風(fēng)箱果的組織培養(yǎng)與離體快繁技術(shù)

●楊曉光 張 桓（吉林市林業(yè)科學(xué)研究院 吉林 吉林 132013）

風(fēng)箱果（Physocarpus amurensis）別名托盤幌，原產(chǎn)于黑龍江及俄羅斯遠(yuǎn)東地區(qū)，屬薔薇科灌木，其花色秀美，為優(yōu)良的綠化樹(shù)種。為保護(hù)和開(kāi)發(fā)利用風(fēng)箱果種質(zhì)資源，并保持優(yōu)良個(gè)體遺傳性狀，筆者對(duì)其進(jìn)行組織培養(yǎng)和離體快繁技術(shù)研究，為探索其發(fā)育規(guī)律性與開(kāi)發(fā)利用起到促進(jìn)作用。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料采集與預(yù)處理

2015年12月于吉林市北華大學(xué)校內(nèi)采集多年生健壯風(fēng)箱果樹(shù)的休眠枝條用于試驗(yàn)。材料取回后，用水洗凈，將枝條剪成70cm左右的長(zhǎng)度，放入塑料桶內(nèi)水培。

1.2 外植體的滅菌

枝條萌發(fā)后，選取飽滿的腋芽，放入小燒杯中，蓋上紗布，用自來(lái)水反復(fù)沖洗至干凈為止。在超凈工作臺(tái)上先用0.1%的升汞溶液中浸泡10分鐘，取出后用無(wú)菌水反復(fù)沖洗6～8次。

1.3 培養(yǎng)基與培養(yǎng)條件

以最常用的MS或WPM為基本培養(yǎng)基，附加外源激素BA（0.1～0.5mg/L）與NAA（0.1～0.5mg/L）。培養(yǎng)溫度25±5℃、濕度60%～70%、光照強(qiáng)度2000～2500lx。

1.4 誘導(dǎo)培養(yǎng)

將滅菌處理過(guò)的腋芽接種到設(shè)計(jì)好的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，及時(shí)觀察。

1.5 增殖與繼代培養(yǎng)

將誘導(dǎo)產(chǎn)生的愈傷組織轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基上繼代培養(yǎng)，此時(shí)應(yīng)特別注意叢生芽產(chǎn)生時(shí)間的長(zhǎng)短與數(shù)量。

1.6 生根培養(yǎng)

當(dāng)分化苗長(zhǎng)到 4～5cm高時(shí)轉(zhuǎn)入到不同配比的生長(zhǎng)培養(yǎng)基內(nèi)誘導(dǎo)生根，每瓶置8～10株，注意觀察生根情況。

2 結(jié)果與分析

2.1 初代培養(yǎng)誘導(dǎo)愈傷組織情況

由于實(shí)驗(yàn)操作方法的不完善，起初的污染率達(dá)50%以上，改善后污染基本能控制在10%左右。培養(yǎng)至第8天開(kāi)始看到冬芽形態(tài)上有明顯的變化，發(fā)生變形。2周后出現(xiàn)顆粒狀的結(jié)構(gòu)。20天后，愈傷組織已明顯可見(jiàn)，可轉(zhuǎn)為繼代增殖培養(yǎng)。據(jù)統(tǒng)計(jì)，在WPM+BA0.4mg/L+NAA0.1mg/L培養(yǎng)基上產(chǎn)生愈傷組織數(shù)最多，誘導(dǎo)率高達(dá)85%，平均誘導(dǎo)率達(dá)55.8%，具體情況見(jiàn)表1。

2.2 繼代增殖培養(yǎng)情況

將生長(zhǎng)健壯的愈傷組織進(jìn)行分割，每種處理接種20塊，培養(yǎng)20天后調(diào)查不定芽的分化情況，見(jiàn)表2。

表1 不同培養(yǎng)基對(duì)外植體誘導(dǎo)率情況

表2 不同激素配比對(duì)風(fēng)箱果愈傷組織誘導(dǎo)不定芽的影響

在后3種培養(yǎng)基中，愈傷組織都有較高的增殖率，但在BA為0.5mg/L培養(yǎng)基中，生長(zhǎng)較弱；而在BA為0.3mg/L的培養(yǎng)基中，長(zhǎng)勢(shì)較強(qiáng)，所以愈傷組織的增殖選擇BA為0.3mg/L的兩種培養(yǎng)基，兩者的差異不顯著。

2.3 分化苗誘導(dǎo)生根培養(yǎng)情況

當(dāng)分化苗長(zhǎng)到4～5cm、具有5～7片葉時(shí)，轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基內(nèi)誘導(dǎo)生根，每瓶置8～10株小苗，20天后小苗基部可分化出4cm左右的根。通過(guò)添加兩種濃度的NAA和IAA生長(zhǎng)素的生根比較試驗(yàn)，結(jié)果以添加NAA0.2mg/L的生根效果為最佳，見(jiàn)表3。

表3 兩種生長(zhǎng)素和濃度對(duì)分化苗誘導(dǎo)生根的結(jié)果

3 煉苗與移栽

將已生根的試管苗置于溫室中，待條件適應(yīng)后，逐漸揭去瓶蓋，煉苗3～5天，然后將苗取出用清水

4 小結(jié)與討論

通過(guò)試驗(yàn)研究，掌握了風(fēng)箱果的冬芽誘導(dǎo)愈傷組織、愈傷組織增殖及分化、分化苗生根等不同階段的生長(zhǎng)特性，探索出各階段較為理想的培養(yǎng)基配方。

4.1 在不同激素配比對(duì)風(fēng)箱果外殖體誘導(dǎo)影響的試驗(yàn)中，以WPM+BA0.4mg/L+NAA0.1mg/L的培養(yǎng)基對(duì)外殖體誘導(dǎo)率最高，達(dá)85%。洗去根部培養(yǎng)基，洗凈后移栽到已用0.1%的高錳酸鉀溶液消毒后的珍珠巖基質(zhì)中，并適時(shí)澆營(yíng)養(yǎng)液，澆水要少量多次。

4.2 在相同的基本培養(yǎng)基條件下，風(fēng)箱果芽增殖的最佳培養(yǎng)基為WPM+BA0.3mg/L+NAA0.1mg/L，增殖率高達(dá)712%。

4.3 試驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，WPM+BA 0.3mg/L+NAA 0.2mg/L培養(yǎng)基為風(fēng)箱果適宜的生根培養(yǎng)基，平均生根數(shù)達(dá)6.8個(gè)，且根系生長(zhǎng)健壯。