miRNA141通過抑制MAP2K4促進大腸癌增殖的研究

肖緒華

【摘要】 目的：探究miRNA141通過抑制MAP2K4對促進大腸癌增殖的效果。方法：本文共選取2016年2月至2018年2月在本院放射科做MRI檢查被診斷為大腸癌的患者24例，提取總RNA，RNA濃度測量使用紫外分光光度法，取5μL RNA樣品，運用RNase對離子水進行稀釋，在對OD值進行測量時需使用紫外分光光度計進行測量。RTPCR擴增，cDNA模版的合成主要是應(yīng)用PCR逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)來實現(xiàn)，RTPCR擴增主要是應(yīng)用ALLinOne試劑盒，具體的步驟及方法應(yīng)嚴格按照試劑盒上的說明書開展。結(jié)果：大腸癌及腸黏膜的提取方法主要是應(yīng)用Trizol方法。在對miR141的相對表達量進行檢測時，主要是采用熒光實時定量PCR法。在對細胞轉(zhuǎn)染W(wǎng)T FL質(zhì)粒進行檢驗時，主要是使用熒光儀來檢測熒光酶的活性，會發(fā)現(xiàn)FL活性下降，突變質(zhì)粒的FL活性未發(fā)生明顯的變化。結(jié)論：在大腸癌診斷中MRI發(fā)揮了重要作用，miR141的表達水平會隨著大腸癌TNM分期而增高，miR141表達上調(diào)，說明大腸癌與miR141之間的發(fā)展有直接關(guān)系，有助于抑制癌細胞的快速生長。

【關(guān)鍵詞】 miRNA141；MAP2K4；大腸癌增殖；大腸癌癌細胞

miRNA141 promotes the proliferation of colorectal cancer by inhibiting MAP2K4

Xiao Xuhua

Affiliated Hospital of Guilin Medical University， Guilin， Guangxi 541000

[Abstract] Objective：To explore the effect of miRNA141 on promoting the proliferation of colorectal cancer by inhibiting MAP2K4. Methods： this article selected from February 2016 to February 2016 in our hospital radiology department do MRI examination， a total of 24 patients with colorectal cancer was diagnosed， extracting total RNA， RNA concentration measurement using uv spectrophotometry， take samples of 5 mu lRNA applying RNase to dilution of ionized water， as measured in the OD value measurement should be carried out using ultraviolet spectrophotometer.Rtpcr amplification， cDNA template synthesis is mainly used PCR rtpcr reaction，RTPCR amplification is mainly applied ALLinOne kit， specific experimental steps and methods should strictly follow the instructions in the kit to carry out the experiment. Results： the extraction method of colorectal cancer and intestinal mucosa mainly used Trizol method. In the detection of the relative expression of miR141， fluorescence realtime quantitative PCR method was adopted. When the cells were transfected with WT FL plasmid， the activity of fluorescein was detected by fluorescence apparatus， and FL activity decreased and the FL activity of mutant plasmid did not change significantly. Conclusion： MRI plays an important role in colorectal cancer diagnosis， the expression of miR141 levels will be increased with colorectal cancer TNM staging， miR141 expression， indicates that the development of colorectal cancer between miR141 and has a direct relationship， helping to suppress cancer cell growth.

[Key words]miRNA141； MAP2K4； Colorectal cancer proliferation； Colorectal cancer cells

大腸癌是一種最常見的癌癥病癥，是引發(fā)患者死亡的主要原因，目前主要采用手術(shù)切除治療方法，但是在過去的十幾年中，患者的生存率并未發(fā)生明顯的變化。近年來，醫(yī)學(xué)專家學(xué)者發(fā)現(xiàn)了生物標(biāo)志物，針對大腸癌患者的疾病情況，制定出了個性化的治療策略，促進了患者生存質(zhì)量的大大提升。miRNA在抑制蛋白質(zhì)及調(diào)整人類基因上作用顯著，異常miRNA表達式對人類癌癥的侵襲均造成了較大的影響。通過miRNA，有助于促進活化癌基因細胞的快速轉(zhuǎn)化，對抑制腫瘤發(fā)展及增殖作用顯著。本文作者將2016年2月至2018年2月在本院放射科做MRI檢查被診斷為大腸癌的24例患者作為研究對象，探究miRNA141通過抑制MAP2K4對促進大腸癌增殖的效果，現(xiàn)報道如下。

1資料及方法

1.1一般資料

本文共選取于2016年2月至2018年2月在本院放射科做MRI檢查被診斷為大腸癌的患者24例，男性患者為122例，女性患者為12例，年齡為42～76歲，平均年齡為（62.3±2.4）歲。

