我國部分地區(qū)豬流行性腹瀉、傳染性胃腸炎及豬輪狀病毒感染的流行現(xiàn)狀及防控措施

王艷豐，張丁華，李愛心，程 征，劉守鉉

(1.河南農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院 牧業(yè)工程學(xué)院，河南中牟 451450；2.河南農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院 疫病快速診斷中心，河南中牟 451450)

引起豬病毒性腹瀉的病原有豬流行性腹瀉病毒(Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV)、豬傳染性胃腸炎病毒(Transmissinle gastroenteritis virus，TGEV)、豬輪狀病毒(Porcine rotarvirus，PoRV)、豬瘟病毒(Classical swine fever virus，CSFV)、豬偽狂犬病病毒(Pseudorabies virus，PRV)、豬博卡病毒(Porcine Bocavirus，PBoV)、豬嵴病毒(Porcine Kobuvirus，PkoV)等，其中以PEDV、TGEV、PoRV最常見且危害最嚴(yán)重。不同階段的豬對3種病毒均易感，但以仔豬危害最大，病死率最高，即使豬耐過存活，康復(fù)后也會導(dǎo)致生長緩慢，飼料報(bào)酬降低，飼養(yǎng)成本增加，經(jīng)濟(jì)效益下降。特別是近年來PEDV在美洲、亞洲和歐洲造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，2013年-2015年暴發(fā)導(dǎo)致美國養(yǎng)豬業(yè)每年損失9億～18億美元[1]，韓國約40%的豬場受到影響[2]。

1 病原變異

我國中東部部分地區(qū)分離的PEDV毒株與國內(nèi)疫苗毒株CV777、韓國弱毒疫苗株DR13同源性分析，結(jié)果見表1。從表1可以看出，我國不同地區(qū)分離的PEDV毒株與近年來中國毒株、韓國毒株及泰國毒株親緣關(guān)系較近，90%的流行毒株都屬于G2群，但與國內(nèi)疫苗毒株CV777、韓國AttenuatedDR13弱毒株親緣關(guān)系較遠(yuǎn)，疫苗株屬于G1群，表明流行毒株與傳統(tǒng)毒株(2012年之前)的基因相比存在較大變異，這也是疫苗毒株CV777在各地免疫保護(hù)力不佳的主要原因[3-5]。目前國內(nèi)除流行與PEDV疫苗株相同的毒株外，還存在新基因型的PEDV株[4]，且為強(qiáng)毒株[6]。因此，應(yīng)高度關(guān)注當(dāng)前PEDV毒株的遺傳變異情況，從中篩選出新的疫苗候選毒株，盡快研制新的疫苗以控制我國PED疫情[7]。TGEV不同地區(qū)來源的各毒株間S基因差異性不大，S基因變異仍較低且相對比較穩(wěn)定，這有可能是目前TGEV感染率較低的原因[8-9]。孫秋艷等[10]將山東分離株與Bank中公布的13株TGEV毒株的S基因序列進(jìn)行同源性比較，發(fā)現(xiàn)核苷酸同源性在98.2%～77.7%，雖然分離毒株與其他13株TGEV毒株核苷酸同源性差異較大，但氨基酸同源性卻很高(96.0%～99.4%)，說明S基因點(diǎn)突變很多應(yīng)該是無意義突變。A群PoRV基于VP4和VP7的抗原性不同，將其分為血清型P型和G型。目前全球優(yōu)勢流行株為G1占42.9%，G2占11.8%，G3占11.1%，G4占8.2%，G9占14.4%，共計(jì)88.2%，我國的優(yōu)勢流行株與全球流行趨勢一致[11]。楊娟等[12]對分離的PoRV廣東株鑒定發(fā)現(xiàn)，VP7和VP4基因都與典型的A群輪狀病毒OSU株在同一分支上，屬于比較流行的毒株，與輪狀病毒疫苗毒株LLR進(jìn)化距離較遠(yuǎn)，表明其不屬于疫苗毒株。

表1 我國部分地區(qū)分離的PEDV毒株與CV777株、DR13株同源性分析

注：參考毒株①疫苗株CV777；②韓國弱毒疫苗株DR13。

Note：Reference strains of vaccine strain CV777，South Korea attenuated vaccine strain DR13.

