruit of Rosa davurica Pall.的果實，樣品保存于吉林化工學(xué)院藥學(xué)系研究室。

試劑：木犀草素、金絲桃苷對照品，成都曼思特生物科技有限公司；氯化-1-丁基-3-甲基咪唑、溴化-1-丁基-3-甲基咪唑、1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸鹽、1-丁基-3-甲基咪唑硝酸鹽、1-丁基-3-甲基咪唑硫酸氫鹽，上海成捷化學(xué)有限公司；甲醇、乙腈（色譜純），天津大茂化學(xué)試劑公司；水為重蒸餾水；其余所用試劑均為分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

UV-1201型高效液相色譜儀，大連依利特分析儀器有限公司；W5-100SP型恒溫水浴鍋， 上海申生科技有限公司；FA2004N型電子分析天平，上海精密科學(xué)儀有限公司；JBT/C-YCL型超聲波藥品處理機，濟寧金百特電子有限責(zé)任公司。

1.3 刺玫果提取液中木犀草素、金絲桃苷的HPLC含量的測定方法研究

以刺玫果提取液為原料，采用高效液相色譜法測定刺玫果提取液中木犀草素、金絲桃苷的峰面積，并對檢測波長的確定、流動相的選擇、線性關(guān)系的考察、重復(fù)性、精密度、供試品溶液的穩(wěn)定性、加樣回收率等進行了試驗研究。

1.4 刺玫果中木犀草素、金絲桃苷的提取工藝研究

稱取刺玫果粉適量，精密稱定，放入圓底燒瓶中，按照一定的料液比加入一定濃度的離子液體乙醇水溶液，放入超聲機中，設(shè)定適宜的水浴溫度和超聲波功率，提取一定時間，過濾，濾液轉(zhuǎn)移到50 mL的容量瓶中，定容，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液作為供試品溶液。按文中選定的色譜條件，分別進樣20 μL，測定木犀草素、金絲桃苷的峰面積。

2 結(jié)果與分析

2.1 HPLC含量測定方法的研究結(jié)果

2.1.1 混合對照品溶液的制備

精密稱取干燥至恒質(zhì)量的木犀草素、金絲桃苷對照品各1.90 mg，置于10 mL的容量瓶中，加入甲醇使之溶解并定容至刻度，搖勻，配制成質(zhì)量濃度為0.19 mg·mL-1的混合對照品貯備液。吸取上述混合對照品貯備液2.5 mL于25 mL的容量瓶中，加入甲醇稀釋至刻度，制成質(zhì)量濃度為19.00 μg·mL-1的混合對照品溶液，置于冰箱中避光保存以備用[19]。

2.1.2 供試品溶液的制備

精密稱定5 g刺玫果粉，放入圓底燒瓶中，以一定的料液比加入離子液體乙醇水溶液，超聲提取，過濾，收集提取液[20-21]，轉(zhuǎn)移至50 mL的容量瓶中并用乙醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

2.1.3 色譜條件及檢測波長的選擇

根據(jù)相關(guān)文獻報道，采用高效液相色譜法同時測定木犀草素與其他黃酮類成分、金絲桃苷與其他黃酮類成分的含量時，一般可以在360 nm[22-23]的檢測波長條件下測定，故本試驗確定的檢測波長為360 nm。

色譜柱為大連依利特ODS2 C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）。流動相：A為乙腈，B為0.2%磷酸溶液（V/V），程序為0～21 min，17% A；22～27 min，20%～24% A；28～36 min，28%～32% A；37～41 min，35%～45% A。流速為1.0 mL·min-1，柱溫為35 ℃，進樣量為20 μL，檢測波長為360 nm。在此條件下，木犀草素、金絲桃苷的保留時間分別為35.57、12.41 min。HPLC色譜圖見圖1。

圖1 對照品溶液及供試品溶液的HPLC圖譜Fig. 1 HPLC chromatograms of reference solution(A) and sample solution(B)

