血清miR-27a評(píng)估胰腺癌患者化療療效和預(yù)后的臨床應(yīng)用價(jià)值

朱善軍 徐震 沈昊 沈國(guó)榮 付海龍 楊鴻林 錢東林 沈振芳 石磊 錢紅英 朱安渡 馬春芳

微小RNA(microRNA，miRNA)是一類長(zhǎng)度為21～24個(gè)核苷酸的非編碼小分子RNA，可在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控靶基因表達(dá)。據(jù)報(bào)道，一些miRNA廣泛參與細(xì)胞增殖、分化、凋亡和基因調(diào)控，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中扮演重要角色[1]。miR-27a作為一種腫瘤相關(guān)基因，受到人們?cè)絹碓蕉嗟年P(guān)注，其異常表達(dá)與人類肺癌、食管癌、肝癌、胃癌等惡性腫瘤存在相關(guān)性[2-5]，但通過監(jiān)測(cè)miR-27a水平評(píng)估胰腺癌患者化療療效及預(yù)后的研究鮮見報(bào)道。本研究檢測(cè)胰腺癌患者化療前后血清miR-27a水平的變化，探討其臨床應(yīng)用價(jià)值。

一、資料與方法

1．研究對(duì)象：收集2013年5月至2015年8月間南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院和南通大學(xué)附屬蘇州市吳江區(qū)第一人民醫(yī)院腫瘤科收治的169例胰腺癌患者，其中男性98例，女性71例，年齡 31～77歲，平均(58±8)歲。胰腺癌的診斷均經(jīng)組織病理學(xué)檢查確診?；颊唠S訪至2015年10月。

2．化療方案及療效評(píng)價(jià)：患者接受美國(guó)國(guó)立綜合癌癥網(wǎng)絡(luò)(NCCN)推薦的一線或二線藥物化療，一線藥物化療方案為吉西他濱，二線化療藥物為FOLFOX4方案。每個(gè)化療周期結(jié)束后參考RECIST標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行療效評(píng)價(jià)。完全緩解(CR)：所有目標(biāo)病灶消失和腫瘤標(biāo)志物水平正常；部分緩解(PR)：基線病灶長(zhǎng)徑總和縮小≥30%；病情進(jìn)展(PD)：基線病灶長(zhǎng)徑總和增加≥20%、絕對(duì)值增大5 mm或出現(xiàn)新病灶；病情穩(wěn)定(SD)：基線病灶長(zhǎng)徑總和有縮小但未達(dá)PR或有增加但未達(dá)PD，一個(gè)或多個(gè)非目標(biāo)病灶和(或)腫瘤標(biāo)志物高于正常持續(xù)存在。本組患者以一線藥物化療后的最好療效進(jìn)行分組。

3．血清miR-27a檢測(cè)：采用雙重?zé)晒舛縋CR法檢測(cè)患者血清miR-27a水平。于化療前1～7 d及化療后1～2 d采集靜脈血2 ml，3 000 r/min離心5 min，取上層血清再于4℃ 16 000 g 離心10 min，分裝上層血清，置-70℃保存。2 h內(nèi)應(yīng)用Qiazol試劑提取血清總RNA，分光光度法測(cè)定其濃度和純度。采用RT試劑盒逆轉(zhuǎn)錄miR-27a和內(nèi)參cel-miR-39，反應(yīng)條件：16℃ 30 min，42℃ 30 min，85℃ 5 min。再在ABI 7 500熒光定量PCR擴(kuò)增儀擴(kuò)增，反應(yīng)條件：95℃ 10 min，95℃ 15 s、60℃ 1 min，45個(gè)循環(huán)。數(shù)據(jù)采集和處理由軟件SDS system software完成[8]。miRNeasy Mini Kit購(gòu)自美國(guó)Qiagen公司，Taqman miRNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、miRNA特異性莖環(huán)結(jié)構(gòu)逆轉(zhuǎn)錄引物、雙重?zé)晒舛縋CR引物和探針均購(gòu)自美國(guó)Appliued BioSystems公司，Real-time PCR試劑盒購(gòu)自寶生物工程(大連)有限公司。

