安康市部分桑樹栽培品種桑葉1—脫氧野尻霉素含量的測(cè)定

禚蘇 王中興 韓敏

摘要：為促進(jìn)蠶桑產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，促進(jìn)桑葉產(chǎn)品的開發(fā)，以安康地區(qū)具有代表性的24個(gè)桑樹栽培品種的桑葉為原材料，運(yùn)用反相高效液相色潽法測(cè)定各品種春季桑葉中1-脫氧野尻霉素（DNJ）的含量。結(jié)果表明，安康地區(qū)桑樹品種中桑葉DNJ含量具有顯著差異，其中旬陽(yáng)青皮荊桑中的含量最高為0.381 5%，顯著高于其他品種；大坪2號(hào)變異、恒2號(hào)、安選1號(hào)、流水青桑、當(dāng)?shù)睾！⑸?號(hào)、大坪桐桑、箔籃桑、前進(jìn)桑含量較高；而光明桑、荊桑12號(hào)等品種含量較低。旬陽(yáng)青皮荊桑DNJ含量最高，可以作為DNJ提取的桑樹品種。

關(guān)鍵詞：1-脫氧野尻霉素；桑葉；反相高效液相色潽法；安康市

中圖分類號(hào)：S888.2；S886.9 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2018）11-0093-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2018.11.023

Abstract： The contents of 1-deoxynojirimycin （DNJ） in spring leaves from 24 representative cultivars of mulberry in Ankang city were determinated using reversed-phase high performance liquid for promoting the development of sericulture industry and the development of mulberry products. The results indicate that the contents of DNJ in different mulberry cultivars have significant differences. The content of DNJ in leaves of Xunyangqingjing is 0.3815%，it is significantly higher than the other varieties. The contents of DNJ in leaves of Daping No. 2 variation，Heng No. 2，Anxuan No. 1， Liushuiqingsang， Local husang，Shen No. 2，Dapingtongsang，Bolansang， Qianjinsang are relatively high； the contents of DNJ in leaves of Guangmingsang，Jingsang are relatively low. The variety of Xunyangqingjing could be as material for exaction DNJ because of the highest content of DNJ.

Key words： 1-deoxynojirimycin； mulberry leaf； reversed-phase high performance liquid chromatography； Ankang city

1-脫氧野尻霉素（DNJ）是一種極性化合物，研究證實(shí)它對(duì)α-葡萄糖苷酶具有抑制作用[1-3]，對(duì)血糖、甘油三酯、膽固醇等多項(xiàng)生理代謝指標(biāo)具有良好的調(diào)節(jié)作用[4-8]，可以緩解肝臟的傷害[9，10]，降低胰島素抵抗[11]，保護(hù)血管[12，13]，治療肥胖癥[14，15]，抗病毒[16-18]，抑制腫瘤[19-22]，在醫(yī)療保健方面有著重大的應(yīng)用價(jià)值。

DNJ在自然界分布廣泛，部分植物、微生物和昆蟲體內(nèi)都存在DNJ，而桑樹是已知植物中DNJ含量最高的品種。研究表明，不同桑樹品種間DNJ含量具有顯著差異[23]，確定高含量DNJ桑樹品種，對(duì)于DNJ的應(yīng)用具有重大的現(xiàn)實(shí)意義。陜西省安康市座落在秦嶺和巴山之間，海拔跨度大，物種豐富，蠶桑產(chǎn)業(yè)在該地具有悠久的歷史，桑樹品種豐富[24-26]，桑樹品種選育具有良好的物質(zhì)和歷史基礎(chǔ)。本研究運(yùn)用反相高效液相色潽法對(duì)安康市24個(gè)典型桑樹品種的桑葉進(jìn)行DNJ含量測(cè)定，確定適合DNJ生產(chǎn)的桑樹品種，對(duì)于蠶桑產(chǎn)業(yè)的發(fā)展具有重要意義，為DNJ高含量桑樹品種的選育奠定了基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

供試的24個(gè)桑樹品種桑葉采自安康學(xué)院蠶桑研究品種資源圃，品種為前進(jìn)桑、恒10號(hào)、大坪2號(hào)變異、旬陽(yáng)青皮荊桑、恒2號(hào)、安康藤桑、荊桑12號(hào)、恒7號(hào)、當(dāng)?shù)睾！⒐饷魃?、?號(hào)、恒8號(hào)、大坪3號(hào)、恒3號(hào)、流水青桑、流水1號(hào)、恒日新街良桑、大坪桑、安選1號(hào)、箔籃桑、大坪桐桑、安選2號(hào)、秦巴桑、旬陽(yáng)白皮。選擇生長(zhǎng)一致的植株，取桑枝頂自下7、8片處，3次重復(fù)。

1.2 主要試劑和儀器

1-Deoxynojirimycin-HCl（1-DNJ-HCl，美國(guó)Sigma公司）；9-Fluorenyl-methyl chloroformate（FMOC-Cl，F(xiàn)luca公司）；乙腈、醋酸、甲醇（均為色譜純）；其余試劑均為分析純；試驗(yàn)用水為重蒸水。