2 流行現(xiàn)狀

2015年-2017年我國部分地區(qū)豬場病毒性腹瀉流行病學(xué)調(diào)查情況，結(jié)果見表2。從表2可以看出，各地區(qū)豬場分離的PEDV陽性率最高，其次是PoRV，最后是TGEV，表明自2010年10月以來，全國各地豬群暴發(fā)的腹瀉疫情，PEDV是豬病毒性腹瀉的主要病原[13]，在我國的豬腹瀉病病原中仍占主導(dǎo)地位。此外，也分離出其他相關(guān)病毒，如PKV、PBoV、PRV、PCV-2、CSFV、BVDV等，可能與PEDV具有協(xié)同致病性。PEDV常與TGEV、PoRV、PRV、PCV-2等雙重感染或三重感染，但不同地區(qū)混合感染存在差異，如東北地區(qū)以PEDV/PoRV的雙重感染為主，山東地區(qū)主要為PEDV/PRV混合感染，但TGEV/PoRV混合感染較少。大量調(diào)查發(fā)現(xiàn)，即使同一豬場不同時期感染的病原也可能不同。一年四季均可發(fā)生，以冬春寒冷季節(jié)多發(fā)，6月～9月份發(fā)病較少，表明環(huán)境應(yīng)激是誘發(fā)因素，但杜娟等[14]報(bào)道北京地區(qū)PEDV、TGEV近年來受季節(jié)因素影響不明顯，PoRV在夏季受環(huán)境條件影響更為高發(fā)。哺乳仔豬發(fā)病率和死亡率最高，后備豬、母豬或育肥豬呈一過性腹瀉，發(fā)病率較低。

3 防控策略

3.1 預(yù)防

3.1.1 飼養(yǎng)管理 精心飼養(yǎng)管理，初生仔豬及時吃初乳。保持產(chǎn)房和產(chǎn)床適宜溫度和濕度，適當(dāng)通風(fēng)換氣。產(chǎn)房、產(chǎn)床和保溫箱要經(jīng)常消毒。加強(qiáng)生物安全，如限制場內(nèi)外的車輛、人員、設(shè)備、物料、豬只等的轉(zhuǎn)移，進(jìn)場人員和車輛須嚴(yán)格消毒，新進(jìn)豬只嚴(yán)格隔離觀察，確定健康后方可混群等。

3.1.2 免疫預(yù)防 目前，商品化的疫苗有豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯(lián)滅活疫苗(WH-1株+AJ1102株)，豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉、豬輪狀病毒(G5型)三聯(lián)活疫苗(弱毒華毒株+弱毒CV777株+NX株)，豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯(lián)活疫苗(HB08株+ZJ08株)3種。徐宏軍等[15]分別以PEDV懸浮滅活苗、轉(zhuǎn)瓶滅活苗、流行株組織滅活苗產(chǎn)前30 d免疫經(jīng)產(chǎn)母豬，母豬產(chǎn)后14 d進(jìn)行仔豬攻毒保護(hù)試驗(yàn)，3種疫苗的保護(hù)率分別為80%、20%、10%。代洪波等[16]以分離株制備滅活疫苗免疫母豬，以免疫母豬所產(chǎn)仔豬進(jìn)行攻毒保護(hù)試驗(yàn)，仔豬保護(hù)率為87.5%～100%。王娟萍等[17]對山西省10個規(guī)?；i場母豬疫苗免疫情況調(diào)查顯示，未免疫疫苗的豬群乳豬死亡率為61.70%，而母豬產(chǎn)前40 d、20 d后海穴注射胃流輪三聯(lián)活苗，肌注胃流二聯(lián)滅活苗的豬群乳豬死亡率為10.26%；母豬產(chǎn)前40 d、20 d后海穴注射胃流輪三聯(lián)活苗，3日齡乳豬后海穴注射胃流輪三聯(lián)活苗的豬群乳豬死亡率為9.63%。呂雪峰等通過對斷奶仔豬人工誘發(fā)試驗(yàn)和疫苗保護(hù)效果試驗(yàn)表明，豬腹瀉三聯(lián)活疫苗免疫后的仔豬均能夠抵抗TGEV、PEDV的攻擊，無死亡病例和相關(guān)臨床癥狀出現(xiàn)，且疫苗無明顯的不良反應(yīng)。于俊勇等通過攻毒模型對比免疫反應(yīng)、斷奶前死亡率來評估 PEDV滅活疫苗在陰性和感染過 PEDV母豬群的免疫效果，結(jié)果顯示能顯著提高母豬、一定程度提高仔豬(母源抗體)血清中IgG的水平，但未能有效提高IgA的水平。Baek P S等[18]利用分離株制成PEDV 滅活疫苗，妊娠母豬產(chǎn)前6周和3周各接種1次，對新生仔豬6日齡攻毒保護(hù)試驗(yàn)，存活率達(dá)到92%。

