麻黃定喘湯和鹿茸大補湯的急性毒性研究

李聰，鄭明昱，許妍姬*(.延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)院預(yù)防醫(yī)學(xué)教研室，吉林 延吉 3300;.延邊大學(xué)中醫(yī)學(xué)院中醫(yī)臨床教研室，吉林 延吉 3300)

隨著經(jīng)濟的高速發(fā)展，人們生活的環(huán)境也隨之受到了破壞，空氣污染嚴重，導(dǎo)致哮喘病發(fā)病率上升。在臨床治療中，通常采用西藥糖皮質(zhì)激素治療，但是藥物副作用明顯。朝醫(yī)學(xué)根據(jù)辨象論治，出自《東醫(yī)壽世保元》中麻黃定喘湯和鹿茸大補湯這兩藥方來治療，所以麻黃定喘湯和鹿茸大補湯的衛(wèi)生毒理學(xué)安全也受到了重視。

麻黃定喘湯，具有補肺潤肺，化痰平喘之功效[1]。配方根據(jù)中藥配伍理論和臨床經(jīng)驗，通過藥理研究科學(xué)配制[2]。麻黃定喘湯由麻黃15 g，杏仁7.5 g，黃芩5 g，萊菔子5 g，桑白皮5 g，桔梗5 g，麥冬5 g，款冬花5 g，白果20枚九味中藥組成。

鹿茸大補湯，具有補肺益精血，健肺止咳之功效[3]。配方根據(jù)中藥配伍理論和臨床經(jīng)驗，通過藥理研究科學(xué)配制[4]。鹿茸大補湯由鹿茸15 g，麥冬7.5 g，薏苡仁7.5 g，山藥5 g，天冬5 g，五味子5 g，杏仁5 g，麻黃5 g八味中藥組成。

此次實驗采用安慰劑對照實驗方法，探討麻黃定喘湯和鹿茸大補湯的急性毒性。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物

健康適齡SPF級昆明種小鼠50只，雌、雄各半，體質(zhì)量18～22 g，購于延邊大學(xué)動物科學(xué)實驗中心。飼養(yǎng)環(huán)境：延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)院動物房,溫度22～25℃，相對濕度40%～70%，普通飼料由延邊大學(xué)動物科學(xué)實驗中心提供。

1.1.2 藥物

麻黃定喘湯與鹿茸大補湯，延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)院，配制方法：按照藥劑配方，由延邊大學(xué)藥學(xué)院制備成凍干粉的形式，轉(zhuǎn)交于延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)院，麻黃定喘湯凍干粉的轉(zhuǎn)換率為27.79%，鹿茸大補湯凍干粉的轉(zhuǎn)換率為25.83%。

1.1.3 試劑

谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT/GPT)測試盒(C009-2，微板法，生產(chǎn)批號20161120)；谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST/GOT)測試盒(C010-2，微板法，生產(chǎn)批號20161116)，以上試劑均購于南京建成生物工程研究所。

1.1.4 實驗儀器

恒溫水浴鍋、37℃恒溫培養(yǎng)箱、立式壓力蒸汽滅菌器、移液器、酶標(biāo)儀、電子天平、微量振蕩器、高速冷凍離心機、制冰機、組織研磨器等均由延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)院預(yù)防醫(yī)學(xué)實驗中心提供。

1.2 方法

1.2.1 預(yù)實驗

根據(jù)《毒理學(xué)基礎(chǔ)實驗指導(dǎo)》(科學(xué)出版社2010年版)，進行毒性試驗預(yù)實驗，預(yù)測藥物的半數(shù)致死量(LD50)[5]。取體質(zhì)量18～22 g昆明鼠種8只，隨機分為4組，用苦味酸進行標(biāo)記，雌、雄各半，動物適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d，禁水食12 h。第一組給麻黃定喘湯濃度1.2 g·mL-1，按照小鼠體質(zhì)量10 mL·kg-1的劑量給藥(相當(dāng)于成人臨床用藥的50倍)；第二組給麻黃定喘湯濃度2.3 g·mL-1，按照小鼠灌胃最大承受體積(40 mL·kg-1)的劑量給藥(相當(dāng)于成人臨床用藥的200倍)；第三組給鹿茸大補湯濃度1.3 g·mL-1，按照小鼠體質(zhì)量10 mL·kg-1的劑量給藥(相當(dāng)于成人臨床用藥的50倍)；第四組給鹿茸大補湯濃度2.6 g·mL-1，小鼠灌胃最大承受體積(40 mL·kg-1)，一次性灌胃給藥(相當(dāng)于成人臨床用藥的200倍)[6]，給藥后自由進食和飲水，連續(xù)觀察3 d。期間每天對小鼠進行觀察體態(tài)、體征、飲水量、攝食量等[7]。

