含氟牙膏再礦化根面齲的體外研究

崔 霞，陶永福，陳泓帆，毛金慧，藍(lán) 海

（大理大學(xué)藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院，云南大理 671000）

含氟牙膏能有效預(yù)防牙釉質(zhì)齲，但其對(duì)牙根齲的效果尚不明確。近年來，人們對(duì)牙本質(zhì)礦化過程中牙本質(zhì)非膠原蛋白的作用做了大量研究，發(fā)現(xiàn)其中的牙本質(zhì)磷蛋白在牙本質(zhì)的礦化及再礦化過程中起到非常重要的作用，它參與誘導(dǎo)牙本質(zhì)的生物礦化過程，但在脫礦牙本質(zhì)中可溶性牙本質(zhì)磷蛋白卻抑制牙本質(zhì)的再礦化，而含氟溶液可以去除脫礦牙本質(zhì)中的可溶性磷蛋白〔1〕。對(duì)于牙釉質(zhì)的再礦化，微量的氟離子就可以去除可溶性磷蛋白，從而對(duì)牙釉質(zhì)起到非常明顯的再礦化作用〔2〕，對(duì)于牙本質(zhì)的再礦化，氟離子也具有同樣的促進(jìn)作用，若要達(dá)到與釉質(zhì)同樣的再礦化效果，則所需氟離子濃度更高〔3〕。研究資料指出，氟離子能促進(jìn)牙齒中的羥基磷灰石晶體的形成和成長(zhǎng)，提高羥基磷灰石的熱力學(xué)穩(wěn)定性，從而具有促進(jìn)礦化和再礦化的作用〔4〕。本實(shí)驗(yàn)用體外pH循環(huán)模型再礦化根齲，用偏光顯微鏡對(duì)牙根進(jìn)行病損區(qū)域的形態(tài)學(xué)觀察，比較黑人、納愛斯、高露潔含氟牙膏及含NaF分別為10、20、40 mg∕L的不含氟牙膏促進(jìn)根面齲再礦化的效果。

1 材料與方法

1.1 主要試劑和儀器設(shè)備

1.1.1 試劑 甲基丙烯酸甲酯、醋酸、氯化鈣、磷酸二氫鉀、乳酸、HEPES（4-羥乙基哌嗪乙磺酸）、氟化鈉、鄰苯二甲酸二丁酯、過氧化苯甲酰，以上試劑均為分析純。

1.1.2 設(shè)備 SB-25-12DT超聲清洗機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司）；RE-5203旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海榮亞生化儀器廠）；SIEMENS冰箱（安徽博西華家用電器有限公司）；YMP-2B金相試樣磨拋機(jī)（蘇州歐卡精密光學(xué)儀器有限公司）；pHS-25C數(shù)字酸度計(jì)（上海鵬順科學(xué)儀器有限公司）；E-201-C型pH復(fù)合電極（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；AL204-IC電子天平［梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司］；SHZ-D（Ⅲ）循環(huán)水式真空泵（鞏義市予華儀器有限公司）；DHP-9162型電熱恒溫培養(yǎng)箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）；BQ-1600硬組織切片機(jī)（西安藍(lán)茗醫(yī)療科技有限公司）；BK-POLR-透反射偏光顯微鏡（重慶奧特光學(xué)儀器有限公司）；78HW-1型磁力攪拌器（江蘇金壇市良友儀器有限公司）；AKSW-V-16艾柯超純水機(jī)（成都唐氏康寧科技發(fā)展有限公司）。

1.2 牙根組織塊制備 購買新鮮、無齲、根面完好的牛牙齒。刮除根面軟組織，清洗干凈，硬組織切片機(jī)分離冠根。取靠近牙冠的根部，制備成54顆大小規(guī)則的牙根組織塊，大小約5 mm×5 mm，置超聲清洗儀中清洗30 min，置于去離子水中，-4℃冰箱中保存，備用〔5〕。

1.3 實(shí)驗(yàn)溶液的配制 實(shí)驗(yàn)分為8組：黑人含氟牙膏組、納愛斯含氟牙膏組、高露潔含氟牙膏組及含NaF分別為10、20、40 mg∕L的冷酸靈牙膏（不含氟）組和兩個(gè)空白對(duì)照組（分別按照冷酸靈牙膏與去離子水的質(zhì)量比為1：3和1：2混合均勻）〔5-6〕。

1.4 包埋劑的配制 取甲基丙烯酸甲酯95 mL、鄰苯二甲酸二丁酯5 mL、過氧化苯甲酰4.0 g于茄型瓶中，置于50℃水浴恒溫加熱，磁力攪拌2 h，冷卻至室溫，置于-4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5 浸泡液配制 浸泡液Ⅰ、浸泡液Ⅱ、浸泡液Ⅲ組成除甲基丙烯酸甲酯95 mL、鄰苯二甲酸二丁酯5 mL外，浸泡液Ⅱ加過氧化苯甲酰1.5 g，浸泡液Ⅲ加過氧化苯甲酰4.5 g。