2.1.4 流動相的選擇

試驗中主要考察了甲醇-0.25%醋酸溶液、乙腈-0.25%磷酸水溶液、乙腈-0.2%磷酸水溶液梯度洗脫各種流動相對刺玫果提取液中木犀草素、金絲桃苷保留時間和分離度的影響情況。試驗結(jié)果表明：適宜的流動相為乙腈-0.2%磷酸水溶液梯度洗脫，能夠?qū)⒋堂倒崛∫褐械哪鞠菟?、金絲桃苷與其他物質(zhì)分開，故選擇在上述流動相條件下進行相關(guān)研究。另外，試驗設(shè)計中原本準(zhǔn)備同時測定刺玫果提取液中的木犀草素、金絲桃苷、山柰酚，但試驗中發(fā)現(xiàn)，刺玫果提取液中山柰酚的峰面積較小且不穩(wěn)定，所以在試驗中只測定了木犀草素與金絲桃苷。

2.1.5 線性關(guān)系的考察

吸取木犀草素與金絲桃苷的混合對照品溶液，配制成質(zhì)量濃度分別為0.19、0.95、1.90、3.80、7.60、11.40、15.20 μg·mL-1的系列混合對照品溶液，分別進樣20 μL，測定木犀草素、金絲桃苷的峰面積[24]。以木犀草素、金絲桃苷對照品進樣質(zhì)量濃度C（μg·mL-1）為橫坐標(biāo)，各自的峰面積A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。木犀草素、金絲桃苷的回歸方程分別為：

Y＝102.01X＋12.02（r＝0.997 7）；

Y＝48.30 X＋6.96（r＝0.998 1）。

分析結(jié)果表明：木犀草素、金絲桃苷進樣質(zhì)量濃度在0.19～15.20 μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.1.6 重復(fù)性試驗

取同一批號刺玫果粉6份，按2.1.2中說明的方法制備供試品溶液，各進樣量均為20 μL，測定木犀草素、金絲桃苷的峰面積。試驗結(jié)果表明，供試品中木犀草素的峰面積分別為40.75、39.45、41.79、42.08、42.69、39.32 mv·min-1，RSD為3.43%；金絲桃苷的峰面積分別為33.28、35.22、35.04、35.16、35.22、36.48 mv·min-1，RSD為2.92%。這一結(jié)果表明，含量測定方法具有較好的重復(fù)性。

2.1.7 儀器精密度試驗

吸取混合對照品及供試品溶液，連續(xù)進樣6次，每次進樣20 μL，分別測定對照品及供試品溶液中木犀草素、金絲桃苷的峰面積。試驗結(jié)果表明：供試品中木犀草素的峰面積分別為42.72、42.80、45.24、42.39、46.20、43.65 mv·min-1，RSD為3.53%；金絲桃苷的峰面積分別為35.39、36.01、36.91、34.99、36.92、35.90 mv·min-1，RSD為2.18%。對照品中木犀草素的峰面積分別為1 756.98、1 789.63、1 854.15、1 733.21、1 789.83、1 761.12 mv·min-1，RSD為2.35%；金絲桃苷的峰面積分別為852.80、880.68、822.32、852.80、855.24、850.00 mv·min-1，RSD為2.18%。這一結(jié)果表明，儀器精密度符合要求。

2.1.8 供試品溶液穩(wěn)定性試驗

吸取供試品溶液，分別放置0、1、2、3、4、5 h后，進樣20 μL，測定木犀草素、金絲桃苷的峰面積。試驗結(jié)果表明：供試品中木犀草素的峰面積分別為41.89、42.75、44.24、42.72、45.38、44.26 mv·min-1，RSD為2.98%；金絲桃苷的峰面積分別為35.60、36.41、36.86、34.81、35.49、35.94 mv·min-1，RSD為2.02%。這一結(jié)果表明，供試品溶液在室溫條件下放置5 h內(nèi)穩(wěn)定，能滿足測定的要求。

2.1.9 加樣回收率試驗

稱取已知木犀草素、金絲桃苷含量的刺玫果粉各6份，每份中加入濃度為19.00 μg·mL-1的木犀草素對照品溶液0.9 mL及濃度為38.00 μg·mL-1的金絲桃苷對照品溶液0.9 mL[25]，按照2.1.2中說明的方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下，測定木犀草素、金絲桃苷的峰面積，測定結(jié)果見表1。表1表明：木犀草素的平均回收率為97.49%，RSD為1.76%；金絲桃苷的平均回收率為101.07%，RSD為1.83%。

