重視血小板減少標(biāo)本的血涂片復(fù)檢及假性減少的糾正方法

隨著醫(yī)學(xué)的發(fā)展，血細(xì)胞全自動分析儀已被廣泛使用，其中血小板計數(shù)是眾多血細(xì)胞分析儀的一項(xiàng)重要檢測參數(shù)之一，其準(zhǔn)確性直接關(guān)系到臨床對相關(guān)疾病的診斷和治療，但由于血小板體積小，具有黏附性和聚集性，易受多種因素的影響，常常造成血小板計數(shù)假性減少，如常見的EDTA-K2導(dǎo)致假性血小板減少現(xiàn)象，在國內(nèi)外均有多例報道[1-4]。本文對296例血細(xì)胞分析儀檢測首次血小板計數(shù)＜100×109/L的患者進(jìn)行復(fù)檢，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 材料與方法

1.1 檢測對象

收集我院2017年6—12月門診和住院患者及正常體檢者，血細(xì)胞分析儀檢測首次血小板計數(shù)＜100×109/L的患者共296例，男 184例，女112 例，年齡5～80歲，進(jìn)行血涂片瑞氏-姬姆薩染色，顯微鏡鏡檢復(fù)查。

1.2 儀器和試劑

XE-5000和XS-1000i全自動血細(xì)胞分析儀及原裝配套試劑；質(zhì)控品（Sysmex公司生產(chǎn)）；OLYMPUS CX41顯微鏡；瑞氏-姬姆薩染液（珠海貝索生物技術(shù)有限公司）。儀器嚴(yán)格按要求進(jìn)行維護(hù)和保養(yǎng)，每天檢測室內(nèi)質(zhì)控的各項(xiàng)參數(shù)都在允許的x-±2s以內(nèi)，確保儀器及試劑穩(wěn)定可靠。

1.3 檢測方法

（1）按要求采集EDTA-K2 抗凝血2 ml混勻，按照XS-1000i血細(xì)胞分析儀的操作規(guī)程檢測，篩選出血小板計數(shù)＜100×109/L的血樣，進(jìn)行血涂片瑞氏-姬姆薩染色鏡檢，觀察血涂片血小板是否有聚集。

（2）對血小板有聚集患者，采用末梢新鮮指血采集方式，用兩種方法驗(yàn)證并確定血小板數(shù)；一是迅速采集不加抗凝劑末梢新鮮血0.5 ml左右并混勻，立即用XS-1000i血細(xì)胞分析儀檢測，二是參照《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》[5]，由2位經(jīng)驗(yàn)豐富的主管檢驗(yàn)師進(jìn)行手工鏡檢計數(shù)求平均值，取得的結(jié)果與xs-1000i的檢測結(jié)果進(jìn)行比較。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計軟件處理，檢測所得數(shù)據(jù)以（±s） 表示，組間比較采用方差分析。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

對18例血涂片血小板有聚集患者采用三種方法比較，F(xiàn)=188.2，總體差異有統(tǒng)計學(xué)意義；其中EDTA-K2抗凝血和末梢新鮮指血使用xs-1000i血細(xì)胞分析儀檢測，三種測得結(jié)果進(jìn)行比較分析發(fā)現(xiàn)，末梢新鮮指血和手工計數(shù)二者組間比較P=0.25，P＞0.05，差異無統(tǒng)計學(xué)意義；而EDTA-K2抗凝血明顯比其它兩種方法血小板測得結(jié)果低，組間比較P=0.001，P＜0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。見表1。

3 討論

隨著全自動血細(xì)胞分析儀的廣泛應(yīng)用，假性血小板減少的病例屢見不鮮。 導(dǎo)致假性血小板減少的原因很多，其中以EDTA依賴的假性血小板減少癥（EDTA-PTCP）為常見，其發(fā)生機(jī)制很復(fù)雜，一方面與血小板表面存在的某種隱匿性抗原有關(guān)[6]，EDTA可誘導(dǎo)其構(gòu)象發(fā)生改變，從而與血漿中可能存在的抗血小板抗體或抗心磷脂抗體結(jié)合而發(fā)生聚集，另一方面EDTA可誘導(dǎo)血小板膜表面的GPⅡb/Ⅲa與來自中性粒細(xì)胞Fc段受體結(jié)合形成衛(wèi)星現(xiàn)象，這種現(xiàn)象的發(fā)生率為1.2萬分之一[7]，其臨床意義尚不清楚。2005年國際血液學(xué)組織提出了顯微鏡復(fù)檢的41條建議性標(biāo)準(zhǔn)，得到了中國血液檢驗(yàn)學(xué)界的密切關(guān)注。復(fù)檢規(guī)則要求，對于首次檢測血小板計數(shù)小于100×109/L或大于1000×109/L 應(yīng)涂片復(fù)檢[8]。本組按復(fù)檢規(guī)則要求，對18例判斷為假性血小板減少的樣本，通知相關(guān)科室患者前往血液組采集兩份血樣，第一份快速采集末梢新鮮血，立即用XS-1000i檢測，第二份按操作規(guī)程定量采集末梢血，加入到草酸銨稀釋液。結(jié)果顯示，兩種方法復(fù)檢后血小板顯著增多，與EDTA-K2抗凝血檢測血小板結(jié)果差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

血細(xì)胞分析儀計數(shù)血小板具有快速、簡便、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，但隨著對血小板功能研究的不斷深入，發(fā)現(xiàn)血小板和內(nèi)皮細(xì)胞也參與炎癥反應(yīng)、腫瘤和淋巴管的活動[9]。因此，在自身免疫性疾病、心血管疾病、感染和妊娠等都增加了PTCP的發(fā)生率[10]。雖然EDTA-PTCP與多種疾病狀態(tài)有關(guān)，但至今未有證實(shí)哪種疾病能夠直接引起該現(xiàn)象的產(chǎn)生。曾有針對健康人群EDTA-PTCP發(fā)生因素的調(diào)查[11]，而對住院患者EDTA-PTCP的危險因素尚未見報道。假性血小板減少所致原因復(fù)雜，如臨床疾病或藥物引起的患者自身因素、實(shí)驗(yàn)室檢測因素（采血過程、與EDTA抗凝劑有關(guān)的假性減少、測定時間和溫度的影響、血細(xì)胞分析儀計數(shù)血小板方法學(xué)的缺陷）等[12]。

綜上所述，無論多么先進(jìn)的儀器設(shè)備都需要結(jié)合一定的手工鏡檢，血小板假性減少發(fā)生率較低，但準(zhǔn)確檢出具有重要臨床意義。對于用儀器法檢測患者血小板結(jié)果偏低時＜100×109/L，應(yīng)及時推片鏡檢，結(jié)果不相符的，積極采取措施復(fù)檢，如重新采樣，更換抗凝劑，或采集末梢新鮮血等，必要時還可手工計數(shù)血小板，以提高檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，為臨床醫(yī)師和患者提供最準(zhǔn)確、最可靠的結(jié)果，避免假性血小板減少所致的誤診、誤治和醫(yī)療糾紛的發(fā)生。

表1 18例血涂片血小板有聚集樣本三種方法檢測結(jié)果比較（±s）×109/L

表1 18例血涂片血小板有聚集樣本三種方法檢測結(jié)果比較（±s）×109/L

方法 EDTA-K2抗凝血 末梢新鮮指血 手工計數(shù)血小板數(shù) 60.4 ±18.9 188.7 ±22.5 180.1 ±24.8

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