1.2.2 一般急性毒性實驗

將42只18～22 g昆明小鼠取回后，按性別放入清潔培養(yǎng)箱中，適應(yīng)環(huán)境飼養(yǎng)3 d，經(jīng)籠旁觀察動物的精神、活動、飲食、大小便等生理活動[8]。按性別隨機分為生理鹽水對照組、麻黃定喘湯給藥組和鹿茸大補湯給藥組，每組各14只，雌、雄各半，分籠飼養(yǎng)[9]。實驗前，禁水食12 h，生理鹽水對照組；0.9%NaCl溶液，按照小鼠體質(zhì)量10 mL·kg-1的劑量給藥；麻黃定喘湯給藥組：給予藥物濃度2.3 g·mL-1，按照小鼠體質(zhì)量10 mL·kg-1的劑量給藥(相當(dāng)于成人臨床用藥的100倍)；鹿茸大補湯給藥組：給予藥物濃度2.6 g·mL-1，按照小鼠體質(zhì)量10 mL·kg-1的劑量給藥(相當(dāng)于成人臨床用藥的100倍)。一次性灌胃給藥，自由進水食，連續(xù)觀察7 d，詳細記錄小鼠每日攝食量、體質(zhì)量、神情狀態(tài)及死亡情況等[10]。7 d后，用頸椎脫臼法將小鼠處死，解剖觀察，取腦、肝、脾、肺、腎臟器稱重，計算臟器系數(shù)[11]。對小鼠組織進行生化檢查，測得谷草轉(zhuǎn)氨酶活力(U/gprot)和谷丙轉(zhuǎn)氨酶活力(U/gprot)。

1.2.3 統(tǒng)計分析

2 結(jié)果

2.1 預(yù)實驗測定結(jié)果

小鼠灌胃后，立即觀察到，麻黃定喘湯給藥組和鹿茸大補湯給藥組的小鼠活動均減少，高劑量組小鼠部分出現(xiàn)胃痙攣和心跳過速等現(xiàn)象，0.5 h后恢復(fù)正常，觀察3 d，毛色光滑正常，大小便正常，眼、鼻、口腔未見異常分泌物，無運動失調(diào)，呼吸、進食、飲水均正常，無死亡現(xiàn)象。處死后，觀察各臟器均無明顯異常。未見死亡現(xiàn)象，無法測得半數(shù)致死量(LD50)。

2.2 小鼠急性毒性實驗

2.2.1 一般情況

以23 000 mg·kg-1麻黃定喘湯和26 000 mg·kg-1鹿茸大補湯分別給藥(相當(dāng)于成人臨床用藥的100倍)，灌胃處理后，小鼠生長情況良好，體質(zhì)量增長正常，無中毒死亡癥狀。觀察7 d后，將小鼠解剖觀察，各臟器均無明顯異常。通過經(jīng)口急性毒性實驗，根據(jù)我國《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》(2003年版)的評價標(biāo)準(zhǔn)，屬無毒級。見表1。

2.2.2 各組實驗小鼠體質(zhì)量的變化

通過每日稱量小鼠體質(zhì)量，麻黃定喘湯組和鹿茸大補湯組實驗小鼠的體質(zhì)量分別與生理鹽水對照組的比較，無明顯差異，無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

2.2.3 各組實驗小鼠攝食量的變化

通過每日稱量小鼠攝食量，麻黃定喘湯組和鹿茸大補湯組實驗小鼠的攝食量分別與生理鹽水對照組比較，無明顯差異，無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

表1 各給藥組急性毒性實驗結(jié)果

表2 各給藥組實驗小鼠體質(zhì)量的變化

表3 各給藥組實驗小鼠攝食量的變化

2.2.4 各組實驗小鼠的總食物利用率

通過每組實驗小鼠的總增重量和總進食量，計算總食物利用率(總食物利用率=總增重量/總進食量×100%)。麻黃定喘湯組和鹿茸大補湯組實驗小鼠的總食物利用率分別與生理鹽水對照組比較，無明顯差異，無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表4。

