茶園花期用藥后蜂花粉中吡蟲啉及其代謝物殘留的蜜蜂風(fēng)險評估

梁秀美 ，王祥云 ，汪志威 ，齊沛沛 ，王新全 ，王 強 1，*

（1.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護學(xué)院，南京 210095；2.省部共建國家重點實驗室培育基地“浙江省植物有害生物防控重點實驗室”，農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥殘留檢測重點實驗室，浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究所，杭州 310021；3.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)理學(xué)院，北京 100094；4.溫州科技職業(yè)學(xué)院分析測試中心，溫州 325006）

自然界90%的開花植物和75%的普通作物授粉依賴于昆蟲傳粉，且主要由蜜蜂完成。因此，蜜蜂對于保障食物供給和生物多樣性具有重要意義[1-2]。近年來，歐美地區(qū)蜂群數(shù)量出現(xiàn)了持續(xù)下滑，尤其是2006年冬“蜂群衰竭失調(diào)癥”（Colony Collapse Disorder，CCD）的爆發(fā)，引起了社會各界的高度關(guān)注[3]。棲息地的減少和碎片化、蜜粉源植物的減少、病原菌、氣候變化、農(nóng)藥的大量使用等因素被認(rèn)為是蜜蜂等授粉昆蟲減少的主要原因[4-5]。其中，吡蟲啉等新煙堿類農(nóng)藥被認(rèn)為對蜜蜂具有特殊的不良影響[6-9]。為此，歐盟于2013年對吡蟲啉等3種煙堿類農(nóng)藥實施了為期兩年的臨時限令，禁止其在油菜等蜜粉源作物上使用[10]。

茶樹是我國秋季重要的蜜粉源植物，2015年國家統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示全國茶園面積達(dá)279萬hm2[11]。茶樹具有泌蜜多、花粉豐富的特點，對蜂群秋季繁殖與組織生產(chǎn)十分有利[12-14]。然而，茶樹于秋茶生產(chǎn)末期開花，由于氣候等原因，秋茶生產(chǎn)中蟲害發(fā)生較重，吡蟲啉等殺蟲劑殘留問題較為突出。2016年綠色和平組織公布的調(diào)查報告顯示，20批次非生態(tài)茶葉中16批次檢出吡蟲啉殘留，殘留量為0.017～0.387 mg·kg-1[15]。雖然茶花粉中吡蟲啉的殘留情況尚無相關(guān)報道，但其他作物施用吡蟲啉后，其花粉中吡蟲啉及其代謝物殘留檢出情況極為普遍[16-18]。吡蟲啉及其代謝物具有較強內(nèi)吸性，可通過植物韌皮部或木質(zhì)部傳導(dǎo)至作物各部分，從而導(dǎo)致蜜露和花粉中存在相應(yīng)殘留，這也是歐盟禁止吡蟲啉在油菜、向日葵等蜜粉源作物上使用的主要原因之一。因此，茶樹施用吡蟲啉無疑將導(dǎo)致茶花粉中存在吡蟲啉及其代謝物殘留。

農(nóng)藥對蜜蜂的風(fēng)險評估主要包括危害商（Hazard quotient，HQ）和暴露量/毒性（Exposure toxicity ratio，ETR）等不同方式。我國以及經(jīng)濟合作與發(fā)展組織（OECD）、聯(lián)合國糧農(nóng)組織（FAO）、歐洲和地中海植物保護組織（EPPO）等國際組織廣泛采用危害商作為初級風(fēng)險評估方式，其中歐洲食品安全局（EFSA）還進(jìn)一步采用急性經(jīng)口LD50、成蜂致畸LC50和幼蜂最大無作用劑量（NOEC）等數(shù)據(jù)計算相應(yīng)ETR，以進(jìn)一步評價農(nóng)藥使用的蜜蜂風(fēng)險[19-23]。然而現(xiàn)有吡蟲啉對蜜蜂的風(fēng)險評估僅限于吡蟲啉母體，其代謝物殘留尚未涉及。Suchail等[24]的研究結(jié)果表明，吡蟲啉的烯烴代謝物等具有與其母體相似的蜜蜂毒性，因此在評估茶花蜂花粉中吡蟲啉殘留對蜜蜂的風(fēng)險時應(yīng)涵蓋其代謝物殘留的影響。本實驗通過茶樹花期用藥的方式，評估吡蟲啉及其代謝物對蜜蜂的風(fēng)險情況，以期為吡蟲啉在茶樹上的合理使用提供參考依據(jù)。吡蟲啉及其部分代謝物的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如圖1所示。

