血小板相關(guān)抗體及膜糖蛋白在胃癌患者中的臨床檢測(cè)意義探析

何曉鳳,李 秋

(1.四川大學(xué)華西醫(yī)院 腹部腫瘤科,四川 成都610041；2.成都市龍泉驛區(qū)第一人民醫(yī)院·四川大學(xué)華西醫(yī)院龍泉醫(yī)院)

胃癌目前發(fā)病率占全球的第五位,死亡率占全球第三位[1]；而我國(guó)的胃癌患者總數(shù)高達(dá)全球的40%[2],其發(fā)病率和死亡率均高居我國(guó)腫瘤的第二位[3],嚴(yán)重威脅人們的身體健康及生活質(zhì)量。據(jù)報(bào)道,惡性腫瘤患者的預(yù)后與其體內(nèi)血小板變化關(guān)系密切,腫瘤的侵襲及轉(zhuǎn)移是患者致死的重要原因[4],而血小板可能促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移形成,且在腫瘤細(xì)胞血行轉(zhuǎn)移中可能扮演了重要角色,表現(xiàn)為活化后的血小板聚集并黏附在腫瘤細(xì)胞上,幫助腫瘤細(xì)胞逃逸免疫系統(tǒng)的監(jiān)控,從而促進(jìn)其血行轉(zhuǎn)移[5]。血小板是否活化可以通過(guò)檢測(cè)血小板膜糖蛋白(PMG)的水平得知,CD62P、CD63是近年發(fā)現(xiàn)的黏附分子家族中的成員,定位于血小板的α顆粒和內(nèi)皮細(xì)胞棒管狀(Weible-Palade)小體內(nèi),能介導(dǎo)血小板及血管內(nèi)皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞的黏附,促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移[6]。研究表明,血小板相關(guān)抗體(PAIgG)是免疫性血小板減少癥患者的一個(gè)重要實(shí)驗(yàn)室輔助診斷指標(biāo),其與PMG結(jié)合可成為重要靶抗原之一[7-10]。本研究旨在通過(guò)檢測(cè)胃癌患者的PMG CD62p、CD63及PAIgG的表達(dá)水平,探析上述指標(biāo)在胃癌患者診治中的價(jià)值。

1 對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象

選擇2016年2月至2017年1月在四川大學(xué)華西醫(yī)院龍泉醫(yī)院接受治療的胃癌患者。入選標(biāo)準(zhǔn)：(1)經(jīng)病理確診為胃癌(腺癌或印戒細(xì)胞癌)；(2)年齡20-70歲；(3)臨床資料完整；(4)接受根治性手術(shù)切除或至少一次靜脈化療治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并糖尿病者；(2)入院治療前一個(gè)月曾接受抗凝治療及抗血小板藥物治療者。最后,共120例患者入組,根據(jù)美國(guó)癌癥聯(lián)合委員會(huì)(AJCC)2010年第7版TNM分期標(biāo)準(zhǔn),其中ⅠA-ⅡB期患者48例(早中期),ⅢA-Ⅳ期患者72例(中晚期)。另外選取同期在我院接受健康體檢的120例體檢健康者作為本次研究的對(duì)照組。胃癌組患者入院確診后于術(shù)前/化療前一周采空腹肘靜脈血，并于術(shù)后/化療后3周采血復(fù)檢；對(duì)照組采用體檢凍存血樣檢測(cè)。其中胃癌患者接受的化療方案包括：?jiǎn)嗡幪婕獖W、單藥卡培他濱、SOX方案(替吉奧+奧沙利鉑)、XELOX方案(卡培他濱+奧沙利鉑)。

1.2方法

保存血樣：-70度冰箱保存的血樣，均為清晨空腹抽取肘靜脈血，置于EDTA抗凝管內(nèi)，充分混勻凍存，室溫融化后檢測(cè)。

主要試劑及儀器：ImmunoTech公司生產(chǎn)的CD62p-PE、CD63-PE、CD61-FITC及CD41與同型對(duì)照IgG1-PE、FITC2羊抗人IgG單克隆抗體等；美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司生產(chǎn)的EPICS-XL流式細(xì)胞儀,浙江省白洋離心機(jī)廠生產(chǎn)的BFX52320型醫(yī)用低速離心機(jī)等。

PMG標(biāo)記檢測(cè)：在3支測(cè)定管內(nèi)各加入CD61-FITC液體,后分別注入CD62p-PE(試管A)、CD63-PE(試管B)、IgG1-PE(試管C),經(jīng)PBS稀釋后各自注入全血,避光室溫下靜置,上機(jī)檢測(cè)。將試管C作為陰性對(duì)照并適度調(diào)整電壓,標(biāo)記CD62p-PE、CD63-PE；計(jì)算CD61門中CD62p、CD63陽(yáng)性率。