2.2 離子液體輔助提取刺玫果中木犀草素、金絲桃苷工藝條件的優(yōu)化

2.2.1 單因素試驗結(jié)果

2.2.1.1 離子液體類型的選擇

稱取5 g刺玫果粉，精密稱定，放入圓底燒瓶中，加入濃度為0.5 mol·L-1的不同離子液體的50%乙醇水溶液，離子液體分別為：溴化-1-丁基-3-甲基咪唑、氯化-1-丁基-3-甲基咪唑、1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸鹽、1-丁基-3-甲基咪唑硫酸氫鹽、1-丁基-3-甲基咪唑硝酸鹽。放入超聲機中[26-27]，料液比為1∶16，設(shè)定水浴溫度50 ℃，超聲波功率180 W，提取30 min，過濾，濾液轉(zhuǎn)移到50 mL的容量瓶中，50%乙醇定容，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液作為供試品溶液。按2.1.3中的色譜條件分別進樣20 μL，測定木犀草素、金絲桃苷的峰面積。選擇試驗結(jié)果見表2。表2表明，在5種離子液體中，1-丁基-3-甲基咪唑硝酸鹽對木犀草素的提取效果最好，而氯化-1-丁基-3-甲基咪唑?qū)鸾z桃苷的提取效果最好，但氯化-1-丁基-3-甲基咪唑與1-丁基-3-甲基咪唑硝酸鹽對金絲桃苷的提取效果接近。綜合考慮認(rèn)為，可選擇1-丁基-3-甲基咪唑硝酸鹽為后續(xù)試驗的離子液體。

表2 離子液體類型的選擇試驗結(jié)果Table 2 Selection of ionic liquids

2.2.1.2 提取溶劑的選擇

稱取5 g刺玫果粉，精密稱定，放入圓底燒瓶中，加入濃度為0.5 mol·L-1的1-丁基-3-甲基咪唑硝酸鹽乙醇水溶液，乙醇體積分?jǐn)?shù)分別設(shè)定為0%、10%、30%、50%、70%、90%，放入超聲機中，其他操作按2.2.1.1中所述方法進行，測定木犀草素、金絲桃苷的峰面積，試驗結(jié)果如圖2所示。由圖2可知，當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)在0%～70%范圍內(nèi)時，木犀草素、金絲桃苷的峰面積均隨乙醇體積分?jǐn)?shù)的升高而增加，當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)為70%時，金絲桃苷的峰面積達到了最大值，而木犀草素的峰面積也接近最高值；繼續(xù)提高乙醇體積分?jǐn)?shù)，金絲桃苷的峰面積明顯下降，而木犀草素峰面積的變化不明顯。究其原因，可能是木犀草素為黃酮苷元，難溶或不溶于水，主要溶于甲醇、乙醇等有機溶劑中；而金絲桃苷為黃酮苷，在水中的溶解度大于木犀草素，所以，當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)較高時，其對黃酮苷元木犀草素的提取效果比較理想，但對黃酮苷金絲桃苷的提取效果很差。綜合考慮認(rèn)為，可選擇70%乙醇水溶液為后續(xù)試驗的提取溶劑。

圖2 乙醇體積分?jǐn)?shù)對峰面積的影響Fig. 2 The influence of ethananol volume fraction on the peak of luteolin、Hyperoside

2.2.1.3 離子液體濃度的選擇

稱取5 g刺玫果粉，精密稱定，放入圓底燒瓶中，加入濃度分別為0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mol·L-1的1-丁基-3-甲基咪唑硝酸鹽70%乙醇水溶液，放入超聲機中[28]，其他操作按2.2.1.1中所述方法進行，測定木犀草素、金絲桃苷的峰面積，試驗結(jié)果見圖3。由圖3可知，當(dāng)離子液體濃度在0.05～0.40 mol·L-1范圍內(nèi)，隨著離子液體濃度的增加，木犀草素、金絲桃苷的峰面積均不斷提高，而當(dāng)離子液體濃度達到0.4 mol·L-1時，二者的峰面積均達到最高值；繼續(xù)增加離子液體濃度，二者的峰面積均略有下降，但其變化均不明顯。分析其原因，可能是隨著離子液體濃度的升高，其溶解能力增強，所以，最初二者的峰面積均隨離子液體濃度的增加而提高，但離子液體濃度越高，溶液的粘度也就越大，溶劑滲透進藥材基質(zhì)內(nèi)的能力越小，故當(dāng)離子液體濃度高于0.4 mol·L-1時，隨著離子液體濃度的增加，二者的峰面積不再持續(xù)提高，而均呈略有下降的趨勢。