注：①11個省市分別是黑龍江省、吉林省、遼寧省、內(nèi)蒙古自治區(qū)、河北省、山東省、山西省、江蘇省、湖南省、北京市、天津市；②牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)；③豬圓環(huán)病毒2型(PCV-2)。

Note：①11 provinces and cities are Heilongjiang,Jilin,Liaoning,Inner Mongolia,Hebei,Shandong,Shanxi,Jiangsu,Hunan,Beijing,Tianjin；②BVDV；③PCV-2.

3.2 治療

3.2.1 中藥療法 3種病毒性腹瀉多發(fā)于寒冷季節(jié)，多為毒邪濕氣蘊(yùn)積體內(nèi)所致，治宜清熱解毒、健脾祛濕、收澀止瀉。由白頭翁、黃芩、秦皮、黨參、蒼術(shù)、甘草、當(dāng)歸、肉桂、厚樸、訶子、山楂等組成的復(fù)方治療PED，平均4.42 d治愈，治愈率86.67%，復(fù)發(fā)率為0，體重最大下降0.59%，11 d增重22.44%[19]。由穿心蓮、無花果、大青葉、馬齒莧、黃芪等組成的復(fù)方治療PED，有效率和治愈率均達(dá)到50%，并且控制仔豬體重流失、恢復(fù)食欲及維持仔豬血液中鈣、磷、鎂的水平較為突出[20]。尹寶英利用黨參、白術(shù)、茯苓、木香、黃芪、煨訶子、代赭石(方Ⅰ)，藿香、黃芩、茯苓、澤瀉、肉豆蔻、烏梅、煨訶子、姜黃、車前子(方Ⅱ)，對PED的治愈率和有效率分別在52%以上和80%以上。此外，許多植物提取物如甘草甜素、銀杏多糖、槲皮素-7-鼠李糖苷、槲皮素、木犀草素、香豆素、艾草精油等都具有較強(qiáng)的抗PEDV活性。國內(nèi)學(xué)者采用MTT法結(jié)合細(xì)胞病變方法研究發(fā)現(xiàn)，黃芩苷、穿心蓮內(nèi)酯、大黃素、大黃酸、蘆薈大黃素、大黃素甲醚、苦參堿、氧化苦參堿和苦馬豆素[21]，連翹苷、連翹苷元、綠原酸、咖啡酸、丁香酚、丹皮酚[22]對TGEV體外增殖均有抑制作用，以黃芩苷和咖啡酸作用最好。此外，朱砂七多糖、滸苔多糖、黃芪多糖等對TGEV亦有抑制作用。

3.2.2 干擾療法 干擾素(interferon，IFN)是一類具有廣譜抗病毒、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)等多種作用的糖蛋白，有明顯的種屬特異性。趙永旭等[23]利用重組豬α干擾素口服治療PED，仔豬存活率50%～70%，同時進(jìn)行腹腔或/和口服補(bǔ)液，仔豬存活率從53%提升到71%，但不同豬場防治效果差異較大(存活率37.5%～70.0%不等)，可能與初生仔豬感染程度不同有關(guān)。對于嚴(yán)重病例療效不佳，原因是僅用重組豬α干擾素不能緩解脫水和酸中毒癥狀，總體來說用于預(yù)防的效果優(yōu)于治療，母豬和仔豬聯(lián)用效果好于母豬或仔豬單用，但防治成本較高。韓國英等利用重組豬α干擾素治療PED，治愈率為92%。但干擾素必須在病毒感染早期使用效果才佳，且需反復(fù)多次使用。目前，市場上商品化干擾素有正規(guī)獸藥批準(zhǔn)文號的廠家較少，選擇和使用時需注意甄別。

