子宮內(nèi)膜癌中錯配修復蛋白、P27及Ki67的表達及臨床意義＊

王晨亮，彭麗姿，張靚

(江西省九江市第一人民醫(yī)院病理科，九江 332000)

子宮內(nèi)膜癌作為女性生殖道常見的惡性腫瘤，近年來隨著生活環(huán)境及飲食結構的變化，發(fā)病率越來越高，普通人群中發(fā)病率為6.32/10萬[1]。而在子宮內(nèi)膜癌中，又以子宮內(nèi)膜樣腺癌為主要發(fā)病類型。其發(fā)病的主要原因是由無抵抗的高水平的雌激素不斷刺激，導致細胞持續(xù)增殖，直至惡變

[2]。女性子宮內(nèi)膜本身受機體激素周期性調(diào)控，呈現(xiàn)規(guī)律的增生及脫落；當女性內(nèi)分泌系統(tǒng)不穩(wěn)定的時候，尤其是在圍絕經(jīng)期期間，由于卵泡的衰竭，不能產(chǎn)生足夠的孕激素，與雌激素協(xié)同作用于子宮內(nèi)膜，使得子宮內(nèi)膜的持續(xù)性增生。當細胞分裂增生的過程中，如果出現(xiàn)DNA修復功能受損，就容易導致腫瘤的發(fā)生。因此，在臨床上，患者常伴有肥胖、多囊卵巢、月經(jīng)紊亂等癥狀；而在微觀層面則常常伴隨DNA修復功能的異常。

1　材料和方法

1.1材料 收集我院及九江市婦幼保健院2013年-2017年病理標本66例，其中正常內(nèi)膜20例，非典型增生內(nèi)膜16例，高分化子宮內(nèi)膜樣癌13例，中分化子宮內(nèi)膜樣癌9例，低分化子宮內(nèi)膜樣癌8例。年齡34-69歲。

1.2方法 所有標本均經(jīng)過10%的中性緩沖甲醛固定，標準取材，常規(guī)制片，HE染色；組織采用免疫組化SP三步法，檢測錯配修復蛋白、P27及Ki67的表達情況。SP試劑盒購自北京中杉金橋試劑公司， 即用型，MLH1、PMS2、MSH2、MSH6、P27、Ki67。試劑經(jīng)過校驗，實驗過程按照說明書進行，同時以組織內(nèi)非腫瘤細胞作為內(nèi)對照。

1.3結果判定 所有標記均為細胞核著色，呈棕黃色改變，任何強度的著色均視為陽性，瀏覽切片的全部范圍，通過觀察腫瘤及內(nèi)對照，在試驗結果可信的基礎上，對腫瘤細胞進行評價。錯配修復蛋白(MLH1、PMS2、MSH2、MSH6) 的判定， 以 MLH1 或MSH2的表達缺失、合并或者不合并PMS2及MSH6的缺失，視為MMR缺陷[3]；而P27和Ki67估算陽性細胞所占所有腫瘤細胞的百分比，按10%遞進。

1.4統(tǒng)計學分析 采用SPSS 19.0作為統(tǒng)計分析軟件，運用方差分析和Fisher檢驗，P＜0.05被認為具有統(tǒng)計學差異。

2　結果

2.1P27表達結果 運用方差分析，F(xiàn)值=3.387，P=0.014，P27的表達在不同分組之間存在差異；組內(nèi)兩兩比較，中分化腺癌和高分化腺癌分別與正常組和非典型增生都存在差異，P＜0.05。

2.2Ki-67表達結果 運用卡方檢驗，P=0.030，Ki67的表達在各組之間存在差異；組內(nèi)兩兩比較，中分化腺癌、高分化腺癌和低分化腺癌分別與正常組和非典型增生都存在差異，P＜0.05。

2.3錯配修復蛋白表達結果 運用Fisher精確檢驗，P=0.168，錯配修復蛋白（MMR）在各組間分布無差異。本次試驗中大部分標本染色均呈現(xiàn)陽性染色無論分化程度；因錯配修復蛋白在正常組織中呈現(xiàn)陽性著色，MMR缺失組織則呈陰性染色，染色模式呈現(xiàn)“全”或“無”的形態(tài)，而本次實驗的病例主要以MLH1和PMS2缺失為主，而且在低分化腺癌中比例略高。

表1　P27和Ki67的表達

表2　錯配修復蛋白的表達

3　討論

隨著分子病理的發(fā)展，近些年來，錯配修復蛋白作為腫瘤發(fā)生和發(fā)展中的一個重要環(huán)節(jié)，越發(fā)受到重視；甚至在腫瘤化療的敏感性方面也具有指導意義[4]。錯配修復蛋白是一組由錯配修復基因編碼的蛋白質(zhì)，在人類機體中主要由MLH1、MLH3、PMS1、PMS2、MSH2、MSH3、MSH4、MSH5、MSH6這九種蛋白質(zhì)來執(zhí)行功能。其中以MLH1、PMS2。MSH2、MSH6最為重要，他們可兩兩結合形成二聚體對DNA序列中的復制錯誤，進行糾正。而錯配修復基因的胚系突變則是引起Lych綜合征的根本原因[5]。同時，MLH1的甲基化則是引起散發(fā)性結直腸癌的重要原因。因此，錯配修復基因的檢測對腫瘤患者的治療及預后具有重要意義。大量的國內(nèi)外文獻顯示，用免疫組化（IHC）的方法進行錯配修復蛋白的檢測，簡單易行，成本較低，而且與基因檢測對比具有較高的符合率[6]。