圖1 吡蟲啉及其部分代謝物結(jié)構(gòu)式Figure1 The structure of imidacloprid and its metabolites

1 材料與方法

1.1 供試生物

茶樹：龍井43。

意大利蜜蜂（Apis mellifera L.）：由義烏市佛堂鎮(zhèn)養(yǎng)蜂專業(yè)戶提供，全部實驗用蜂均為健康蜂。

1.2 田間試驗設(shè)計

參照《2013年的浙江省茶樹病蟲害防治藥劑名單》的施用劑量[25]，于2015年10月10日—11月10日在浙江省紹興市富盛鎮(zhèn)御茶村茶葉有限公司茶園（簡稱茶園），進(jìn)行田間模擬試驗。

茶園中部設(shè)4座防蟲網(wǎng)大棚以控制蜜蜂采集范圍，每棚0.067 hm2，其中1座為空白對照，其余3座用于模擬實驗，大棚間間隔2 m。施藥前5 d將蜂箱放入大棚內(nèi)，讓蜂群提前適應(yīng)環(huán)境，每個大棚放置2箱蜂（約2×5000只）。待蜜蜂歸巢后，關(guān)閉巢門并以塑料布覆蓋蜂箱，防止藥液沾染蜜蜂。隨后，以噴霧器噴施10%吡蟲啉可濕性粉劑2000倍液1次（有效成分11.5 g·hm-2）。施藥后第 1、2、3、5、7、8、13、17、18 d 采集蜂花粉樣品。蜂花粉樣品通過巢門處的蜂花粉采集器脫取。由于氣候原因，未能獲得蜂蜜樣品。樣品采集后，于車載冰箱中冷藏保存，并盡快送至試驗室，-18℃保存待測。

1.3 樣品檢測

樣品檢測方法詳見文獻(xiàn)[26]，概述如下：5 g蜂花粉樣品中依次加入10 mL水和10 mL 5%甲酸乙腈溶液，渦旋混勻后加入6 g無水硫酸鎂和1.5 g氯化鈉，手動劇烈振搖30 s，離心取上清液；下層樣品再加5 mL 5%的甲酸乙腈溶液重復(fù)提取一次，合并提取液，待凈化。取5 mL合并后的提取液，以EMR凈化管凈化，離心取上清液。上清液以無水硫酸鎂干燥后，用水稀釋1倍，經(jīng)0.22 μm濾膜過濾后，LC-MS/MS測定。蜂花粉中吡蟲啉及其代謝物吡蟲啉烯烴、吡蟲啉脲、6-氯煙酸的定量限分別為0.6、12、1.2、45 μg·kg-1，檢測限分別為 0.2、4、0.4、14 μg·kg-1。在定量限、5倍定量限和10倍定量限的添加水平下，方法回收率在85.9%～107%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差低于8.2%。

1.4 數(shù)據(jù)處理

按1.3節(jié)樣品檢測方法，對采集的蜂花粉樣品進(jìn)行檢測，得出相應(yīng)結(jié)果，并用Excel軟件進(jìn)行分析。

1.5 風(fēng)險評價方法

1.5.1 危害商（HQ）

本文采用《NY/T 2882.4—2016農(nóng)藥登記環(huán)境風(fēng)險評估指南第4部分：蜜蜂》對蜜蜂的危害商進(jìn)行評估，結(jié)果表述為風(fēng)險商值[19]。在噴施場景下，采用噴施農(nóng)藥暴露場景的風(fēng)險商值對蜜蜂進(jìn)行初級風(fēng)險評估。

風(fēng)險商值（RQsp）=AR/（LD50×50）

式中：AR為推薦的農(nóng)藥單次最高施用量（g·hm-2）；LD50為經(jīng)口或接觸的蜜蜂半致死劑量（μg·只-1），吡蟲啉對蜜蜂的急性接觸毒性LD50為0.081 μg·只-1[27]。當(dāng)RQsp≤1時，風(fēng)險可接受；當(dāng)RQsp＞1時，風(fēng)險不可接受，需進(jìn)行高級風(fēng)險評估[19]。

