自擬射麻湯對哮喘模型豚鼠氣道炎癥干預(yù)的研究

林黃果 張烈元 李楚天 蔡 彥 陳伯鈞

（廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院，廣東省中醫(yī)院，廣東 廣州 510120）

支氣管哮喘簡稱哮喘，是由多種炎癥細胞（嗜酸性粒細胞、肥大細胞、淋巴細胞、中性粒細胞等）和細胞組分參與的氣道炎癥性疾病[1]，此種炎癥常伴隨引起氣道反應(yīng)性增高，導(dǎo)致反復(fù)發(fā)作的喘息、氣促、胸悶和（或）咳嗽等癥狀，多在夜間和（或）凌晨發(fā)生，此類癥狀常伴有廣泛而多變的氣流阻塞，可以自行或通過治療而逆轉(zhuǎn)。目前其發(fā)病率和死亡率呈現(xiàn)逐年上升態(tài)勢。一般認為哮喘基本特征為氣道慢性炎癥、氣道高反應(yīng)性和氣道重塑，并認為氣道炎癥是哮喘最重要發(fā)病機制，是導(dǎo)致哮喘氣道高反應(yīng)性和氣道彌漫性、可逆性阻塞的病理基礎(chǔ)，而嗜酸性粒細胞和嗜酸性粒細胞陽離子蛋白（ECP）是其中重要的炎癥細胞和炎癥因子[2-3]。中醫(yī)對于治療哮喘有一定療效，尤其是不少研究均揭示[4]射干麻黃湯治療支氣管哮喘能抑制氣道重塑來減輕哮喘癥狀和氣道重塑[5-6]，影響嗜酸性粒細胞的凋亡[7-8]，減輕氣道炎癥反應(yīng)[9-10]，改善肺功能，提高臨床療效。筆者在臨床應(yīng)用自擬方射麻湯，宣肺祛痰，下氣止咳，兼以健脾利濕治療哮喘，收到良好的療效?，F(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 符合動物實驗倫理要求情況下，選用SPF級健康豚鼠24只，均由廣州市花都區(qū)花東信華實驗動物養(yǎng)殖場提供，合格證號SCXK（粵）2009-0023，體質(zhì)量300～400 g，雌雄各半，給予普通飼料進行適應(yīng)性飼養(yǎng) （飼料的加工及飼養(yǎng)工作均由廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心完成）。

1.2 實驗藥物 自擬射麻湯（射干、炙麻黃、紫菀、款冬花、法半夏、薏苡仁、北杏仁、桑白皮、大棗），上述中藥材均來自廣東省中醫(yī)院中藥房，并由主管中藥師進行鑒定，確定為純正中藥材。上述藥物等分量按成年人60 kg體質(zhì)量劑量的4倍水煎濃縮至含生藥1 g/mL，高壓滅菌，于4℃冰箱保存?zhèn)溆?。地塞米松磷酸鈉注射液（湖北天藥藥業(yè)股份有限公司，批號：20100336）；雞卵白蛋白（美國Sigma公司，批號：A5253）由廣州市威佳科技有限公司提供；粵華WH2-2000型超聲霧化儀（廣東）；水平離心機；徠卡石蠟包埋機；徠卡型生物組織脫水機（德國）；徠卡2245石蠟切片機（德國）；徠卡5020型石蠟染色機（德國）；DK-600S水浴箱；圖像分析系統(tǒng)。

1.3 分組與造模 適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，將24只豚鼠分為3組：射麻湯組，模型組和地塞米松組，每組8只，雌雄各4只。參照國際通用方法，以卵蛋白致敏和攻擊加以復(fù)制造模[11]，在相同環(huán)境下先將豚鼠飼養(yǎng)3 d適應(yīng)環(huán)境后開始造模。第4日，采用雞卵白蛋白致敏，常規(guī)消毒后一次性腹腔注射10%雞卵白蛋白0.9%氯化鈉注射液1 mL，使豚鼠處于致敏狀態(tài)。致敏后第7日將動物置特制激發(fā)箱內(nèi)，以1%雞卵清蛋白溶液噴霧激發(fā)，按個體差異每次2～10 min，直至“哮喘”發(fā)作（腹式呼吸明顯，呼吸頻率加快且節(jié)律不整、活動減少等癥狀），連噴 4 d。

1.4 給藥方法 造模成功后隔日開始給藥，射麻湯組予射麻湯灌胃，每次5 mL，地塞米松組予地塞米松0.1 mg兌入0.9%氯化鈉注射液5 mL灌胃，模型組給予0.9%氯化鈉注射液5 mL灌胃。均每日1次，7 d為1個療程。

1.5 標本采集與檢測 取材于末次治療后的第2日，將各組動物以3%戊巴比妥鈉1.5 mL/kg腹腔注射麻醉后處死，取出右肺，標本用10%多聚甲醛固定，從固定部位切取右肺組織塊。常規(guī)石蠟包埋和切片，片厚3 μm，分別行HE染色。采用圖像分析系統(tǒng)，每張切片在400倍放大的顯微鏡下，分別測取其嗜酸性粒細胞數(shù)值，每個支氣管各測5次，取其均值。ECP測定采用熒光酶標記法檢測儀測定，具體操作按說明書執(zhí)行。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計軟件。計量資料以（±s）表示，進行單因素方差分析的SNK檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組肺組織大體改變 模型組豚鼠肺組織腫脹明顯，表面可見瘀紫色暗區(qū)，顏色略顯蒼白，切面可見渾濁分泌物滲出。射麻湯組、地塞米松組有上述改變，但程度輕微。

