手足口病腸道病毒核酸與血清學檢測的臨床診斷價值分析

吳雙雙 陳東 周俊 趙仕勇 吳亦棟?

手足口病是由腸道病毒引起的傳染疾病，好發(fā)于兒童，尤其＜3歲年齡發(fā)病率最高。臨床主要表現(xiàn)為發(fā)熱、口腔和四肢末端的斑丘疹、皰疹，重者可出現(xiàn)腦膜炎、腦炎、腦脊髓炎和循環(huán)障礙等。手足口病由多種腸道病毒引起，經(jīng)糞口途徑和呼吸道飛沫傳播。手足口病感染的主要病原體為腸道病毒71型（EV71）和柯薩奇病毒A組16型（CA16）［1］。作者收集本院手足口病患者的標本，目的在于對手足口病進行病原學檢測并對主要病原體進行分型，以便更好地了解本病的病原學特征，有助于本病的預防，診斷和治療。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選擇2016年6月至2017年5月本院手足口病患者1127例，其中男688例，女439例。手足口病診斷標準參照我國衛(wèi)生部頒發(fā)的《手足口病診斷指南》［2］。

1.2 方法 （1）試劑與儀器：手足口腸道病毒核酸檢測試劑來源于江蘇碩世生物科技有限公司；手足口腸道病毒抗體檢測試劑來源于北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司。所使用的儀器為ABI-7500 FastDX全自動熒光實時定量PCR儀。（2）檢驗方法：①手足口病毒核酸檢測：采用實時熒光定量PCR法檢測核酸中的腸道病毒通用型，EV71和CA16。②手足口病毒抗體檢測：采用捕獲法酶聯(lián)免疫吸附實驗原理對EV71和CA16 IgM抗體進行檢測。

1.3 統(tǒng)計學分析 采用SPSS21.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料用χ2檢驗，病毒核酸檢測結果與血清學檢測結果進行Kappa一致性檢測。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 核酸和抗體檢測結果 男女性患者腸道病毒核酸檢測構成比差異無統(tǒng)計學意義（χ2=0.408，P=0.816）。男女性患者腸道病毒抗體檢測的構成比無顯著性差別（χ2=0.155，P=0.694）。見表 1、2。

表1 患者腸道病毒核酸檢測結果［n（%）］

表2 患者腸道病毒抗體檢測結果［n（%）］

2.2 手足口腸道病毒核酸與手足口腸道病毒血清學檢測結果一致性的分析 對手足口腸道病毒EV71與手足口腸道病毒EV71血清學檢測結果進行Kappa一致性檢驗，發(fā)現(xiàn)兩者有較好的一致性，Kappa=0.704，見表3。對手足口腸道病毒CA16與手足口腸道病毒CA16血清學檢測結果進行Kappa一致性檢驗，發(fā)現(xiàn)兩者一致性較差，Kappa=0.241，見表4。

表3 EV71腸道病毒核酸與腸道病毒血清學檢測結果比較（n）

表4 CA16腸道病毒核酸與腸道病毒血清學檢測結果比較（n）

3 討論

引起手足口病的病毒有20多種，其中以EV71和CA16為主，但腸道病毒型別比例在不斷變化，寧波檢測結果EV71為63.7%，CA16為24.0%，其他腸道病毒為12.3%。上海檢測結果EV71為30.6%，CA16為8.8%，CA6為31.9%。重慶檢測結果EV71為4.7%，CA16為1.5%，CA6為67.2%，其他腸道病毒為26.6%［3］。本資料1127例手足口病腸道病毒陽性結果核酸檢測顯示EV71為25.8%，CA16為8.4%，其他腸道病毒為57.5%；抗體檢測顯示EV71為32.7%，CA16為7.1%。所以需要進行長期全面的檢測，以達到對疾病的預防和控制。

本資料EV71核酸與抗體檢測結果進行比較，發(fā)現(xiàn)兩者一致性較好，且血清學檢測的敏感性高于EV71核酸的檢測，將兩者聯(lián)合檢測能提高EV71的檢出率，而CA16核酸與抗體檢測結果比較發(fā)現(xiàn)兩者的一致性較差，可能與通常EV71在發(fā)病1d便可檢測到抗體，3d后檢測率可＞90%；而CA16在發(fā)病4d后可檢測到，并在發(fā)病7d后檢測率可達100%［4］。本資料還發(fā)現(xiàn)在EV71抗體和核酸檢測雙陽性的222份標本中，CA16交叉反應陽性率為7.2%。EV71-IgM抗體交叉反應陽性率與文獻報道數(shù)值接近［5］。樣本中檢測出現(xiàn)EV71－IgM和CA16－IgM雙抗體陽性結果，這是由于EV71與CA16基因水平同源性為77%，而氨基酸同源性為86%［6］。機體產(chǎn)生一種能識別這兩種病毒共同肽段的抗體，從而產(chǎn)生抗體，部分EV71與CA16存在的交叉反應可以通過測量兩者在450nm處的吸光度的比值來判斷，另一部分通過與核酸檢測相結合可以成功判定是EV71還是CA16感染。 張欣等研究顯示［7］低年齡組感染其他EV的風險較大，本資料中患者以＜5歲為主，尤其以＜3歲患者占79.5%，故應加強對嬰幼兒的監(jiān)管。

手足口病是嚴重影響兒童健康及生命的傳染病，較多報道，目前我國已有EV71疫苗，可保護90%由EV71引起的手足口病和80%由EV71引起的其他疾病如皰疹性咽峽炎或相關神經(jīng)癥狀［8］，但仍有較多問題亟待解決。EV71在各地流行的病毒株不同，抗原性和免疫原性存在一定差異，且不能排除存在流行毒株變異的可能性。因此聯(lián)合檢測以提高檢測率，并對非EV71、CA16的其他腸道病毒進行全面檢測，對臨床診斷具有重大意義，最終達到預防感染和控制疾病流行的目的。