1.5.2 暴露量/毒性（ETR）

ETR包括急性經(jīng)口LD50、成蜂致畸LC50和幼蜂最大無作用劑量（NOEC）等多種評價內(nèi)容[28]。本研究根據(jù)現(xiàn)有毒理學(xué)數(shù)據(jù)，開展了急性經(jīng)口LD50和成蜂致畸LC50的ETR評價。

1.5.2.1 急性經(jīng)口（ETRoral）

成蜂急性經(jīng)口ETRoral=RI/LD50oral

式中：LD50oral指經(jīng)口致死中量（μg·只-1）；RI為蜜蜂單日攝入的殘留量（μg·只-1），可由蜂花粉中的殘留量×蜜蜂單日攝食量計算所得，其中蜜蜂單日蜂花粉攝食量為 0.012 g·只-1。LD50oral源于 Nauen 等[29]的試驗數(shù)據(jù)，吡蟲啉、吡蟲啉烯烴、吡蟲啉脲和6-氯煙酸分別為 0.041、＞0.036、＞99.5 μg·只-1和＞121.5 μg·只-1，參照ESFA計算規(guī)則直接以相應(yīng)數(shù)值計算[29]。ETRoral域值為0.2，當(dāng)數(shù)值＞0.2時，則存在風(fēng)險，應(yīng)采取進(jìn)一步的評估。

1.5.2.2 成蜂致畸（ETRchronic）

成蜂致畸ETRchronic=RI/LC50

式中：LC50指經(jīng)口致死中濃度（μg·L-1）；RI為蜜蜂單日攝入的殘留量（μg·只-1）。吡蟲啉及其代謝物尚無LC50數(shù)據(jù)，因此在ESFA評價中建議采用NOEC值替代[27]。本研究采用Nauen等[29]的試驗數(shù)據(jù)，吡蟲啉、吡蟲啉烯烴、吡蟲啉脲和6-氯煙酸的NOEC值分別為0.001 5、0.002 4、1.2 μg·只-1和 121.5 μg·只-1。ETRchronic域值為0.03，當(dāng)數(shù)值＞0.03時，則存在風(fēng)險，應(yīng)采取進(jìn)一步的評估。

2 結(jié)果與分析

2.1 蜂花粉中吡蟲啉及其代謝物殘留情況

蜂花粉中吡蟲啉及其代謝物殘留測定結(jié)果見表1。藥后 1 d，吡蟲啉濃度達(dá) 529.21 μg·kg-1，同時吡蟲啉脲和 6-氯煙酸分別有 18.01 μg·kg-1和 65.79 μg·kg-1殘留檢出，但蜜蜂毒性相對較高的吡蟲啉烯烴尚無檢出。吡蟲啉殘留在藥后13 d出現(xiàn)急劇降低，在試驗最后 1 d 仍有 0.26 μg·kg-1檢出，但已低于 0.6 μg·kg-1的定量限；吡蟲啉烯烴則僅在藥后3～8 d檢出3.50～4.76 μg·kg-1，但均低于 12 μg·kg-1的定量限；吡蟲啉脲和6-氯煙酸均從藥后第1 d逐漸升高，直至藥后第8 d達(dá)到峰值，分別為39.80 μg·kg-1和149.75 μg·kg-1，至藥后17 d兩者均無檢出。

2.2 風(fēng)險評估結(jié)果

2.2.1 風(fēng)險商

本實驗中吡蟲啉的使用劑量為有效成分11.25 g·hm-2，而吡蟲啉對蜜蜂的急性接觸毒性LD50為0.081 μg·只-1。根據(jù)噴施農(nóng)藥暴露場景的 RQsp，可得吡蟲啉在茶樹上使用的危害商為2.8，高于風(fēng)險可接受閾值。即吡蟲啉在茶樹上的使用對蜜蜂具有不可接受的風(fēng)險，需要進(jìn)一步進(jìn)行風(fēng)險評估。