血小板的樣本制備及相關(guān)抗體的標(biāo)記：充分混勻靜脈抗凝血,離心處理后提取富血小板血漿,注入洗滌液TEN混勻,反復(fù)洗滌后離心處理,去除上清液,沉淀物經(jīng)PBS稀釋后制成血小板混懸液。在測(cè)定管中注入FITC2羊抗人IgG單克隆抗體,對(duì)照管內(nèi)加入IgG1,將混懸液分別加入測(cè)定管及對(duì)照管內(nèi),避光室溫下孵育,PBS液洗滌并稀釋后上機(jī)檢測(cè)。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1一般資料

如表1所示,胃癌組與對(duì)照組兩組患者的性別、年齡、BMI及空腹血糖等一般資料無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

表1 兩組患者的一般資料比較

2.2兩組患者的PAIgG及PMG水平

表2結(jié)果可見(jiàn),胃癌組患者的PAIgG、CD62p及CD63水平明顯高于對(duì)照組(P<0.01)。

表2 兩組患者的PAIgG及PMGCD62p及CD63水平比較

2.3胃癌患者治療前后的PAIgG、PMG水平

表3結(jié)果可見(jiàn),胃癌患者治療后的PAIgG、CD62p及CD63水平明顯低于治療前(P<0.05)。

表3 胃癌患者治療前后的PAIgG、PMGCD62p及CD63水平比較

3 討論

惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)極其復(fù)雜的過(guò)程,血小板數(shù)量往往會(huì)隨之上升或其活性會(huì)隨之增強(qiáng)。血小板在正常血液循環(huán)系統(tǒng)中呈靜息狀,但在與腫瘤細(xì)胞相互作用及血管內(nèi)皮受損等過(guò)程中會(huì)釋放大量活性物質(zhì),從而激活并釋放了血小板[11,12]。據(jù)報(bào)道,大部分惡性腫瘤者的凝血系統(tǒng)會(huì)異常,如血小板數(shù)量及凝血酶抗凝血酶復(fù)合物等顯著增加等,而凝血酶水平的突然增加會(huì)致使血小板大量聚集并粘附于腫瘤細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞上,增進(jìn)了癌細(xì)胞血行轉(zhuǎn)移能力[13]。隨著我國(guó)人民生活水平的提高、生活節(jié)奏的加快及生活習(xí)慣的變化,胃癌的發(fā)病率逐年遞增。如何有效監(jiān)測(cè)胃癌患者治療療效及評(píng)估病情變化及預(yù)后分析是目前臨床上被廣泛關(guān)注的問(wèn)題。

CD62p是選擇素家族的一員,儲(chǔ)存在血小板α顆粒及中等以上大血管內(nèi)皮細(xì)胞的Weiber-Palade小體內(nèi)。如果血小板被活化,CD62p會(huì)伴隨部分顆粒內(nèi)容被大量釋放或者經(jīng)開(kāi)放管道系統(tǒng)膜融合血小板膜而在活化血小板表面持久表達(dá),該表達(dá)不會(huì)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而消失,也不會(huì)被漿蛋白掩蓋[14]。據(jù)報(bào)道,CD62p是迄今為止特異性較好的可標(biāo)記血小板活化及釋放的分子之一[15]。CD63屬于溶酶體膜蛋白,如果血小板活化,溶酶體膜則溶解,融合血小板漿膜后在血小板膜上表達(dá),是血小板活化的重要標(biāo)志之一[16]。PAIgG與血小板壽命及計(jì)數(shù)呈顯著負(fù)相關(guān)性,治療后患者血小板計(jì)數(shù)雖然在正常范圍內(nèi),但抗體水平仍不斷增加[17]。

本研究結(jié)果顯示,胃癌組患者的PAIgG、CD62p及CD63水平明顯高于對(duì)照組,提示胃癌者的外周血血小板呈活化狀,而活化狀血小板可以通過(guò)多種方式影響腫瘤細(xì)胞,如覆蓋腫瘤細(xì)胞,致使免疫系統(tǒng)不能完全清除或識(shí)別腫瘤細(xì)胞；提高腫瘤粘附內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基及血管內(nèi)皮細(xì)胞的能力,有助于腫瘤細(xì)胞血行轉(zhuǎn)移的進(jìn)行[18]。此外,胃癌患者治療后的PAIgG、CD62p及CD63水平明顯低于治療前(P<0.05),提示有效治療可降低血小板相關(guān)抗體及其膜糖蛋白的表達(dá)水平,有助于臨床醫(yī)師監(jiān)測(cè)胃癌患者治療的療效,評(píng)估預(yù)后。