表4 各組實驗小鼠的總食物利用率

2.2.5 各組實驗小鼠臟器重量的變化

觀察結(jié)束后，解剖小鼠，取腦、肝臟、脾臟、肺及腎臟，稱重并進行統(tǒng)計處理。麻黃定喘湯組和鹿茸大補湯組實驗小鼠的各臟器重量分別與生理鹽水對照組比較，無明顯差異，無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表5。

2.2.6 各組實驗小鼠臟器系數(shù)比較

通過稱量實驗小鼠各臟器的重量和體質(zhì)量，計算各臟器系數(shù)(臟器系數(shù)=臟器重量/體質(zhì)量)。麻黃定喘湯組和鹿茸大補湯組實驗小鼠的臟器系數(shù)分別與生理鹽水對照組比較，無明顯差異，無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表6。

2.2.7 各組實驗小鼠生化指標(biāo)結(jié)果

通過谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST/GOT)測試盒和谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT/GPT)測試盒，對小鼠組織進行測量，測得谷草轉(zhuǎn)氨酶活力(U/gprot)和谷丙轉(zhuǎn)氨酶活力(U/gprot)。麻黃定喘湯組和鹿茸大補湯組實驗小鼠的酶活力分別與生理鹽水對照組比較，無明顯差異，無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表7。

表5 各組實驗小鼠臟器重量的變化

表6 各組實驗小鼠臟器系數(shù)比較

表7 各組實驗小鼠生化指標(biāo)結(jié)果

3 討論

朝醫(yī)藥是我國傳統(tǒng)文化智慧的結(jié)晶，具有獨特的哲學(xué)思想及理論體系[12]。朝醫(yī)藥和中醫(yī)藥都是在中國古代哲學(xué)和經(jīng)驗總結(jié)基礎(chǔ)上發(fā)展而成的完整的醫(yī)藥學(xué)體系，有著緊密不可分的聯(lián)系[13]。隨著現(xiàn)代朝醫(yī)藥事業(yè)的高速發(fā)展,朝醫(yī)藥在世界范圍內(nèi)防病與治病的有效性[14]得到了更為廣泛的認可，配方的毒性安全性日益受到了人們的重視。哮喘病發(fā)病率上升，朝醫(yī)學(xué)通常用補肺潤肺，益精血之藥物來辨象論治此病[15]。麻黃定喘湯和鹿茸大補湯均出自《東醫(yī)壽世保元》，都為治太陰人,喘氣困難而設(shè),補小瀉大，用于太陰人哮喘效果頗佳[16]，所以比較研究其毒性。由于這兩服藥在臨床的有效性和特殊性明顯，安全性評價就尤為重要。

本實驗通過急性毒性實驗，研究麻黃定喘湯和鹿茸大補湯對小鼠的急性毒性作用。由于預(yù)實驗無法測得半數(shù)致死量，采用臨床成人藥量100倍作為實驗劑量，來評價其安全性。通過對小鼠一般情況進行比較(實驗前體質(zhì)量和終止實驗時體質(zhì)量比較)，各組之間無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。研究小鼠每日體質(zhì)量變化和每日攝食量變化，與生理鹽水對照組比較，無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。分析小鼠總食物利用率，各組數(shù)值之間大致一致，通過統(tǒng)計分析，無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。將小鼠解剖后，取其各臟器進行比較，計算其臟器系數(shù)，無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。通過谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST/GOT)測試盒和谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT/GPT)測試盒測定，計算各組谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST/GOT)活力和谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT/GPT)活力，無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。通過急性實驗，對小鼠進行觀察，通過記錄體質(zhì)量、攝食量，并觀察其臟器的病理變化和臟器系數(shù)，對其生化指標(biāo)進行測定，從各個方面與對照組進行對比研究，均無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，可以得出結(jié)論，其臨床成人用藥量100倍劑量對小鼠無明顯急性毒性，通過急性毒性原理，麻黃定喘湯和鹿茸大補湯安全性較高，臨床中可以適量使用。但是由于兩方在臨床用藥中的有效性和特殊性，日后仍需通過實驗研究評價其慢性毒性，綜合評價其安全毒性。

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