E—cadherin和Claudin—7在宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系

古麗那爾·阿布拉江　桑偉　王雯

[摘要] 目的 探討E-鈣黏蛋白（E-cadherin）和Claudin-7在宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系。 方法 以2016年8月～2017年8月新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院采集的正常宮頸上皮組織（對(duì)照組，n=30）、重度宮頸上皮內(nèi)瘤變組織（HSIL組，n=28）和宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織（CA組，n=80）為研究樣本，采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)三組E-cadherin、Claudin-7蛋白表達(dá)情況，分析兩者與宮頸鱗狀細(xì)胞癌病理特征的關(guān)系，同時(shí)對(duì)兩者的表達(dá)水平進(jìn)行相關(guān)性分析。 結(jié)果HSIL組、CA組E-cadherin蛋白陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于對(duì)照組，且HSIL組明顯高于CA組（P < 0.05）；HSIL組、CA組Claudin-7蛋白陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于對(duì)照組，HSIL組明顯低CA組（P < 0.05）；E-cadherin蛋白陽(yáng)性表達(dá)率與宮頸鱗狀細(xì)胞癌腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)（P < 0.05），與組織分化程度呈正相關(guān)（P < 0.05），Claudin-7蛋白陽(yáng)性表達(dá)率與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)（P < 0.05），與組織分化程度、臨床分期呈負(fù)相關(guān)（P < 0.05）；Claudin-7蛋白與E-cadherin蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（P < 0.05）。 結(jié)論 宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中E-cadherin和Claudin-7蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別明顯降低和升高，兩者陽(yáng)性表達(dá)率與宮頸鱗狀細(xì)胞癌臨床病理特征緊密相關(guān)。

[關(guān)鍵詞] 宮頸鱗狀細(xì)胞癌；E-鈣黏蛋白；Claudin-7；病理特征；相關(guān)性

[中圖分類號(hào)] R737.33 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2018）04（b）-0095-04

[Abstract] Objective To investigate the expression of E-cadherin and Claudin-7 in cervical squamous cell carcinoma and its relationship with clinicopathological features. Methods The normal cervical epithelial tissues （control group， n=30）， high squamous intraepithelial neoplasias （HSIL group， n=28） and cervical squamous cell carcinomas （CA group， n=80） in the First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University from August 2016 to August 2017 were selected as the research samples. The expression of E-cadherin and Claudin-7 protein in the three groups was detected by the immunohistochemical method. The relationship between them and pathological characteristics of cervical squamous cell carcinoma was analyzed， and the correlation between the expression levels of the two was also analyzed. Results The positive expression rate of E-cadherin protein was significantly higher in the control group than in HSIL group and CA group， and significantly higher in HSIL group than in CA group （P < 0.05）. The positive rate of Claudin-7 protein was significantly lower in the control group than in HSIL group and CA group， and significantly lower in HSIL group than in CA group （P < 0.05）. The positive expression rate of E-cadherin protein was negatively correlated with the size and lymph node metastasis of cervical squamous cell carcinoma （P < 0.05）， and positively correlated with the differentiation degree （P < 0.05）. The positive expression rate of Claudin-7 protein was significantly positively correlated with lymph node metastasis （P < 0.05）， and negatively correlated with the differentiation degree and clinical stage （P < 0.05）. The expression of Claudin-7 protein was negatively correlated with the expression of E-cadherin protein （P < 0.05）. Conclusion The positive expression rates of E-cadherin and Claudin-7 protein in cervical squamous cell carcinoma are significantly decreased and increased， respectively. The positive expression rate of them is closely related to the clinicopathological features of cervical squamous cell carcinoma.

[Key words] Cervical squamous cell carcinoma； E-cadherin； Claudin-7； Pathological features； Correlation

宮頸癌為全球范圍內(nèi)女性中常見惡性腫瘤之一，目前對(duì)其病因尚未完全明確，多認(rèn)為與早孕、早產(chǎn)、多育、吸煙等因素有關(guān)[1]。隨醫(yī)學(xué)技術(shù)的不斷更新及普及工作的不斷開展，雖宮頸癌早期篩查和治療日益被重視，但宮頸癌患病率仍居高不下[2]。宮頸癌約有80%為宮頸鱗癌[3]，臨床有必要積極探究靈敏的腫瘤標(biāo)志物對(duì)宮頸鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生、進(jìn)展進(jìn)行有效評(píng)估。早期有學(xué)者研究表明E-鈣黏蛋白（E-cadherin）可有效評(píng)估腫瘤細(xì)胞侵襲及遷移能力[4]，而臨床實(shí)踐表明Claudin-7在癌組織中異常表達(dá)[5]，因而筆者推測(cè)E-cadherin和Claudin-7表達(dá)與宮頸鱗狀細(xì)胞癌臨床病理特征有一定關(guān)系，并與于本文展開臨床對(duì)照性研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料

