一對新生華南虎胚胎發(fā)育不良死亡的案例分析

任小冬，李石洲，雷勝橋，劉力軍，李秋明

（廣東粵北華南虎省級自然保護(hù)區(qū)管理處，韶關(guān) 512023）

0 引言

華南虎（Panthera tigris amoyensis）又稱中國虎，為我國特有虎亞種，被列為國家Ⅰ級保護(hù)野生動物，IUCN將其瀕危等級劃分為極危（CR），亦被認(rèn)為是“最優(yōu)先需要國際保護(hù)的動物”[1]。我國在20世紀(jì)50～60年代，先后從野外捕獲到18只華南虎，其中6只（2雄4雌）有繁殖記錄，現(xiàn)全國各地圈養(yǎng)的華南虎都是這6頭繁殖的后代。由于圈養(yǎng)華南虎處于高度近親繁殖，遺傳多樣性下降，幼虎免疫力差，成活率低，加上受飼養(yǎng)條件和飼養(yǎng)技術(shù)的影響，使得整個(gè)種群發(fā)展緩慢[2]。2017年1月，廣東某華南虎繁育研究基地一頭華南虎產(chǎn)下的2只虎崽，先后于10日齡和25日齡時(shí)發(fā)病，采取一系列治療措施后幼虎仍是醫(yī)治無效死亡。經(jīng)尸體解剖發(fā)現(xiàn)，2只幼虎的膽囊均是穿過肝臟長出，幾乎整個(gè)膽囊被肝臟包裹。綜合分析認(rèn)為，其主要原因是配對雄性虎種是高度近親繁殖的后代，存在遺傳基因缺陷，導(dǎo)致幼虎發(fā)育不良而死亡。幼虎在產(chǎn)道死亡（死胎）的案例較多，膽囊被肝臟包裹，導(dǎo)致幼虎死亡的現(xiàn)象未見有過報(bào)導(dǎo)。因此，研究華南虎遺傳多樣性，建立譜系管理體系，合理配對繁殖，對發(fā)展壯大華南虎種群具有重要意義。

1 材料與臨床癥狀

1.1 新生幼虎情況

本文討論的2只幼虎為一胎2只新生華南虎，于2017年1月9日出生，父親譜系號521，母親譜系號528，近交系數(shù)為0.4。本文將2只幼虎分為1號幼虎和2號幼虎。1號幼虎性別為雄性，體重1.21 kg，全長45 cm，尾長14 cm，頭長8 cm，后肢7.5 cm，胸圍25 cm；2號幼虎性別為雌性，體重1.19 kg，全長46 cm，尾長15 cm，頭長7 cm，，后肢7 cm，胸圍23 cm。2只幼虎出生后精神狀態(tài)良好，不時(shí)爬動并有尖叫聲，睡眠充足；毛色有光澤松軟，毛發(fā)略短，呈淡黃色，虎斑黃底黑紋條理清晰；臍帶咬斷部位適合并已結(jié)痂，四肢及關(guān)節(jié)活動良好，鼻腔濕潤，眼睛緊閉，口腔潔凈無異味，耳朵外觀正常，尾巴長度適中。

1.2 育幼方法

因當(dāng)?shù)?月份天氣潮濕陰冷，1月11日將母虎隔離開來，2只小虎崽取出在實(shí)驗(yàn)室專用育嬰房進(jìn)行人工哺育。采用新生嬰兒專用恒溫育嬰箱進(jìn)行24 h監(jiān)護(hù)，育嬰箱溫度設(shè)定在28～30℃，相對濕度設(shè)定在60%。選用美國KMR幼貓專用奶粉進(jìn)行人工育幼飼喂，奶粉濃度為1∶4～1∶9進(jìn)行沖調(diào)，從每天哺乳8次，逐步增加奶量和濃度，減少哺乳次數(shù)，最后達(dá)到1 d哺乳2次[3]。由于幼虎剛出生時(shí)雙眼未睜、不能獨(dú)立排便排尿，在野外母虎會不時(shí)舔舐幼崽會陰部刺激排便和排尿，人工育幼時(shí)需用紗布蘸拭溫水，輕擦幼虎肛周，刺激幼虎排便排尿。發(fā)病前2只幼虎吃食表現(xiàn)良好，便形條狀，睡覺和活動正常。