4．統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：應(yīng)用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。采用 Shapiro-Wilk 正態(tài)性檢驗(yàn)考察計(jì)量資料的分布，偏態(tài)資料以M(P25,P75)表示，組間比較采用Kruskal-Wallis秩和檢驗(yàn)，化療前后比較采用Wilcoxon配對(duì)秩和檢驗(yàn)。生存曲線分析采用Kaplan-Meier方法，并進(jìn)行Log-rank檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

二、結(jié)果

1．胰腺癌患者化療療效：169例患者接受一線或二線藥物化療后獲得有效隨訪146例，有效隨訪率為86.4%。依據(jù)RECIST標(biāo)準(zhǔn)，無CR病例，PR 91例，SD 39例，PD 16例。

2．胰腺癌患者化療前后血清miR-27a水平變化：146例胰腺癌患者化療前血清miR-27a水平為1.75(1.09～2.22)，化療后為2.88(0.91～4.43)，化療后較化療前顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=-4.609，P< 0.001)。

3．胰腺癌患者化療前后血清miR-27a水平變化與化療療效的關(guān)系：化療前91例PR組和55例SD+PD組患者血清miR-27a水平分別為1.75(1.27～2.36)和1.83(0.95～2.19)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=-1.018，P=0.309)?；熀驪R組和SD+PD組患者血清miR-27a水平分別為3.90(2.96～5.21)和0.78(0.63～1.03)，化療后PR組顯著高于化療前，而SD+PD組水平顯著低于化療前，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=-6.325，P<0.001；Z=-4.505，P<0.001)。此外，化療后PR組血清miR-27a水平顯著高于SD+PD組，差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=-7.821，P<0.001)。

4．血清miR-27a水平變化與患者生存時(shí)間的關(guān)系：至隨訪結(jié)束，146例患者存活時(shí)間為3～29個(gè)月，中位生存期為10.2個(gè)月，其中6個(gè)月、1年生存率分別為75.4%、52.8%。根據(jù)化療后血清miR-27a水平升高或下降將146例患者分為化療后升高組和下降組。81例升高組患者的平均生存時(shí)間為12.4個(gè)月，65例下降組患者的平均生存時(shí)間為8.6個(gè)月，升高組總體生存時(shí)間顯著長(zhǎng)于下降組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=8.241，P=0.001，圖1)。

討論胰腺癌是一種較常見的惡性腫瘤，惡性度高、療效欠佳、預(yù)后差，5年生存率小于5%。目前根治性切除是胰腺癌患者的首選治療方式，但由于早期診斷率低，僅有不到20%的患者存在根治性切除的手術(shù)機(jī)會(huì)。許多研究結(jié)果顯示，胰腺癌輔助化療對(duì)提高患者生活質(zhì)量，改善患者預(yù)后均具有重要意義[6]。但由于個(gè)體差異加之缺乏準(zhǔn)確的化療療效評(píng)價(jià)體系，傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)化療所取得的效果并不令人滿意。為提高化療療效，改善患者預(yù)后，針對(duì)胰腺癌患者實(shí)施系統(tǒng)性、綜合性、個(gè)體化的規(guī)范診治已成為臨床化療的方向和趨勢(shì)[7]。

圖1 化療后血清miR-27a水平升高及降低組患者的Kaplan-Meier生存曲線

本研究結(jié)果顯示，146例胰腺癌患者血清miR-27a水平在化療后總體顯著升高，其中PR組患者血清miR-27a水平在化療后顯著升高，而SD+PD組患者化療后顯著下降，且化療后PR組顯著高于SD+PDF組，而化療前PR組和SD+PD組患者血清miR-27a水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示血清miR-27a水平有可能成為評(píng)估胰腺癌化療療效的血清學(xué)標(biāo)志物。血清miR-27a水平升高可能與化療藥物誘導(dǎo)胰腺癌細(xì)胞發(fā)生凋亡，釋放大量miR-27a進(jìn)入血循環(huán)所致。

根據(jù)Kaplan-Meier生存分析結(jié)果，化療后血清miR-27a水平升高的81例患者的平均生存時(shí)間顯著長(zhǎng)于血清miR-27a水平下降的62例患者，與Wang等[8]報(bào)道的血清miR-638水平對(duì)非小細(xì)胞型肺癌患者具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值結(jié)

果一致，提示血清miR-27a也可能成為評(píng)估胰腺癌患者預(yù)后的潛在的血清學(xué)標(biāo)志物。

參 考 文 獻(xiàn)

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