3.2.3 返飼療法 返飼是模擬自然感染方式，將病豬的糞便、病料或含有病原的其他材料經(jīng)口感染未發(fā)病豬，以達(dá)到全群同期感染并同期恢復(fù)的目的。簡義虎等用育肥后期豬模擬母豬返飼(攻毒)試驗(yàn)，試驗(yàn)豬在返飼后第2、3 d相繼出現(xiàn)腹瀉并檢測到PEDV，11 d豬血清中IgG抗體明顯上升，攻毒后20 d IgA與IgG檢測值均達(dá)到峰值，15 d唾液與糞便均檢測不到病毒，表明母豬在產(chǎn)前15 d～30 d返飼效果較好，病毒感染仔豬的風(fēng)險(xiǎn)最低，但返飼整個過程盡量控制在2 h內(nèi)。一般以返飼后3 d～5 d，未發(fā)病豬出現(xiàn)食欲減少、嘔吐或腹瀉等癥狀視為返飼成功。7 d后對在上次飼喂時未出現(xiàn)腹瀉的母豬再次投喂。有的豬場返飼效果不理想，可能與返飼對象不合適、病料選擇不合理、返飼的病毒量不足及返飼時間不當(dāng)?shù)扔嘘P(guān)。由于豬場一般很少做病毒分離鑒定，病料中所含病毒的毒力和含量都不確定，因此，返飼效果有時難以保障，同時也存在暴發(fā)疫病或散毒的風(fēng)險(xiǎn)及免疫應(yīng)激大等缺點(diǎn)。

3.2.4 特異療法 卵黃抗體(IgY)是雞(或禽類)經(jīng)特定抗原免疫后產(chǎn)生相應(yīng)的抗體。研究表明，IgY能提高豬采食量、飼料轉(zhuǎn)化率及生長性能，有效降低由大腸埃希菌、沙門菌、TGEV、PEDV等引起的腹瀉。以TGE+PED二聯(lián)滅活苗免疫產(chǎn)蛋雞，待卵黃抗體效價達(dá)到1∶64時收集卵黃，采用氯仿抽提和硫酸銨鹽析法純化卵黃抗體，通過人工感染治療試驗(yàn)和臨床應(yīng)用，人工感染治愈率為100%，臨床應(yīng)用治愈率為88.0%，但早期病豬治療效果較好，隨著病程延長，口服吸收率下降，治愈率逐漸降低[24]。李冰等[25]通過攻毒治療試驗(yàn)和臨床治療試驗(yàn)檢測抗PEDV卵黃抗體的治療效果，仔豬存活率均達(dá)到60%，但由于仔豬個體免疫力的差別，部分仔豬仍因嚴(yán)重脫水及營養(yǎng)不良而死，并且建議應(yīng)盡量在仔豬出生5 d以內(nèi)使用。潘孝成等利用PEDV卵黃抗體，人工感染治療試驗(yàn)顯示，一次、二次抗體治療組可分別減少死亡率50.0%、83.3%，在3個自然發(fā)病豬場，相較于對照組，抗體治療組可減少仔豬死亡率分別為67.7%、57.0%和77.5%。目前市場上尚無批準(zhǔn)的商品化卵黃抗體，多為一些高校和科研院所制備，由于缺乏統(tǒng)一的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，各地使用效果存在差異。

3.2.5 對癥療法和防止繼發(fā)感染 3種病毒性腹瀉均會引起腸絨毛萎縮，導(dǎo)致脫水和酸中毒，因此，必須采取收斂止瀉、補(bǔ)液強(qiáng)心和糾正酸中毒等對癥治療，這是降低死亡率的關(guān)鍵。

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