抗豬流行性腹瀉病毒高免卵黃抗體的制備及臨床應用研究

呂梁市臨縣城莊畜牧獸醫(yī)站 033200

2010年以來，仔豬流行性腹瀉在全國范圍內爆發(fā)，給生豬養(yǎng)殖戶造成巨大的經濟損失。調查研究顯示，豬流行性腹瀉（PED）具有發(fā)病急、傳播快、發(fā)病率與死亡率高、波及面廣等特點[1]。對其的治療也處于摸索階段。因此，制定一種切實可行的預防治療措施迫在眉睫。本試驗主要制備一種高免卵黃抗體，并研究其在預防和治療上的效果?，F(xiàn)報告如下。

1 材料、儀器及試驗對象

（1）試驗材料。發(fā)病仔豬的腸道病料，瓊脂粉，PED陽性血清。

（2）試驗儀器。高速勻漿機，江蘇天翎儀器有限公司；干烤箱，上海和呈儀器制造有限公司；高壓鍋，長沙明杰儀器有限公司；溫箱，深圳市廣邁儀器設備有限公司；玻璃瓶、離心機、梅花打孔器、移液器等。

（3）試驗試劑。甲醛等。

（4）試驗對象。昆明鼠，120日齡待開產蛋雞，仔豬。

2 試驗方法

（1）高免卵黃抗體的制備。抗豬流行性腹瀉病毒高免卵黃抗體按照如下方法進行制備[2-3]。制備免疫抗原。選擇2～3日齡感染發(fā)病的產房仔豬，無菌采集其腸道并進行處理。處理后留取一部分未滅活組織液，冷凍保存，供攻毒試驗使用。制備卵黃抗體。給雞胸肌注射制備的PEDV組織滅火苗，并按規(guī)定進行首免、二免、三免及四免，首免后每周收集雞蛋，分離卵黃。制備治療用卵黃抗體。取抗體效價＞64的高免蛋，無菌去除蛋清、分離蛋黃，并加入生理鹽水，攪拌分裝。

（2）仔豬的攻毒試驗。每頭豬口服0.2mL免疫抗原，觀察攻毒后的腹瀉情況。

（3）高免卵黃抗體臨床預防試驗。對吃初乳的40頭仔豬進行攻毒試驗，將其分成4組，分別為對照組（不采取任何措施），抗生素、干擾素治療組，卵黃抗體治療組及卵黃抗體提前預防后攻毒組。每組10頭，觀察卵黃抗體實驗室攻毒保護試驗結果。

（4）高免卵黃抗體臨床治療試驗。對不同日齡的50頭豬進行攻毒試驗，獎其分成5組，分別為1日齡組、10日齡組、20日齡組、30日齡組及40日齡組，并對其進行卵黃抗體攻毒治療試驗，觀察卵黃抗體實驗室攻毒治療試驗結果。

3 試驗結果

（1）卵黃抗體人工感染的預防和治療試驗。仔豬攻毒保護試驗結果見表1。

表1 仔豬攻毒保護試驗結果

由表1可以看出，4組仔豬進行攻毒保護試驗后，除卵黃抗體預防組有9頭未發(fā)病外，其余所有仔豬全部發(fā)病。其中，對照組10頭仔豬全部發(fā)病并死亡，保治愈率為0%；抗生素、干擾素治療組發(fā)病10頭，死亡8頭，保治愈率為20%；卵黃抗體治療組仔豬發(fā)病10頭，死亡7頭，保治愈率為30%；卵黃抗體預防組仔豬發(fā)病1頭，死亡1頭，保治愈率為90%。

（2）不同日齡攻毒組卵黃抗體治療試驗。不同日齡攻毒組卵黃抗體治療試驗結果見表2。

表2 不同日齡攻毒組卵黃抗體治療試驗

由表2可以看出，5組豬進行攻毒治療試驗后，所有豬全部發(fā)病。其中，1日齡、10日齡、20日齡、30日齡、40日齡豬死亡數分別為8頭、5頭、3頭、1頭和0頭，治愈率分別為20%、50%、70%、90%和100%。

3 討論

該病發(fā)病急，流行范圍廣，發(fā)病率和死亡率高。各個季節(jié)均有發(fā)生，但秋冬季多發(fā)。主要通過糞便和乳汁傳播。各種日齡的豬均有發(fā)生，其中哺乳仔豬發(fā)病最為嚴重。胃-流-輪三聯(lián)弱毒疫苗均未起到保護作用，抗生素等無法控制該病。因此，對該病的預防及治療措施需進一步研究與討論。

本試驗利用本次發(fā)病仔豬的腸道，制備抗PEDV的特異性高免卵黃抗體。結果顯示，卵黃抗體對初生仔豬的預防保護率較高，達90%。但是，卵黃抗體對不同日齡豬的治愈效果相差較大，對1日齡發(fā)病仔豬的治療效果不明顯，隨著日齡的增大，治愈效果不斷增強，治愈率也逐漸增高。所以，對初生仔豬進行高免卵黃抗體注射可以有效地預防豬流行性腹瀉的發(fā)生，對大日齡（尤其是40日齡）流行性腹瀉感染豬施以高免卵黃抗體治療，能收到較好的治療效果。高免卵黃抗體可以在各大養(yǎng)豬場進行實踐性應用與臨床應用。

[1]張坤,何啟蓋.豬流行性腹瀉病毒、豬傳染性胃腸炎病毒和豬A群輪狀病毒多重RT-PCR檢測方法的建立及臨床應用[J].畜牧獸醫(yī)學報，2010(08).

[2]劉文娟,吳健敏,陸芹章,等.抗豬病毒性腹瀉卵黃抗體的研制及純化[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2010(19).

[3]程志燕.抗豬流行性腹瀉病毒卵黃抗體治療效果研究[J].農業(yè)與技術，2017(22).