表1 吡蟲啉及其代謝物在蜂花粉中的殘留量Table1 The residual of imidacloprid and it′s metabolites in pollen

2.2.2急性經(jīng)口

根據(jù)1.5.2.1的計算公式，結(jié)合表1的蜂花粉中吡蟲啉及其代謝物殘留結(jié)果（平均值），蜂花粉中吡蟲啉及其代謝物的急性經(jīng)口ETRoral評價結(jié)果見表2。從表2結(jié)果可知，茶樹花期用藥后蜂花粉中吡蟲啉及其代謝物殘留急性經(jīng)口風(fēng)險最高為0.15，低于ESFA的0.2閾值，即急性經(jīng)口風(fēng)險可接受。此外，吡蟲啉代謝物占總體風(fēng)險比例較低，最高的藥后8 d時的吡蟲啉烯烴也僅占當(dāng)日總風(fēng)險的1.6%。

表2 蜂花粉中吡蟲啉及其代謝物殘留量對蜜蜂的急性經(jīng)口暴露風(fēng)險（ETRoral）Table2 The ETRoralvalues of imidacloprid and its metabolites in bee pollen for honey bee

表3 蜂花粉中吡蟲啉及其代謝物殘留量對蜜蜂的成蜂致畸風(fēng)險（ETRchronic）Table3 The ETRchronicvalues of imidacloprid and its metabolites in bee pollen for honey bee

2.2.3 成蜂致畸

根據(jù)1.5.2.2的計算公式，結(jié)合表1的蜂花粉中吡蟲啉及其代謝物殘留結(jié)果（平均值），蜂花粉中吡蟲啉及其代謝物的急性經(jīng)口ETRchronic評價結(jié)果見表3。從表3結(jié)果可知，茶樹花期用藥后蜂花粉中吡蟲啉及其代謝物殘留成蜂致畸風(fēng)險最高為藥后1 d，達(dá)4.2，遠(yuǎn)高于ESFA的0.03閾值，直到藥后17 d ETRchronic才降至0.03以下，即具有極高的成蜂致畸風(fēng)險。此外，吡蟲啉代謝物占總體風(fēng)險比例較低，相對較高的吡蟲啉烯烴也僅占當(dāng)日總風(fēng)險的1%以下。

3 討論

由于吡蟲啉的廣泛使用，世界各地蜂花粉中均檢出不同程度的吡蟲啉及其代謝物殘留，但濃度跨度較大。法國2002—2004年的連續(xù)監(jiān)測試驗發(fā)現(xiàn)69%的蜂花粉樣品中檢出吡蟲啉或其代謝物6-氯煙酸，殘留量分別為 1.1～5.7 μg·kg-1和 0.6～9.3 μg·kg-1[30]；美國2007—2008年的350份花粉中雖僅有2.9%的樣品檢出吡蟲啉，但殘留量最高達(dá) 992 μg·kg-1[31]；意大利2012—2014年采集的554份蜂花粉中12.5%樣品檢出吡蟲啉，殘留量為 1～19 μg·kg-1[32]。土壤拌種、灌根和葉面噴霧等施藥方式以及距離花期時間的不同，可能是導(dǎo)致蜂花粉中吡蟲啉殘留濃度差異的主要原因。Dively等[33]研究了不同施藥條件下南瓜花粉中吡蟲啉的殘留情況，結(jié)果表明在移植3周滴灌給藥后花粉中的殘留量可達(dá) 52.3～101 μg·kg-1，而苗床給藥僅產(chǎn)生3.3～6.7 μg·kg-1的殘留。由于國內(nèi)外吡蟲啉主要施藥方式的差異，未能查詢到吡蟲啉花期葉面噴霧施藥后花粉中的殘留情況，但據(jù)現(xiàn)有的文獻(xiàn)報導(dǎo)[33]推測吡蟲啉花期葉面噴霧可能帶來更大殘留。因此，為保障蜂產(chǎn)品質(zhì)量安全，應(yīng)限制臨近茶樹花期時吡蟲啉的使用，具體的安全間隔期仍需進(jìn)一步的試驗確認(rèn)。

