血小板活化因子及其乙酰水解酶與蕁麻疹的相關(guān)性研究

朱奕锜 王朵勤 唐 慧 邵亦心 徐金華

蕁麻疹是一種常見的變態(tài)反應(yīng)性皮膚病，以大小不等的風(fēng)團(tuán)伴瘙癢為特征性癥狀，是一種因肥大細(xì)胞表面IgE受體與抗原發(fā)生交聯(lián)后脫顆粒，釋放組胺及細(xì)胞因子等物質(zhì)，導(dǎo)致皮膚黏膜血管通透性暫時增加而引起局限性水腫的表現(xiàn)[1]。但近年來，一些非經(jīng)典的發(fā)病機制和通路開始引起了人們的重視[2]。有臨床研究顯示，血小板活化因子( platelet-activating factor，PAF)及其水解酶(platelet-activating factor acetylhydrolase，PAF-AH)相關(guān)通路在蕁麻疹發(fā)病過程中可能起到一定作用[3，4]。其中，PAF是一種高活性的內(nèi)源性炎癥因子，具有廣泛的生物學(xué)活性，在一些炎癥反應(yīng)性疾病中發(fā)揮重要的病理生理學(xué)作用。而PAF-AH能夠?qū)AF水解為不具有生理活性的代謝產(chǎn)物[5]，是主要的PAF拮抗劑。因此，兩者相互作用，或?qū)w內(nèi)炎癥反應(yīng)具有調(diào)節(jié)作用。

本研究通過測定蕁麻疹患者體內(nèi)PAF及PAF-AH水平，評估兩者與蕁麻疹病情嚴(yán)重程度的相關(guān)性，旨在進(jìn)一步探索有關(guān)的作用機制和臨床意義，為蕁麻疹的診療提供新的思路和方向。

1 資料與方法

1.1 診斷及納入標(biāo)準(zhǔn) 急、慢性蕁麻疹患者的臨床診斷按我國2014年蕁麻疹診療指南標(biāo)準(zhǔn)[6]界定，入組時同時符合以下條件：(1)年齡18～60歲，性別不限；(2)處于病情活動期，同時排除藥物或食物致敏；(3)非誘導(dǎo)性蕁麻疹或蕁麻疹性血管炎患者；(4)近一周未服用抗組胺藥、抗凝血藥或未靜脈應(yīng)用糖皮質(zhì)激素者；(5)非孕婦及哺乳期婦女；(6)未合并心腦血管疾病、風(fēng)濕性疾病及腫瘤相關(guān)疾病。正常對照組患者未患有蕁麻疹及其它過敏性疾病，并同時滿足上述第(1)、(4)、(5)、(6)項標(biāo)準(zhǔn)。

1.2 臨床資料 本次研究共收集2016年10月至2017年3月于復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院皮膚科門診就診的急、慢性蕁麻疹患者及正常對照者各32例。其中急性蕁麻疹組男13例，女19例，年齡19～60歲，平均(36.91±12.75)歲，病程數(shù)小時至3周不等；慢性蕁麻疹組男14例，女18例，年齡18～59歲，平均(38.66±12.59)歲，病程2個月至15年不等；對照組來自復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院體檢中心，男16例，女16例，年齡23～57歲，平均(34.94±11.60)歲。各組受試者性別、年齡之間差異無明顯統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，上述受試者均無免疫抑制劑服用史。

1.3 樣本收集 臨床上收集患者病史，記錄患者病程長度、病情嚴(yán)重程度，后者采用蕁麻疹活動性評分表(UAS)進(jìn)行評估，同時采取肘靜脈血5 mL置于非抗凝管中，室溫靜置30 min后離心(3000 r/min，10 min)，收集血清，分裝于2個潔凈1.5 mL EP管中，-80℃超低溫冰箱保存待檢測。

1.4 PAF及PAF-AH水平測定 采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測各血清樣本中PAF及PAF-AH水平。PAF及PAF-AH試劑盒分別購自Elabscience和R&D公司，檢測方法和測定換算均按說明書嚴(yán)格執(zhí)行，所有樣本的操作在同一實驗室中完成，設(shè)置雙孔，取均值。檢測儀器為酶標(biāo)儀(芬蘭Thermo DENLEY DRAGON Wellscan MK 3)。

1.6 倫理 本研究已通過復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院倫理委員會審核通過，所有患者及正常對照者入組時均已簽署書面知情同意書。

2 結(jié)果

2.1 蕁麻疹患者PAF水平高于正常對照組 急、慢性蕁麻疹患者及正常對照者體內(nèi)PAF水平如圖1a所示。通過測定，急性蕁麻疹患者PAF平均水平為(430.4±79.01)pg/mL，慢性蕁麻疹組為(391.6±49.36)pg/mL，均較正常對照組(224.5±31.67)pg/mL明顯偏高，且有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05及P<0.01)。但急性和慢性蕁麻疹組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

2.2 蕁麻疹患者PAF-AH水平與正常對照相比無明顯差異 測定急、慢性蕁麻疹患者及正常對照者體內(nèi)PAF-AH水平，如圖1b所示。急性蕁麻疹患者PAF-AH平均水平為(129.7±9.54)ng/mL，正常對照組為(125.1±9.70)ng/mL，兩者差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。慢性蕁麻疹組PAF-AH平均水平為(123.3±9.77)ng/mL，與正常對照組及急性蕁麻疹組相比均無明顯統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