2.2 各組肺組織病理學(xué)改變 見圖1。模型組豚鼠肺組織支氣管黏膜腫脹水腫、充血，氣道內(nèi)肥大細胞、肺泡巨噬細胞、嗜酸性粒細胞、淋巴細胞與中性粒細胞等炎癥細胞浸潤，支氣管壁和基底膜增厚，支氣管管腔變窄，其內(nèi)可見炎癥細胞和分泌物滲出。射麻湯組、地塞米松組豚鼠肺組織炎癥細胞浸潤等病理改變較模型組減輕，且地塞米松組要稍優(yōu)于射麻湯組。

圖1 各組氣道病理切片（HE染色，200倍）

2.3 各組間嗜酸性粒細胞值及ECP水平比較 見表1。射麻湯組和地塞米松組嗜酸性粒細胞值及ECP與模型組比較均有降低（P＜0.05），且地塞米松組較射麻湯組更低，但兩組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

表1 各組豚鼠肺組織中EOS總數(shù)及ECP水平比較（±s）

表1 各組豚鼠肺組織中EOS總數(shù)及ECP水平比較（±s）

與模型組比較，*P＜0.05

?

3 討 論

目前認為哮喘是多種細胞（如嗜酸性粒細胞、肥大細胞、T細胞、中性粒細胞、氣道上皮細胞等）和細胞組分參與的氣道慢性炎癥性疾患，其基本特征為氣道慢性炎癥、氣道高反應(yīng)性和氣道重塑。嗜酸性粒細胞浸潤在哮喘氣道炎癥的形成中發(fā)揮著重要的作用。激活的嗜酸性粒細胞釋放多種毒性蛋白，致哮喘氣道上皮損傷脫落，破壞周圍組織，暴露傳入神經(jīng)末梢，引起氣道高反應(yīng)性。尤其是ECP活化的程度，與哮喘的嚴重程度呈顯著的正相關(guān)，哮喘病情的加重或緩解與嗜酸性粒細胞的變化密切相關(guān)[12-13]。

射干麻黃湯為治療哮喘的經(jīng)典名方，諸藥相配，融解表、溫肺、利氣、開痰于一方以分解病邪，共奏溫肺散寒、化痰平喘之功，其療效已被臨床及實驗所證實[14-15]，是治療呼吸系統(tǒng)疾病的良方[16]。但筆者在臨床使用中發(fā)現(xiàn)，大部分哮喘患者使用射干麻黃湯后容易出現(xiàn)咳嗽遷延難以斷根，口干舌燥，大便干結(jié)不爽。經(jīng)過反復(fù)思考，總結(jié)經(jīng)驗發(fā)現(xiàn)，患者都是身處嶺南地區(qū)，其炎熱潮濕的氣候全國聞名，正如國醫(yī)大師鄧鐵濤教授所認為的嶺南人具有其地區(qū)特異性的體質(zhì)，即脾氣虛弱兼有濕熱體質(zhì)[17]，可能與射干麻黃湯中的生姜、細辛、五味子等偏溫燥收斂[18]有關(guān)，故筆者臨床上常在原方中去生姜、細辛、五味子等溫燥之品，加薏苡仁、北杏仁、桑白皮等健脾利濕、瀉肺止咳，自擬射麻湯：射干10 g，炙麻黃 10 g，紫菀 10 g，款冬花 10 g，法半夏 10 g，薏苡仁30 g，北杏仁10 g，桑白皮10 g，大棗10 g。 組方思想為宣肺祛痰，下氣止咳，兼以健脾利濕，在臨床上收到良好的療效。為進一步提供可靠的理論基礎(chǔ)，并比較與西藥地塞米松對哮喘的療效，所以并本實驗設(shè)計隨機分3組，通過射麻湯組與模型組和地塞米松組對哮喘模型氣道炎癥反應(yīng)及肺組織嗜酸性粒細胞和ECP的影響，來證實自擬方射麻湯對哮喘治療的確切效果，實踐中也已證明射干、麻黃等中藥治療哮喘具有良好作用[19-20]。

本實驗在機理上進一步表明，自擬射麻湯可使哮喘模型豚鼠肺組織內(nèi)的EOS減少，抑制肺組織中ECP含量，使哮喘模型豚鼠氣道壁變薄，降低了哮喘豚鼠炎癥反應(yīng)，表明自擬射麻湯對哮喘模型豚鼠氣道炎癥干預(yù)作用的機制可能是通過上述過程實現(xiàn)的。ECP是嗜酸性粒細胞活化指標之一，對哮喘的發(fā)作、預(yù)后判斷和療效評價均具有重要的作用。有研究證明，與嗜酸性粒細胞相比，ECP與哮喘患者氣流受限關(guān)系更為密切[21]。也佐證了射麻方的藥理作用及在臨床使用中效果良好的原因。特別是哮喘尚不能完全根治，目前一般通過長期吸入糖皮質(zhì)激素等藥物的方法來抑制氣道炎癥反應(yīng)，從而控制哮喘的臨床癥狀，減少急性發(fā)作，但副作用較多，而且費用較貴，部分患者治療依從性差，尤其是輕度發(fā)作者或經(jīng)濟不好的患者。挖掘我國中醫(yī)藥寶藏，發(fā)揮中醫(yī)藥文化優(yōu)勢特色，保障人民群眾身心健康是我們中醫(yī)藥醫(yī)療工作者的重任。