雖然蜂花粉等蜂產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留對蜜蜂風(fēng)險評估已有部分報道[34-35]，但基于權(quán)威性的考慮，本文最終采用歐盟官方機構(gòu)EFSA的模型進(jìn)行評估[27]。此外，在采用相同模型和閾值的情況下，不同來源數(shù)據(jù)的采用可能導(dǎo)致截然不同的評價結(jié)果。本文中，吡蟲啉急性接觸LD50采用EFSA評估報告所用的0.081 μg·只-1，評價結(jié)果與EFSA評價結(jié)果相同，均為不可接受；但急性經(jīng)口LD50為與其代謝物數(shù)據(jù)相匹配，采用文獻(xiàn)數(shù)據(jù)（0.041 μg·只-1），而 EFSA 采用 0.003 7 μg·只-1，結(jié)果導(dǎo)致吡蟲啉本次急性經(jīng)口風(fēng)險評價可接受，但EFSA評價結(jié)果為不可接受。

為得到更準(zhǔn)確的評估結(jié)果，EFSA在風(fēng)險評價過程中對各種不同施藥場景采用不同系數(shù)計算農(nóng)藥暴露量。條件所限，本次評價中所用殘留數(shù)據(jù)具有一定的局限性，更準(zhǔn)確的評價需進(jìn)一步開展大田試驗。本場景中，采用防蟲網(wǎng)封閉的方式使得蜜蜂僅能采集吡蟲啉噴施后的蜂花粉樣品，而且噴施時間為茶樹始花期，相對實際情況而言，蜂花粉中吡蟲啉殘留易偏高。此外，茶樹蜂花粉具有較高的經(jīng)濟價值，我國蜂農(nóng)通常收集后用于販賣，并不會任由蜜蜂食用，使得蜜蜂的實際暴露風(fēng)險低于評價結(jié)果。然而，本實驗中吡蟲啉的使用劑量為11.25 g·hm-2，而目前中國農(nóng)藥信息網(wǎng)登記的吡蟲啉在茶樹上的最高推薦劑量為42 g·hm-2[36]，比本實驗高近3倍。若在山谷等半封閉環(huán)境內(nèi)，吡蟲啉按現(xiàn)有最高推薦劑量（42 g·hm-2）在茶樹盛花期時使用，可能對蜜蜂帶來較為嚴(yán)重的后果。因此，本文認(rèn)為吡蟲啉在茶樹上葉面噴霧，至少在花期附近使用，對蜜蜂有一定的潛在風(fēng)險，需進(jìn)一步開展試驗和風(fēng)險評估以確保安全性。

4 結(jié)論

（1）以風(fēng)險商值（RQsp）進(jìn)行初級風(fēng)險評估時，吡蟲啉在茶樹上的使用對蜜蜂具有不可接受的急性接觸風(fēng)險。

（2）以ETR進(jìn)行急性經(jīng)口評估時，其茶樹上的使用風(fēng)險為可接受。

（3）以ETR進(jìn)行成蜂致畸評估時，其茶樹上的使用風(fēng)險為藥后前13 d不可接受。

（4）本次評價結(jié)果顯示，吡蟲啉對蜜蜂的風(fēng)險絕大多數(shù)源于吡蟲啉母體，占比超過98%。

[1]Klein A M,Vaissière B E,Cane J H,et al.Importance of pollinators in changing landscapes for world crops[J].Proceedings Biological Sciences,2007,274（1608）：303-313.

[2]Ollerton J,Winfree R,Tarrant S.How many flowering plants are pollinated by animals?[J].Oikos,2011,120（3）：321-326.

[3]Johnson R.Recent honey bee colony declines[R].Congressional Research Service Reports.2007.

[4]Potts S G,Biesmeijer J C,Kremen C,et al.Global pollinator declines：Trends,impacts and drivers[J].Trends in Ecology&Evolution,2010,25（6）：345-353.

[5]Vanbergen A J.Threats to an ecosystem service：Pressures on pollinators[J].Frontiers in Ecology&the Environment,2013,11（5）：251-259.

[6]藺哲廣,孟 飛,鄭火青,等.新煙堿類殺蟲劑對蜜蜂健康的影響[J].昆蟲學(xué)報,2014,57（5）：607-615.