2.2.1.4 料液比的選擇

圖3 離子液體濃度對峰面積的影響Fig. 3 The influence of ionic liquid concentration on the peak of luteolin、Hyperoside

稱取5 g刺玫果粉，精密稱定，放入圓底燒瓶中，加入濃度為0.4 mol·L-1的1-丁基-3-甲基咪唑硝酸鹽70%乙醇水溶液，放入超聲機中，料液比分別設(shè)定為1∶7、1∶10、1∶13、1∶16、1∶19、1∶22、1∶25（g∶mL），其他操作按2.2.1.1中所述方法進行，測定木犀草素、金絲桃苷的峰面積，試驗結(jié)果見圖4。由圖4可知，隨著料液比的增加，木犀草素、金絲桃苷的峰面積均逐漸增加，當(dāng)料液比達到1∶22時，木犀草素的峰面積達到最高值，而金絲桃苷的峰面積也達到了較高值（66.55 mv·min-1）；繼續(xù)加大料液比，木犀草素的峰面積則略有降低，而金絲桃苷的峰面積卻稍有增加，但其變化均較小。究其原因，可能是刺玫果的量固定，在一定范圍內(nèi)增加提取溶劑的用量，會使刺玫果中的木犀草素、金絲桃苷更好地轉(zhuǎn)移到溶劑中，所以，當(dāng)料液比為1∶22時，刺玫果中的木犀草素、金絲桃苷幾乎全部被溶出，如果料液比繼續(xù)增大，刺玫果中木犀草素、金絲桃苷的溶出變化就不明顯了。綜合考慮認(rèn)為，可選擇1∶22為后續(xù)試驗的料液比。

圖4 料液比對峰面積的影響Fig. 4 The influence of liquid-solid ratio on the peak of luteolin、Hyperoside

2.2.1.5 提取水浴溫度的選擇

稱取5 g刺玫果粉，精密稱定，放入圓底燒瓶中，加入濃度為0.4 mol·L-1的1-丁基-3-甲基咪唑硝酸鹽70%乙醇水溶液，放入超聲機中，料液比設(shè)定為1∶22，提取水浴溫度分別設(shè)定為30、40、50、60、70、80 ℃，其他操作按2.2.1.1中所述方法進行，測定木犀草素、金絲桃苷的峰面積，試驗結(jié)果見圖5。由圖5可知，隨著水浴溫度的提高，木犀草素、金絲桃苷的峰面積均逐漸增加，當(dāng)水浴溫度達到80 ℃時，二者的峰面積均達到了最高值。分析其原因，可能是隨著水浴提取溫度的不斷升高，提取溶劑的運動速度不斷增大，當(dāng)水浴溫度提高到80 ℃時，提取溶劑處于微沸狀態(tài)，此時溶劑滲透到刺玫果組織細(xì)胞中的能力最強。所以，選擇水浴提取溫度為80 ℃進行后續(xù)試驗。

圖5 提取溫度對峰面積的影響Fig. 5 The influence of extraction tempreature on the peak of luteolin、Hyperoside