1.2方法

提取總RNA，RNA濃度測量使用紫外分光光度法，取5μL RNA樣品，運用RNase對離子水進行稀釋，在對OD值進行測量時需使用紫外分光光度計進行測量。RTPCR擴增，cDNA模版的合成主要是應(yīng)用PCR逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)來實現(xiàn)，RTPCR擴增主要是應(yīng)用ALLinOne試劑盒，具體的步驟及方法應(yīng)嚴格按照試劑盒上的說明書開展[12]。

1.3統(tǒng)計學(xué)處理

研究得出數(shù)據(jù)通過SPSS 18.0軟件統(tǒng)計處理，計量資料采用（±s）表示，以t檢驗，P<0.05說明差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1大腸癌與miR141的miRNA表達水平

大腸癌及腸黏膜的提取方法主要是應(yīng)用Trizol方法，在對RNA的純度及濃度進行鑒定時，主要是使用瓊脂糖凝膠及紫外分光光度法進行鑒定及測量。在對miR141的相對表達量進行檢測時，主要是采用熒光實時定量PCR法。研究結(jié)果見圖1，可見大腸癌組織中的miR14呈升高發(fā)展趨勢，相對于癌旁的正常組織有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。

主要是利用miR141 anatagomirs、Lipofectamin 2000轉(zhuǎn)染miR 141模擬物對miR141與大腸癌癌細胞之間的生長關(guān)系進行研究，研究結(jié)果顯示，miR141模擬物轉(zhuǎn)染的提高水平是miR141表達水平的3～4倍。與此相反，miR141 anatagomirs是導(dǎo)致miR141濃度減少的主要原因。從圖2中可以看出，miR414模擬物轉(zhuǎn)染miR141表達水平明顯提高，anatagomirs是引發(fā)miR141表達水平下降的主要原因。

2.3miR141對MAP2K4表達的影響

在對miR141的下游靶基因進行預(yù)測時，主要是應(yīng)用MiRanda法做進一步的研究。在對細胞轉(zhuǎn)染W(wǎng)T FL質(zhì)粒進行檢驗時，主要是使用熒光儀來檢測熒光酶的活性，會發(fā)現(xiàn)FL活性下降，突變質(zhì)粒的FL活性未發(fā)生明顯的變化。說明在調(diào)控MAP2K4中，miR141發(fā)揮了抑制性作用，說明miR141大腸癌自爆中的靶目標(biāo)很有可能是MAP2K4。與相應(yīng)的對照相比，突變型及轉(zhuǎn)染野生型質(zhì)粒的大腸癌細胞熒光素酶活性有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。見圖3。圖2miR41表達水平

3討論

大腸癌是我國癌癥疾病中的常見類型，是引發(fā)患者死亡的主要原因。microRNA作為一項潛在的新型腫瘤標(biāo)志物，受到了廣大醫(yī)學(xué)專家學(xué)者的高度關(guān)注[34]，加大對大腸癌進行早期診斷及治療具有必要性，有助于提升患者預(yù)后質(zhì)量。miRNA作為新一類的癌癥基因調(diào)節(jié)因子，在大腸癌治療中發(fā)揮了重要作用[56]。在過去的很多年中，醫(yī)學(xué)專家學(xué)者對miRNA進行了大量的研究和分析，研究結(jié)果表明其為癌癥基因的調(diào)節(jié)因子，miR141在促進癌癥發(fā)展及抑制基因MAK2K4中作用顯著，被廣泛應(yīng)用于結(jié)腸腫瘤治療中。miRNA自身具有較強的穩(wěn)定性，在抑制腫瘤及癌基因上效果顯著，實現(xiàn)了對細胞凋亡及增殖過程的調(diào)節(jié)。miR141作為一種進化上保留，使miRNA基因遠端長期處于異常的甲基化過程中，會降低DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的表達水平，提升miR141表達水平。

本研究結(jié)果顯示，miR141能夠有效抑制腫瘤及基因MAK2K4，在腫瘤治療中發(fā)揮了重要作用。需要將miR141作為一類藥物靶標(biāo)，為大腸癌的診斷及治療提供可靠依據(jù)。miRNA在腫瘤抑制基因及癌基因中作用顯著，通過對細胞的凋亡及增殖進行調(diào)節(jié)，促進了腫瘤細胞的快速凋亡及分化[78]。miR141保留在不穩(wěn)定的miRNA家族中，在大腸癌中的分子機制是導(dǎo)致DNA甲基轉(zhuǎn)移酶基因表達水平下降的主要原因，因此需要加大對miR141的表觀遺傳學(xué)機制進行調(diào)節(jié)[910]。

綜上所述，在大腸癌診斷中MRI發(fā)揮了重要作用，miR141的表達水平會隨著大腸癌TNM分期而增高，miR141表達上調(diào)，說明大腸癌與miR141之間的發(fā)展有直接關(guān)系，有助于抑制癌細胞的快速生長。

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