高效液相色譜儀1260 Infinity（美國(guó)安捷倫公司）；超聲波清洗機(jī)KQ-250D（昆山市超聲波儀器有限公司）。

1.3 桑葉DNJ含量的測(cè)定

所采樣品均采用反相高效液相色潽-紫外檢測(cè)法測(cè)定[27]，每個(gè)樣品重復(fù)測(cè)定2次，取平均值。

1.4 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)運(yùn)用PASW Statistics 18進(jìn)行分析處理。

2 結(jié)果與分析

2.1 桑葉測(cè)試樣品的高效液相色譜

按照“1.3”的方法對(duì)DNJ標(biāo)樣和桑葉樣品進(jìn)行含量測(cè)定。分離結(jié)果見圖1。通過(guò)圖1可見，DNJ的分離效果較佳。

2.2 不同桑樹品種間桑葉DNJ含量的比較

通過(guò)方差齊性檢驗(yàn)（表1）可以看出，顯著性沒有達(dá)到最小值0.05，所以差異不顯著，這證明方差是齊性的，各品種間可以采用單因素方差分析進(jìn)行比較，各桑樹品種間DNJ含量見圖2。

通過(guò)單因素方差分析表2可以看出，部分桑樹品種間DNJ含量具有顯著性差異。而從同質(zhì)子集表3中可以看出，根據(jù)桑葉中的DNJ含量可將24個(gè)品種區(qū)分為11類。

3 結(jié)論

由上述試驗(yàn)研究可以看出，安康地區(qū)桑樹品種中桑葉DNJ含量具有顯著差異，其中旬陽(yáng)青皮荊桑中的含量最高，為0.381 5%，顯著高于其他品種；大坪2號(hào)變異、恒2號(hào)、安選1號(hào)、流水青桑、當(dāng)?shù)睾！⑸?號(hào)、大坪桐桑、箔籃桑、前進(jìn)桑含量較高；而光明桑、荊桑12號(hào)等品種含量較低。

這種顯著性差異為DNJ的研究和應(yīng)用奠定良好的基礎(chǔ)。第一，對(duì)于同一區(qū)域、同一時(shí)間段生長(zhǎng)的不同桑樹品種進(jìn)行桑葉DNJ含量的測(cè)定，并且能夠得到顯著差異，說(shuō)明不同桑樹品種產(chǎn)生DNJ是有差異的，為桑樹產(chǎn)生DNJ含量的內(nèi)在機(jī)理奠定基礎(chǔ)。

第二，為DNJ的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。提取分離DNJ是DNJ應(yīng)用的基礎(chǔ)，而選擇合適的桑樹品種則是提取分離DNJ的基礎(chǔ)。選擇良好的桑樹品種，除了要對(duì)桑樹葉的DNJ含量有所了解，還要對(duì)桑樹葉片的生長(zhǎng)量以及桑樹的抗病性等方面有所了解，綜合考慮，選擇最佳品種。在后續(xù)的試驗(yàn)中，將結(jié)合桑樹本身的生理特性進(jìn)行研究。

參考文獻(xiàn)：

[1] SAUNIER B，KILKER R J，TKACZ J S，et al. Inhibition of N-linked complex oligosaccharide formation by 1-deoxynojirimycin，an inhibitor of processing glucosidases[J].J Biol Chem，1982，257（23）：14155-14161.

[2] GROSS V，ANDUS T，TRAN-THI T A，et al. 1-deoxynojirimycin impairs oligosaccharide processing of alpha 1-proteinase inhibitor and inhibits its secretion in primary cultures of rat hepatocytes[J].J Biol Chem，1983，258（20）：12203-12209.

[3] LI Y G，JI D F，ZHONG S，et al.1-deoxynojirimycin inhibits glucose absorption and accelerates glucose metabolism in streptozotocin-induced diabetic mice[J].Sci Rep，2013，3：1377.

[4] HU X Q，THAKUR K，CHEN G H，et al. Metabolic effect of 1-deoxynojirimycin from mulberry leaves on db/db diabetic mice using liquid chromatography-mass spectrometry based metabolomics[J].J Agric Food Chem，2017，65（23）：4658-4667.

[5] SEVSEK A，CELAN M，ERJAVEC B，et al. Bicyclic isoureas derived from 1-deoxynojirimycin are potent inhibitors of beta-glucocerebrosidase[J].Org Biomol Chem，2016，14（37）：8670-8673.

[6] KWON H J，CHUNG J Y，KIM J Y，et al. Comparison of 1-deoxynojirimycin and aqueous mulberry leaf extract with emphasis on postprandial hypoglycemic effects：in vivo and in vitro studies[J].J Agric Food Chem，2011，59（7）：3014-3019.