2.2.1.6 提取時間的選擇

稱取5 g刺玫果粉，精密稱定，放入圓底燒瓶中，加入濃度為0.4 mol·L-1的1-丁基-3-甲基咪唑硝酸鹽70%乙醇水溶液，放入超聲機中，料液比設(shè)定為1∶22，提取水浴溫度為80 ℃，提取時間分別設(shè)定為5、10、15、20、30、40、50、60、75、90 min，其他操作按2.2.1.1中所述方法進行，測定木犀草素、金絲桃苷的峰面積，試驗結(jié)果見圖6。由圖6可知，隨著提取時間的不斷延長，木犀草素、金絲桃苷的峰面積均不斷增加，當(dāng)提取時間從5 min 增加到60 min時，二者的峰面積均明顯增加，當(dāng)提取時間繼續(xù)延長到75 min時，二者的峰面積均略有增加；但若繼續(xù)延長提取時間，木犀草素的峰面積反而出現(xiàn)下降趨勢，而金絲桃苷的峰面積略有增加，但其變化均不明顯。分析其原因，可能是提取時間越長，越有利于木犀草素、金絲桃苷的溶出，但如果提取時間過長則會使雜質(zhì)溶出增加，可能會對二者的測定有一定的影響。綜合考慮認(rèn)為，選擇75 min為后續(xù)試驗的提取時間。

2.2.1.7 超聲波功率的選擇

圖6 提取時間對峰面積的影響Fig. 6 The influence of extraction time on the peak of luteolin、Hyperoside

稱取5 g刺玫果粉，精密稱定，放入圓底燒瓶中，加入濃度為0.4 mol·L-1的1-丁基-3-甲基咪唑硝酸鹽70%乙醇水溶液，放入超聲機中，超聲波功率分別為100、120、140、160、180 W，料液比為1∶22（g∶mL），提取水浴溫度設(shè)定為80 ℃，其他操作按2.2.1.1中所述方法進行，測定木犀草素、金絲桃苷的峰面積。試驗結(jié)果見圖7，由圖7可知，隨著超聲波功率的不斷增加，木犀草素、金絲桃苷的峰面積不斷增加，當(dāng)超聲波功率繼續(xù)提高到最高值時，二者的峰面積均達到了最大值。分析其原因，可能因為隨著超聲波功率的提高，超聲波對刺玫果細(xì)胞的破碎程度不斷增大，從而加速了木犀草素、金絲桃苷的溶解。

圖7 超聲波功率對峰面積的影響Fig. 7 The influence of ultrasonic power on the peak of luteolin、Hyperoside

2.2.2 正交試驗結(jié)果

根據(jù)單因素試驗結(jié)果，將提取水浴溫度固定為80 ℃，超聲波功率固定為180 W，選擇提取溶劑乙醇體積分?jǐn)?shù)、離子液體濃度、料液比、提取時間作為考察因素，按四因素三水平進行試驗，正交試驗的因素與水平見表3，正交試驗結(jié)果分別見表4與表5。

正交試驗結(jié)果表明：離子液體超聲輔助提取玫果木犀草素的最優(yōu)方案為A3B3C3D1，各因素的影響大小為：離子液體濃度＞提取時間＞料液比＞乙醇體積分?jǐn)?shù)。而提取刺玫果金絲桃苷的最優(yōu)方案為A2B3C3D3，各因素的影響大小為：料液比＞提取時間＞離子液體濃度＞乙醇體積分?jǐn)?shù)?？紤]到乙醇體積分?jǐn)?shù)無論對提取木犀草素還是提取金絲桃苷的影響都最小，從生產(chǎn)成本上考慮，可選擇70%乙醇水溶液為提取溶劑；而考慮到提取時間對二者峰面積之和的影響情況，選擇超聲提取時間為90 min。最終確定的離子液體超聲輔助同時提取刺玫果木犀草素及金絲桃苷的最優(yōu)方案為A2B3C3D3，即離子液體為1-丁基-3-甲基咪唑硝酸鹽、離子液體濃度為0.45 mol·L-1、料液比為1∶25、提取溶劑為70%乙醇水溶液、提取時間為90 min、提取溫度為80 ℃，超聲波功率為180 W。

表3 正交試驗的因素與水平Table 3 The table of factors and levels

表4 離子液體超聲輔助提取刺玫果中木犀草素的正交試驗設(shè)計及試驗結(jié)果Table 4 Orthogonal array design arrangement and the experimental data

表5 離子液體超聲輔助提取刺玫果中金絲桃苷的正交試驗設(shè)計及試驗結(jié)果Table 5 Orthogonal array design arrangement and the experimental data