LIN Zhe-guang,MENG Fei,ZHENG Huo-qing,et al.Effects of neonicotinoid insecticides on honeybee health[J].Acta Entomological Sinica,2014,57（5）：607-615.

[7]Decourtye A,Armengaud C,Renou M,et al.Imidacloprid impairs memory and brain metabolism in the honeybee（Apis mellifera L.）[J].Pesticide Biochemistry and Physiology,2004,78（2）：83-92.

[8]Cresswell J E.A meta-analysis of experiments testing the effects of a neonicotinoid insecticide（imidacloprid）on honey bees[J].Ecotoxicology,2011,20（1）：149-157.

[9]Whitehorn P R,O′Connor S,Wackers F L,et al.Neonicotinoid pesticide reduces bumble bee colony growth and queen production[J].Science,2012,336（6079）：351-352.

[10]單 蕾.歐盟委員會頒布新煙堿類殺蟲劑限令[J].農(nóng)藥科學(xué)與管理,2013,34（10）：9.

SHAN Lei.European commission issued the restrictions of neonicotinoid insecticides[J].Pesticide Science and Administration,2013,34（10）：9.

[11]中華人民共和國國家統(tǒng)計局.國家數(shù)據(jù)：2015年茶園面積[DB/OL].[2018-02-09].http：//data.stats.gov.cn/easyquery.htm?cn=C01

National Bureau of Statistics of the People′s Republic of China.National Data：The area of tea garden in 2015[DB/OL][2018-02-09].http：//data.stats.gov.cn/easyquery.htm?cn=C01

[12]單堯燕.茶花期蜂群的管理[J].蜜蜂雜志,1996（5）：13-14.

SHAN Yao-yan.The management of bee colonies on tea treesbloom[J].Journal of Bee,1996（5）：13-14.

[13]羅建能.浙江四明山區(qū)茶花期蜂群的管理[J].中國養(yǎng)蜂,2003,54（4）：13.LUO Jian-neng.The management of bee colonies on tea trees bloom in Zhejiang Siming district[J].Apiculture of China,2003,54（4）：13.

[14]趙建航,李海金,吳國龍.杭州地區(qū)蜜蜂小轉(zhuǎn)地飼養(yǎng)管理技術(shù)[J].中國蜂業(yè),2007,58（2）：18-19.

ZHAO Jian-hang,LI Hai-jin,WU Guo-long.The small migratory feeding and management technology of honeybees in Hangzhou[J].Apiculture of China,2007,58（2）：18-19.

[15]綠色和平組織. 2016 年綠色和平茶葉農(nóng)藥調(diào)查報告[EB/OL].[2018-02-09]. http：//www. greenpeace. org. cn/2016-tea-pesticideresidue-report/Greenpeace. The greenpeace tea pesticide survey report of 2016 [EB/OL].[2018-02-09]. http：//www. greenpeace. org. cn/2016-tea-pesticide-residue-report/

[16]Stoner K A,Eitzer B D.Movement of soil-applied imidacloprid and thiamethoxam into nectar and pollen of squash（Cucurbitapepo）[J].PloS One,2012,7（6）：e39114.

[17]Sánchez-Hernández L, Hernández-Domínguez D, Martín M T, et al.Residues of neonicotinoids and their metabolites in honey and pollenfrom sunflower and maize seed dressing crops[J]. Journal of ChromatographyA, 2016, 1428：220-227.

[18]David A,Botías C,Abdul-Sada A,et al.Widespread contamination of wildflower and bee-collected pollen with complex mixtures of neonicotinoids and fungicides commonly applied to crops[J].Environment International,2016,88：169-178.

[19]中華人民共和國農(nóng)業(yè)部.NY/T 2882.4—2016農(nóng)藥登記環(huán)境風(fēng)險評估指南第4部分：蜜蜂[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2016.

Ministry of Agriculture of PRC.NY/T 2882.4—2016 Guidance on environment risk assessment for pesticide registration Part 4：Honeybees[S].Beijing：China Standards Press,2016.

[20]OECD（Organization for Economic Co-operation and Development）.OECD guidance for industry data submissions on plant protection prod－ucts and their active substances（revision2）.Appendix 8,part 3,Ecotoxicological Studies and Risk Assessment[S].Paris,France：OECD,2005.