[7] LI Y G，JI D F，ZHONG S，et al. Hybrid of 1-deoxynojirimycin and polysaccharide from mulberry leaves treat diabetes mellitus by activating PDX-1/insulin-1 signaling pathway and regulating the expression of glucokinase，phosphoenolpyruvate carboxykinase and glucose-6-phosphatase in alloxan-induced diabetic mice[J]. J Ethnopharmacol，2011，134（3）：961-970.

[8] KOJIMA Y，KIMURA T，NAKAGAWA K，et al. Effects of mulberry leaf extract rich in 1-deoxynojirimycin on blood lipid profiles in humans[J].J Clin Biochem Nutr，2010，47（2）：155-161.

[9] LIU Q，LI X，LI C，et al. 1-deoxynojirimycin alleviates liver injury and improves hepatic glucose metabolism in db/db mice[J].Molecules，2016，21（3）：279.

[10] DO H J，CHUNG J H，HWANG J W，et al. 1-deoxynojirimycin isolated from Bacillus subtilis improves hepatic lipid metabolism and mitochondrial function in high-fat-fed mice[J].Food Chem Toxicol，2015，75：1-7.

[11] LIU Q，LI X，LI C，et al. 1-deoxynojirimycin alleviates insulin resistance via activation of insulin signaling PI3K/AKT pathway in skeletal muscle of db/db mice[J].Molecules，2015， 20（12）：21700-21714.

[12] KIJIMA R E S，HONMA T，YAMAMOTO K，et al. 1-Deoxynojirimycin attenuates high glucose-accelerated senescence in human umbilical vein endothelial cells[J].Exp Gerontol，2014，55（5）：63-69.

[13] CHAN K C，LIN M C，HUANG C N，et al. Mulberry 1-deoxynojirimycin pleiotropically inhibits glucose-stimulated vascular smooth muscle cell migration by activation of AMPK/RhoB and down-regulation of FAK[J].J Agric Food Chem，2013，61（41）：9867-9875.

[14] TSUDUKI T，KIKUCHI I，KIMURA T，et al. Intake of mulberry 1-deoxynojirimycin prevents diet-induced obesity through increases in adiponectin in mice[J]. Food Chem，2013，139（1-4）：16-23.

[15] KONG W H，OH S H，AHN Y R，et al. Antiobesity effects and improvement of insulin sensitivity by 1-deoxynojirimycin in animal models[J].J Agric Food Chem，2008，56（8）：2613-2619.

[16] LIU M，WANG S，ZHOU Y D，et al. An iminosugar N-pentafluorobenzyl-1-deoxynojirimycin as a novel potential immunosuppressant for the treatment of Th2-related diseases[J].Bioorg Med Chem Lett，2012，22（1）：564-570.

[17] 彭忠田，申 璀，譚德明，等.脫氧野尻霉素衍生物抗乙型肝炎病毒的體外試驗(yàn)研究[J].中國(guó)藥房，2007（1）：22-24.

[18] JACOB J R，MANSFIELD K，YOU J E，et al. Natural iminosugar derivatives of 1-deoxynojirimycin inhibit glycosylation of hepatitis viral envelope proteins[J].J Microbiol，2007，45（5）：431-440.

[19] 婁德帥，范 濤，王儲(chǔ)炎，等.全蠶粉中1-脫氧野尻霉素的提取分離及分離物對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用[J].蠶業(yè)科學(xué)，2010（1）：109-114.

[20] ZHAO Y，LIU W，ZHOU Y，et al. N-（8-（3-ethynylphenoxy）octyl-1-deoxynojirimycin suppresses growth and migration of human lung cancer cells[J].Bioorg Med Chem Lett，2010， 20（24）：7540-7543.

[21] WANG R J，YANG C H，HU M L. 1-Deoxynojirimycin inhibits metastasis of B16F10 melanoma cells by attenuating the activity and expression of matrix metalloproteinases-2 and -9 and altering cell surface glycosylation[J].J Agric Food Chem， 2010，58（16）：8988-8993.

[22] ZHAO Y，ZHOU Y，O'BOYLE K M，et al. Hybrids of 1-deoxynojirimycin and aryl-1，2，3-triazoles and biological studies related to angiogenesis[J].Bioorg Med Chem，2008，16（12）：6333-6337.

[23] 施新琴，陳傳杰，李 峰，等.山東省部分桑樹栽培品種桑葉中的1-脫氧野尻霉素含量測(cè)定[J].蠶業(yè)科學(xué)，2013（1）：177-182.

[24] 張成和.陜西桑樹品種資源及其利用現(xiàn)狀[J].陜西蠶業(yè)，1985（4）：15-20.

[25] 陳正余.安康市桑樹資源狀況調(diào)查與分析[J].中國(guó)蠶業(yè)，2005（1）：74-76.

[26] 楚 渠，彭云武.利用SSR標(biāo)記對(duì)陜西地方桑樹品種的遺傳多樣性分析[J].陜西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015（6）：17-20.

[27] 施新琴，崔為正，裘立群，等.用反相高效液相色譜-紫外檢測(cè)法測(cè)定1-脫氧野尻霉素的含量[J].蠶業(yè)科學(xué)，2006（1）：146-149.