2.2.3 工藝驗證性試驗

稱取刺玫果粉3份，每份5 g，精密稱定，放入圓底燒瓶中，加入濃度為0.45 mol·L-1的1-丁基-3-甲基咪唑硝酸鹽70%乙醇水溶液，放入超聲機中，料液比為1∶25，設(shè)定水浴溫度為80 ℃，超聲波功率180 W，提取時間90 min，過濾，濾液轉(zhuǎn)移到50 mL的容量瓶中，70%乙醇定容，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液作為供試品溶液。按照2.1.3中所述的色譜條件，分別進樣20 μL，測定木犀草素、金絲桃苷的峰面積。3次試驗結(jié)果均表明：木犀草素的峰面積分別為135.58、131.28、136.13 mv·min-1，其平均值為134.33 mv·min-1，RSD 均為1.98%；金絲桃苷的峰面積分別為131.18、126.83、130.28 mv·min-1，其平均值為129.46 mv·min-1，RSD均為1.77%。這一驗證性試驗結(jié)果表明，在優(yōu)化的提取條件下，木犀草素、金絲桃苷的提取率分別為11.99、25.36 μg·g-1，且優(yōu)選的離子液體超聲輔助提取工藝比較穩(wěn)定。

2.2.4 離子液體輔助提取刺玫果中木犀草素、金絲桃苷的對比試驗

稱取刺玫果粉3份，每份5 g，精密稱定，放入圓底燒瓶中，加入70%乙醇水溶液，放入超聲機中，料液比為1∶25，設(shè)定水浴溫度為80 ℃，超聲波功率180 W，提取時間90 min，過濾，濾液轉(zhuǎn)移到50 mL的容量瓶中，70%乙醇定容，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液作為供試品溶液。按照2.1.3中所述色譜條件，分別進樣20 μL，測定木犀草素、金絲桃苷的峰面積。提取體系中不加入離子液體，其他操作條件與2.3.3中所述相同，3次試驗結(jié)果均表明：木犀草素的峰面積分別為104.80、98.10、101.49 mv·min-1，其平均值為101.43 mv·min-1，其提取率為8.76 μg·g-1；金絲桃苷的峰面積分別為92.28、86.58、88.46 mv·min-1，其平均值為89.11 mv·min-1，其提取率為17.01 μg·g-1。根據(jù)2.3.3中所述的試驗結(jié)果可知，離子液體的加入使木犀草素峰面積提高了32.44%、提取率提高了36.87%；使金絲桃苷峰面積提高了45.28%，提取率提高了49.09%。

3 結(jié)論與討論

（1）本試驗對采用HPLC法同時測定刺玫果中木犀草素、金絲桃苷含量的測定方法進行了考察，結(jié)果表明，所建立的測定方法操作簡便，精密度高，重復(fù)性及線性關(guān)系均良好，木犀草素、金絲桃苷的平均回收率分別為97.49%、101.07%。

（2）本試驗采用超聲波輔助離子液體法對刺玫果中的木犀草素、金絲桃苷進行了提取，試驗結(jié)果表明，最佳提取工藝為：離子液體濃度為0.45 mol·L-1，料液比為1∶25，乙醇體積分?jǐn)?shù)為70%，提取溫度為80 ℃，提取時間為90 min，超聲波功率180 W。在此優(yōu)化的提取條件下，木犀草素、金絲桃苷的提取率分別為11.99、25.36 μg·g-1。這比王正軍[29]等人對刺玫果中金絲桃苷的提取效果有顯著的提高。

（3）提取體系中不加入離子液體，試驗結(jié)果表明，木犀草素的峰面積平均值為101.43 mv·min-1，其提取率為8.76 μg·g-1；金絲桃苷的峰面積平均值為89.11 mv·min-1，其提取率為17.01 μg·g-1。離子液體的加入使木犀草素峰面積提高了32.44%、提取率提高了36.87%；使金絲桃苷峰面積提高了45.28%，提取率提高了49.09%。

（4）試驗結(jié)果表明，添加有離子液體的乙醇水溶液所提木犀草素、金絲桃苷的提取率比純乙醇水溶液的高，這可能因為，離子液體對植物纖維素的溶解能力較高，有利于目標(biāo)成分的溶出，從而使提取率提高。該方法具有快速、高效、環(huán)保等優(yōu)點，試驗結(jié)果為刺玫果活性成分的提取提供了一種新方法。