以2016年8月～2017年8月新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院（以下簡(jiǎn)稱“我院”）病理科采集的正常宮頸上皮組織（對(duì)照組，n=30）、重度宮頸上皮內(nèi)瘤變組織（HSIL組，n=28）和宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織（CA組，n=80）為研究樣本；對(duì)照組30例，均取自在我院因婦科良性疾病手術(shù)治療者，年齡35～58歲，平均（46.15±3.16）歲；HSIL組，組織標(biāo)本取自于我院接受手術(shù)治療的重度宮頸上皮內(nèi)瘤變患者，年齡36～60歲，平均（47.02±3.14）歲；CA組80例患者納入研究前均未接受任何化療及其他方式治療者，年齡37～60歲，平均（48.01±3.51）歲，國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟標(biāo)準(zhǔn)分期：Ⅰ、Ⅱ期各65、15例，組織分化程度：高、中、低分化各8、45、27例?；颊呒{入排除標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)術(shù)后病理組織學(xué)檢查確診；②未合并其他惡性腫瘤；③非妊娠期及哺乳期女性。本研究符合赫爾辛基宣言，患者及其家屬均知情同意并自愿簽署書面知情同意書，同時(shí)本研究征得我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 研究方法

①組織標(biāo)本采集：納入研究的組織標(biāo)本均為手術(shù)切除后，經(jīng)10%中性福爾馬林固定，石蠟包埋，3 μm厚連續(xù)切片標(biāo)本。②主要試劑：濃縮型單抗人Claudin-7單克隆抗體（編號(hào)：CCM-0880，稀釋比例為1︰60）及即用型單抗人E-cadherin單克隆抗體（編號(hào)：CEM-0023）均由賽諾特生物技術(shù)股份公司提供。Dako REALTM EnVisionTM Detection System，Peroxidase/DAB+，Rabbit/Mouse檢測(cè)試劑盒由DAKO公司提供。③檢測(cè)方法：采用免疫組織化學(xué)EnVision二步法檢測(cè)，陰性對(duì)照采用PBS取代一抗，陽(yáng)性對(duì)照則選用已知陽(yáng)性片。組織切片經(jīng)二甲苯、梯度乙醇脫蠟至水后，采用檸檬酸鹽緩沖液進(jìn)行抗原修復(fù)，滴加一抗，4℃孵育過(guò)夜后PBS洗滌，滴加通用型二抗，37℃孵育30 min，DAB顯色約5～10 min，蘇木素復(fù)染，鹽酸酒精分化，藍(lán)化，最后進(jìn)行脫水、透明，中性樹膠封片及鏡檢。③結(jié)果判斷，E-cadherin陽(yáng)性：定位于細(xì)胞膜和胞質(zhì)，并呈棕黃色；Claudin-7陽(yáng)性：定位于細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)之中，呈現(xiàn)棕黃色細(xì)小顆，免疫組化染色結(jié)果由我科兩名資深病理診斷醫(yī)師（在不知病例資料前提下）盲法閱片判斷，每張切片結(jié)果均在高倍鏡（×400）下至少觀察到5個(gè)不重復(fù)視野下判斷；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≤10%記1分，>10%～50%記2分，>50%～75%記3分，>75%記4分；染色強(qiáng)度評(píng)分：無(wú)色記0分，淡色記1分，棕黃色記2分，棕褐記3分；按照乘積原則，0～2分記為“-”，3～4分記為“+”，6～8分記為“++”，9～12分記為“+++”。結(jié)果判定：分?jǐn)?shù)≥3分為陽(yáng)性，<3分為陰性。

1.3 觀察指標(biāo)

①三組E-cadherin、Claudin-7蛋白表達(dá)情況；②E-cadherin、Claudin-7蛋白表達(dá)與宮頸鱗狀細(xì)胞癌臨床病理特征的關(guān)系；③宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中E-cadherin、Claudin-7蛋白表達(dá)的相關(guān)性分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，從正態(tài)分布各變量間相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組E-cadherin、Claudin-7蛋白表達(dá)情況

HSIL組、CA組E-cadherin蛋白陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于對(duì)照組，HSIL組明顯高于CA組（χ2=5.718、30.714、11.703，均P < 0.05）；HSIL組、CA組Claudin-7蛋白陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于對(duì)照組，且HSIL組明顯低于CA組（χ2=6.116、41.423、16.512，均P < 0.05）。見表1、圖1～2（封四）。

2.2 E-cadherin、Claudin-7蛋白表達(dá)與宮頸鱗狀細(xì)胞癌臨床病理特征的關(guān)系

腫瘤大小<4 cm、組織分化為高中分化、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中E-cadherin陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于腫瘤大小≥4 cm、組織分化為低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者（P < 0.05）；臨床分期為Ⅰ期、組織分化程度為低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中Claudin-7陽(yáng)性表達(dá)率明顯高Ⅱ期、高中分化、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者（P < 0.05）；E-cadherin陽(yáng)性表達(dá)率與宮頸鱗狀細(xì)胞癌腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)（r=-0.421、 -0.428，P < 0.05），與組織分化程度呈正相關(guān)（r=0.405， P < 0.05），Claudin-7蛋白陽(yáng)性表達(dá)率與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)（r=0.435，P < 0.05），與組織分化程度、臨床分期呈負(fù)相關(guān)（r=-0.413、-0.398，P < 0.05）。