1.6 開窗和根齲形成 抗酸指甲油封閉牙根組織塊，開窗區(qū)（3 mm×3 mm）以外的區(qū)域除外〔5〕。開窗后，放入脫礦液〔7〕（0.05 mol∕L 醋酸、2.2 mmol∕L 氯化鈣、2.2 mmol∕L磷酸二氫鉀，pH 4.6）中，置37 ℃培養(yǎng)箱中96 h〔8〕，脫礦后流水沖洗。

1.7 再礦化實(shí)驗(yàn) 將脫礦后的54個(gè)牙根組織塊隨機(jī)分為8組：黑人、納愛斯、高露潔含氟牙膏組，含NaF分別為10、20、40 mg∕L的冷酸靈牙膏組及不含氟牙膏組，每組6個(gè)樣本，進(jìn)行如下pH循環(huán)：實(shí)驗(yàn)溶液（配制方法同“1.3”）處理 5 min，酸性緩沖液（50 mmol∕L乳酸、0.25 mmol∕L氯化鈣、1.5 mmol∕L磷酸二氫鉀，pH 4.6）處理30 min，中性緩沖液（20 mmol∕L HEPES、2.25 mmol∕L氯化鈣、1.5 mmol∕L磷酸二氫鉀，pH 7.0）處理10 min。每天重復(fù)循環(huán)6次，循環(huán)8 d。樣本置中性緩沖液中過夜，再礦化后流水沖洗樣本。實(shí)驗(yàn)流程見圖 1〔5〕。

圖1 體外根齲形成和pH再礦化循環(huán)

1.8 熱聚合包埋

1.8.1 浸透 將再礦化后的樣本進(jìn)行浸透〔9〕，其浸透過程如圖2。

圖2 浸透流程

1.8.2 包埋 將樣本置于安瓿瓶中，加入包埋劑，在膠蓋上插上針頭以便排氣，抽真空2 h后置于水浴恒溫箱中37℃處理2～3 d，將包埋組織塊切片〔10〕。

1.9 偏光顯微鏡觀察 每個(gè)樣本切成350 μm厚的薄片，偏光顯微鏡下觀察拋光后脫礦區(qū)病損，照相。

2 結(jié)果

偏光顯微鏡觀察可見，脫礦后的樣本和空白對(duì)照組再礦化后的樣本有大量的脫礦物沉積帶形成，齲損表面明顯增厚，密度增加，見圖3A～C白色箭頭所示。各實(shí)驗(yàn)組樣本出現(xiàn)表層下再礦化帶，脫礦物沉積帶的厚度變淺，密度變小，病損部位出現(xiàn)負(fù)性雙折射的再礦化帶，病損深度變淺〔11〕。含氟牙膏組再礦化效果排列：黑人＞納愛斯＞高露潔；加NaF的不含氟牙膏組再礦化效果排列：40 mg∕L＞20 mg∕L＞10 mg∕L。見圖3。

3 討論

研究證明，人工早期齲模型能夠模擬人口腔中齲齒的發(fā)展過程，并且具有重復(fù)性和均一性。本實(shí)驗(yàn)采用了Ten Cate提出的人工早期齲模型進(jìn)行研究，將根面齲暴露于酸引起脫礦和實(shí)驗(yàn)溶液引起再礦化的交替循環(huán)。該方法是目前研究防齲措施最常見、應(yīng)用范圍最廣的方法〔12〕。

圖3 偏光顯微鏡圖

偏光顯微鏡下觀察到含氟牙膏組和NaF組與脫礦組對(duì)比病損深度明顯變淺，齲損表層明顯增厚，密度增加，這些現(xiàn)象表明這兩組的樣本均發(fā)生了再礦化，上述對(duì)比證明含氟溶液能對(duì)脫礦的牙本質(zhì)再礦化。但從總體效果來看，陽性對(duì)照組（NaF組）的礦物沉積帶與含氟牙膏組相比較淺，說明升高氟離子濃度能增強(qiáng)再礦化效果。本實(shí)驗(yàn)采用無齲、根面完好且形態(tài)大小近似的牛牙齒，減小了由不同樣本造成的不均一性。

本次實(shí)驗(yàn)用不同種類的含氟牙膏和加入不同濃度NaF的不含氟牙膏對(duì)離體牛切牙進(jìn)行脫礦后的再礦化實(shí)驗(yàn)，經(jīng)偏光顯微鏡觀察表明，含氟牙膏對(duì)離體牛切牙根面齲有明顯的再礦化作用，其中黑人牙膏的再礦化效果最好，原因可能是不同牙膏的含氟量有差異或者其他添加成分和氟有協(xié)同作用。而加入NaF的不含氟牙膏中，隨NaF濃度的增加再礦化效果增大，但同時(shí)也會(huì)產(chǎn)生氟斑牙、氟骨癥等，所以牙膏中添加氟不是越多越好，一般不要超過 20 mg∕L〔13〕。

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