[21]FAO（Food and Agriculture Organization of the United Nations）.Revised guidelines on environmental criteria for the registration of pesticides.Part 2,guidelines for appropriate test procedures[S].Rome,I－taly：FAO,1989.

[22]EPPO（European and Mediterranean Plant Protection Organization）.Guidelines for the efficacy evaluation of plant protection products.No.170：side effects on honeybees[J].IOBC/WPRS Bulletin,2000,23：51-55.

[23]EFSA.Conclusion on the peer review of the pesticide risk assessment for bees for the active substance imidacloprid[J].EFSA Journal,2013,11（1）：3068.

[24]Suchail S,Guez D,Belzunces L P.Discrepancy between acute and chronic toxicity induced by imidacloprid and its metabolites in apis mellifera[J].Environmental Toxicology and Chemistry,2001,20（11）：2482-2486.

[25]浙江省農(nóng)業(yè)廳.2013年浙江省主要農(nóng)作物病蟲草害防治藥劑推薦名單[EB/OL].[2018-02-09].http：//www.zj.gov.cn/art/2013/5/28/art_5528_725535.html

Zhejiang Province Agriculture Department.The recommend list of pesticides for major crops in Zhejiang Province 2013.[EB/OL].[2018-02-09].http：//www.zj.gov.cn/art/2013/5/28/art_5528_725535.html

[26]梁秀美,王祥云,薛曉鋒,等.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定蜂產(chǎn)品中吡蟲啉及其3種代謝物[J].分析化學(xué),2017,45（4）：553-559.

LIANG Xiu-mei,WANG Xiang-yun,XUE Xiao-feng,et al.Determination of imidaclopridand its three metabolites in honey and bee pollen by liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J].Analytical Chemistry,2017,45（4）：553-559.

[27]EFSA.Conclusion on the peer review of the pesticide risk assessment for bees for the active substance imidacloprid considering all uses other than seed treatments and granules[J].Efsa Journal,2015,13（8）：4211.

[28]EFSA.Guidance on the risk assessment of plant protection products on bees（Apismellifera,Bombusspp.and solitary bees）[J].Efsa Journal,2013,11（7）：3295.

[29]Nauen R, Ebbinghaus-Kintscher U, Schmuck R. Toxicity and nicotinicacetylcholine receptor interaction of imidacloprid and its metabolites inApis mellifera（Hymenoptera：Apidae）[J]. Pest Management Science,2001, 57（7）：577-586.

[30]Chauzat M,Faucon J A,Lachaize J,et al.A survey of pesticide residues in pollen loads collected by honey bees in France[J].Journal of Economic Entomology,2006,99（2）：253-262.

[31]Mullin C A,Frazier M,Frazier J L,et al.High levels of miticides and agrochemicals in North American apiaries：Implications for honey bee health.[J].PloS One,2010,5（3）：e9754.

[32]Tosi S,Costa C,Vesco U,et al.A 3-year survey of Italian honey beecollected pollen reveals widespread contamination by agricultural pesticides.[J].Science of the Total Environment,2017,615：208-218.

[33]Dively G P,Kamel A.Insecticide residues in pollen and nectar of a cucurbit crop and their potential exposure to pollinators[J].Journal of A－gricultural and Food Chemistry,2012,60（18）：4449-4456.

[34]Sanchez-Bayo F,Goka K.Pesticide residues and bees：A risk assessment[J].PloS One,2014,9（4）：e94482.

[35]Lawrence T J,Culbert E M,Felsot A S,et al.Survey and risk assessment of Apis mellifera（Hymenoptera：Apidae）exposure to neonicotinoid pesticides in urban,rural,and agricultural settings[J].Journal of Economic Entomology,2016,109（2）：520-528.

[36]中華人民共和國農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定管理所.農(nóng)藥登記數(shù)據(jù)庫：茶上吡蟲啉登記數(shù)據(jù)[DB/OL].[2018-02-09].http：//www.chinapesticide.org.cn/hysj/index.jhtml

Institute for the Control of Agrochemicals,MOA.Pesticide registration data base：Imidacloprid registered on teas[DB/OL].[2018-02-09].http：//www.chinapesticide.org.cn/hysj/index.jhtml