P27全稱為周期素依賴的蛋白酶抑制蛋白，由P27基因編碼，定位于12p13，包括2個外顯子和2個內(nèi)含子，編碼198個氨基酸構成的蛋白質(zhì)，屬于細胞周期蛋白依賴性蛋白激酶抑制劑CIP/KIP蛋白家族成員之一[7]。P27具有多種生物學功能，能廣泛抑制各種細胞周期蛋白和細胞周期依賴性激酶CDK的活性，從而抑制細胞增殖。作用途徑為通過與CDK或細胞周期素復合物cyclinD-CDK結合，抑制CyclinE-CDK2和CyclinD-CDK4等G1期激酶復合物，阻止細胞從G1期進入S期，控制細胞周期的轉(zhuǎn)變，對細胞周期進行負調(diào)控，具有抑制細胞增生的作用。從而使細胞有機會修復損傷的DNA或DNA復制產(chǎn)生的錯誤。P27蛋白的過度表達使細胞停滯于G1期，P27蛋白低表達或缺失可使細胞增殖失控，增殖與凋亡失衡，促進腫瘤的發(fā)生和發(fā)展[8]。

Ki-67是一種表達于增殖細胞的核抗原，位于人第10號染色體，其具體功能尚不清楚，但Ki-67抗原主要表達于細胞增殖周期的G1、S(DNA合成期)、G2期和M期，而在G0期不表達。由于其半衰期短，可以準確地反映細胞的增殖活性[9]。Ki-67作為標記細胞增殖狀態(tài)的抗原，在G1期和S期表達較低，在M期表達較高，近年已廣泛用于研究腫瘤的生物學行為，判斷腫瘤的危害性，是最具前途的細胞增殖標記。有研究表明，它與很多惡性腫瘤的發(fā)展、轉(zhuǎn)移及預后具有相關性。

通過本次研究發(fā)現(xiàn)，P27與Ki67之間存在負相關，但是，又不是完全的對應關系，以此印證了除P27以外，細胞周期還受到其他諸多因素的影響[10]。本研究主要旨在探究子宮內(nèi)膜癌中P27對細胞周期的影響。在結果判定中，顯示出幾個有趣的現(xiàn)象：⑴在同一患者的標本中，正常組織及不同腫瘤區(qū)域中，P27與Ki67均表現(xiàn)出不一樣的著色強度和陽性比例，說明在腫瘤的發(fā)生與發(fā)展過程中，P27和Ki67均呈現(xiàn)出不一樣的表達狀態(tài)，又因為Ki67的表達只是腫瘤的所處周期的一個表現(xiàn)，因而P27的表達才顯得意義特別，值得探究；⑵在同一組織的相同區(qū)域，P27與Ki67的變化也是存在對應關系，說明Ki67的變化至少一部分是由于P27的改變所導致，因此P27的狀態(tài)也同樣可以用來判斷腫瘤的預后情況分析；⑶因為腫瘤異質(zhì)性的問題，對于全片的P27及Ki67的表達，似乎并不合適用一個總的數(shù)據(jù)來概括。因此既往工作中，對腫瘤標記的定性結論，存在一定的局限性，因為，傳統(tǒng)的計數(shù)方法是尋找到一個陽性比例最高的區(qū)域，進行計數(shù)，盡管有時這樣的區(qū)域在全片中所占比例相當?shù)停贿@就導致對腫瘤的平均增殖狀態(tài)呈現(xiàn)一個過高的估計。因此，對不同的病例，不同區(qū)域，用一個描述性結論進行分析，似乎更有利于對腫瘤預后的估計。另外，在本次樣本中，因錯配修復蛋白缺陷的患者數(shù)量并不如想象中的那么多，這也與其他研究者的數(shù)據(jù)相似[11]，這也導致了，盡管在不同分組間的分布呈現(xiàn)明顯的區(qū)別，但是并不具備統(tǒng)計學意義。同時，我們發(fā)現(xiàn)在一些病例中，在正常組織中和腫瘤組織中，錯配修復蛋白表達的水平呈現(xiàn)出不一致的狀況。這可能是由于錯配修復基因甲基化的狀態(tài)不一造成[12]；也可能是RNA表達水平不足導致。因此，MMR的表達變化，可能也屬于腫瘤改變的中間環(huán)節(jié)，因為錯配修復蛋白的功能影響是廣譜的，在涉及腫瘤增生的各個環(huán)節(jié)中的相關基因可能都會在在影響之列，也就導致了更多的染色體不穩(wěn)定和突變的積累。