3 討論

流行病學(xué)數(shù)據(jù)提示全球每年約有50萬(wàn)例新發(fā)宮頸癌患者，且其患病人群日趨年輕化[6]，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)表明從正常宮頸細(xì)胞發(fā)展為癌細(xì)胞常需經(jīng)歷相當(dāng)長(zhǎng)的癌前病變期，而早期宮頸癌患者及時(shí)診治后的存活率高達(dá)90%[7]。隨人們對(duì)宮頸癌認(rèn)知不斷深入，普遍認(rèn)為宮頸癌屬于一種多基因疾病，高危型人乳頭瘤病毒（HPV）持續(xù)感染被認(rèn)為是宮頸癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵，HPV感染正常上皮細(xì)胞中，上皮細(xì)胞表型逐漸消失，一些間質(zhì)細(xì)胞表型發(fā)生EMT現(xiàn)象，E-cadherin是其中重要一員，早期臨床研究證實(shí)其在腫瘤形成、侵襲及轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用[8]；臨床病理學(xué)研究表明癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移，需先從原癌灶中脫離出來(lái)，改變細(xì)胞間黏附結(jié)構(gòu)功能使惡性腫瘤細(xì)胞脫離原發(fā)組織，Claudin-7有潛在限制癌細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)及生長(zhǎng)因子供應(yīng)，癌細(xì)胞失去緊密連接蛋白在膜上的定位是腫瘤發(fā)展的關(guān)鍵[9-10]。

陳小燕等[11]研究表明宮頸鱗癌組織中E-cadherin蛋白陽(yáng)性表達(dá)率與宮頸鱗癌惡性臨床病理特征有明顯相關(guān)性；李燕[12]研究則提示Claudin-1、3、4、7與浸潤(rùn)型鱗狀細(xì)胞癌臨床病理特征有明顯相關(guān)性。而本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)：對(duì)照組E-cadherin蛋白陽(yáng)性表達(dá)率較HSIL組、CA組顯著高，對(duì)照組Claudin-7蛋白陽(yáng)性表達(dá)率較HSIL組、CA組明顯低，E-cadherin陽(yáng)性表達(dá)率與宮頸鱗狀細(xì)胞癌腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈明顯負(fù)相關(guān)，與組織分化程度呈明顯正相關(guān)，Claudin-7陽(yáng)性表達(dá)率與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，與組織分化程度、臨床分期呈負(fù)相關(guān)，Claudin-7與E-cadherin表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，提示E-cadherin、Claudin-7表達(dá)與宮頸鱗狀細(xì)胞癌臨床病理特征密切相關(guān)[13，9]。E-cadherin屬于一種典型鈣依賴型細(xì)胞表面跨膜糖蛋白，由人類染色體16q 22上相關(guān)基因編碼，主要負(fù)責(zé)上皮細(xì)胞和細(xì)胞間黏附功能，在組織形態(tài)形成及胚胎發(fā)育和細(xì)胞轉(zhuǎn)歸中發(fā)揮重要作用[14]，已有研究提示E-cadherin為抑癌基因，其通過(guò)加強(qiáng)細(xì)胞間黏附及抑制細(xì)胞增殖兩方面發(fā)揮抑癌及抑癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移作用，因而與宮頸鱗狀細(xì)胞癌疾病病理過(guò)程密切相關(guān)[15]。Claudin-7屬于一種跨膜蛋白，主要表達(dá)于上皮細(xì)胞相鄰面的胞膜上，存在組織特異性，在宮頸鱗狀細(xì)胞疾病進(jìn)展惡化中發(fā)揮作用可能與其參與細(xì)胞分化和其他因子調(diào)控有一定關(guān)系[16]，Claudin-7在宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率明顯升高，其陽(yáng)性表達(dá)率升高導(dǎo)致細(xì)胞間信號(hào)傳導(dǎo)異常，從而促進(jìn)腫瘤的增殖及遷移[17]，因而推測(cè)Claudin-7蛋白陽(yáng)性表達(dá)率與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織分化程度、臨床分期有明顯相關(guān)性[18]。本研究還發(fā)現(xiàn)宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中Claudin-7蛋白與E-cadherin蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，提示Claudin-7功能異常會(huì)導(dǎo)致E-cadherin蛋白表達(dá)減少，從而增加宮頸鱗狀細(xì)胞癌侵襲性，加劇腫瘤進(jìn)展，這與既往國(guó)外學(xué)者研究的觀點(diǎn)相似[19]。

綜上所述，宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中E-cadherin、Claudin-7蛋白陽(yáng)性表達(dá)率可較好預(yù)測(cè)宮頸鱗狀細(xì)胞癌早期分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤大小等情況，兩者有望成為宮頸鱗狀細(xì)胞癌早期診斷的靈敏指標(biāo)。

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（收稿日期：2018-01-24 本文編輯：任 念）