2.3 蕁麻疹患者血清PAF水平與病情嚴(yán)重程度存在正相關(guān) 蕁麻疹患者體內(nèi)PAF水平與病情嚴(yán)重程度關(guān)系如圖2所示。急性蕁麻疹患者的UAS評分為1～6分不等，平均為(4.34±1.38)分。由圖2a可知，隨著UAS評分的增高，樣本PAF均值水平也逐漸增高，兩者呈現(xiàn)正相關(guān)關(guān)系。采用Spearman等級相關(guān)分析后進(jìn)一步證實了該結(jié)果，且具有統(tǒng)計學(xué)意義(r=0.3633，P<0.05)。與之類似，慢性蕁麻疹組UAS評分介于0～6分，平均為(2.69±1.65)分。圖2b顯示了慢性蕁麻疹病情嚴(yán)重程度及PAF水平的相關(guān)性，經(jīng)過Spearman等級相關(guān)分析后提示兩者間同樣存在正相關(guān)性(r=0.4435，P<0.05)。

2.4 蕁麻疹患者血清PAF-AH水平與病情嚴(yán)重程度無明顯相關(guān)性 a蕁麻疹患者體內(nèi)PAF-AH水平與病情嚴(yán)重程度關(guān)系見圖2c、圖2d。由圖可知，樣本PAF-AH均值水平的變化與蕁麻疹UAS評分等級之間未見明顯相關(guān)性。Spearman等級相關(guān)分析提示，在急、慢性蕁麻疹患者中，PAF-AH水平與蕁麻疹病情嚴(yán)重程度無關(guān)，P>0.05。

a:急、慢性蕁麻疹組PAF水平明顯高于正常對照組，* P<0.05；** P<0.01；b:急、慢性蕁麻疹組PAF-AH水平與正常對照組之間無明顯差異,P>0.05

各組按UAS評分高低分為不同等級，采用描點標(biāo)注各等級下對應(yīng)樣本PAF或PAF-AH分布情況，各條柱高度表示該等級下的PAF均值水平;a:急性蕁麻疹組血清PAF水平與UAS評分呈正相關(guān)關(guān)系，P<0.05；b:慢性蕁麻疹組血清PAF水平與UAS評分呈正相關(guān)關(guān)系，P<0.05；c:急性蕁麻疹組血清PAF-AH水平與UAS評分無明顯相關(guān)性，P>0.05；d:慢性蕁麻疹組血清PAF-AH水平與UAS評分無明顯相關(guān)性，P>0.05

3 討論

PAF作為一種內(nèi)源性炎癥因子，可由嗜堿性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、嗜酸粒細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、肥大細(xì)胞等分泌產(chǎn)生[7]?，F(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)PAF與蕁麻疹、血管炎、銀屑病以及支氣管哮喘等多種炎癥性血管性疾病的發(fā)生發(fā)展有關(guān)[7-9]。目前認(rèn)為，PAF主要通過增強化學(xué)趨化、刺激脫顆粒、促進(jìn)白細(xì)胞產(chǎn)生氧化應(yīng)激物質(zhì)，同時加強炎癥細(xì)胞對血管內(nèi)皮的黏附能力，從而加重炎性反應(yīng)的程度[10]。

PAF-AH能夠通過特異性分解PAF甘油骨架的sn-2位乙酰基，將PAF水解為不具有生理活性的代謝產(chǎn)物[5]。巨噬細(xì)胞能在分化過程中釋放這種酶，故被認(rèn)為是其主要的來源之一。由于PAF-AH是PAF重要的降解酶，因此其分泌程度對后者水平具有顯著調(diào)控作用，并繼而發(fā)揮炎癥調(diào)節(jié)功能，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)PAF-AH與系統(tǒng)性紅斑狼瘡、感染性休克及支氣管哮喘等疾病存在不同程度的相關(guān)性[11]。

盡管PAF及其水解酶相關(guān)通路在蕁麻疹發(fā)病過程中所起的作用尚不明確，但已有證據(jù)顯示，PAF可增強舒張血管和增強血管的通透性，人體皮下注射后可引起對應(yīng)部位產(chǎn)生風(fēng)團(tuán)和血管性水腫[3，4]；此外，一種名為盧帕他定的新型抗組胺藥可同時與體內(nèi)PAF特異性受體相互反應(yīng)，發(fā)揮拮抗PAF的作用，同時降低PAF引起的血小板聚集癥狀，現(xiàn)已在蕁麻疹的臨床治療中取得了較好的療效[12]。Nakajima等[11]通過體外研究小鼠骨髓來源的肥大細(xì)胞發(fā)現(xiàn)，PAF及PAF-AH均可在肥大細(xì)胞激活后可產(chǎn)生，其分泌PAF-AH與脫顆粒相關(guān)的細(xì)胞信號傳導(dǎo)通路有關(guān)，并由此對體內(nèi)的炎癥水平進(jìn)行調(diào)節(jié)。

本研究結(jié)果顯示急、慢性蕁麻疹患者體內(nèi)PAF水平均明顯升高，且與病情嚴(yán)重程度存在正相關(guān)關(guān)系，這與現(xiàn)有理論相符，說明在蕁麻疹的發(fā)病過程中，患者體內(nèi)的炎癥細(xì)胞、真皮成纖維細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞等處于活化狀態(tài)，分泌大量PAF，生成量隨炎癥反應(yīng)的加強而增加。本研究還發(fā)現(xiàn)PAF-AH的水平在蕁麻疹患者中未見明顯差異，提示PAF水平的偏高并非因其降解能力異常所致，PAF生成過多或在蕁麻疹的發(fā)病中發(fā)揮更為主要的作用。

綜上，我們認(rèn)為對蕁麻疹患者體內(nèi)PAF水平的監(jiān)測，可為臨床上疾病的診斷提供幫助，并可作為評估病情的有效指標(biāo)。而隨著PAF相關(guān)通路研究的進(jìn)一步深入，拮抗PAF或可成為尋找抗炎抗過敏藥物的新靶點，有望為急、慢性蕁麻疹乃至其它過敏性疾病的治療提供新的理論依據(jù)和研究方向。