1.3 臨床癥狀

2只幼虎于1月19日（10日齡）同時(shí)發(fā)現(xiàn)精神萎靡，全身無力，腹部有明顯臌脹，睡眠時(shí)間長，甚至一直處于睡眠狀態(tài)，呼吸較急促，每分鐘約60余次，但未發(fā)現(xiàn)有喘氣情況，食欲較差，體溫36.3℃，血常規(guī)檢查中血紅蛋白含量偏高，糞便不成形，尿液較清澈，尿常規(guī)檢查中白細(xì)胞、蛋白質(zhì)略高。2只幼虎喂養(yǎng)10 d體重沒有明顯增加，疑似有營養(yǎng)吸收功能障礙。晚上偶爾會起來活動，食量有少許增加，尿液呈淡黃色，但頭部常下垂并有磨蹭現(xiàn)象，常往角落鉆，并有用前爪抓撓頭部現(xiàn)象，疑似頭疼，食欲未好轉(zhuǎn)。1月20日晚8點(diǎn)時(shí)1號幼虎病情惡化，抱起時(shí)已經(jīng)全身癱軟無力，呼吸微弱，時(shí)不時(shí)出現(xiàn)全身抽搐，有似口水粘液流出，后腳偶有抽動。2月4日（25日齡）早上10點(diǎn)左右2號雌性幼虎再次發(fā)病，主要癥狀表現(xiàn)為全身無力，呼吸急促每分鐘約65次，心跳每分鐘約130次。雌性幼虎喂養(yǎng)25 d后體重1.22 kg，同樣沒有明顯增加，結(jié)合1號雄性幼虎的情況基本可以確認(rèn)2只幼虎都有營養(yǎng)吸收功能障礙。

1.3.1 血液檢查

經(jīng)過血液檢測分析，白細(xì)胞計(jì)數(shù)略高于正常水平，血紅蛋白、平均紅細(xì)胞體積、平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量、平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度都顯示偏高，表示幼虎有輕微感染和脫水的可能。1號雄性幼虎血液檢測結(jié)果見表1，2號雌性幼虎未采到血樣故無檢測結(jié)果。

表1 1號幼虎血液檢測結(jié)果

1.3.2 尿液檢查

取雌雄2只幼虎的尿液進(jìn)行檢測分析，白細(xì)胞都顯示為弱陽性，泌尿系統(tǒng)可能有細(xì)菌感染。蛋白質(zhì)分別顯示陽性+1和弱陽性，顯示幼虎可能有腎臟疾病或其它可引起尿蛋白的全身性疾病。隱血都顯示陰性但檢測有微弱含量，維C都顯示陽性。檢測結(jié)果見表2。

表2 2只幼虎的尿液檢查結(jié)果

2 臨床治療

2.1 治療方法

首先用抗病毒藥物進(jìn)行靜脈和皮下注射，抑制肺炎以及胃腸道感染，及時(shí)補(bǔ)充電解質(zhì)緩解脫水；在控制并發(fā)感染的基礎(chǔ)上，進(jìn)行護(hù)肝、調(diào)理腸胃機(jī)能，以促進(jìn)幼虎體質(zhì)恢復(fù)[4]。

2.1.1 藥物治療

1月19日（10日齡）發(fā)現(xiàn)2只幼虎精神萎靡，不喜活動，爬行能力不強(qiáng)，食欲較差，嗜睡；糞便不成型，呈稀狀并伴有氣泡，偶有血絲從中發(fā)現(xiàn)，腹部臌脹。1號雄性幼虎病情特征明顯，腹部臌脹特別嚴(yán)重。經(jīng)過專家會診，確定了以增加能量，保證幼虎體溫和心肺等各項(xiàng)機(jī)能運(yùn)行正常，使用抗生素抑制胃腸道細(xì)菌，并補(bǔ)充電解質(zhì)防止脫水。

1號雄性幼虎靜脈用藥：（1）能量合劑：ATP1 mL，維生素C1 mL，肌酐0.5 mL，葡萄糖100 mL；（2）抗生素：輔酶A30單位，注射用氨芐西林1 mL；（3）補(bǔ)水：復(fù)方氯化鈉50 mL。皮下用藥：拜有利0.3 mL?？诜盟帲嚎铺貕? mL/次，1日3次。

2號雌性幼虎因血管細(xì)小無法靜脈用藥，皮下注射拜有利0.2 mL?？诜盟帲嚎铺貕? mL/次，1日3次。用藥后2號幼虎精神狀態(tài)稍好，嗜睡，呼吸平穩(wěn)有序，腹部臌脹未消退，食欲有所好轉(zhuǎn)。

2.1.2 輔助治療

喂奶后進(jìn)行至少半個(gè)小時(shí)的腹部按摩。首先讓幼虎自然側(cè)躺在育嬰箱，用手在肚臍附近順時(shí)針按摩100圈，力度可根據(jù)按摩時(shí)幼虎反應(yīng)適當(dāng)調(diào)節(jié)，然后再繞逆時(shí)針按摩100圈。在幼虎精神不佳時(shí)，喂奶后人工增加活動量，使其進(jìn)行適量的活動，以促進(jìn)胃腸道蠕動，增加消化系統(tǒng)活力。

2.2 治療結(jié)果

2.2.1 雄性1號幼虎

幼虎用藥治療第2天精神狀態(tài)稍有好轉(zhuǎn)，偶爾會來回爬動，但腹部臌脹未有明顯緩解。第3天幼虎病情突然惡化，呼吸微弱，全身癱軟無力，經(jīng)搶救無效死亡，存活時(shí)間13 d。

2.2.2 雌性2號幼虎

幼虎經(jīng)治療持續(xù)7 d后，精神狀態(tài)稍好，經(jīng)常會來回爬動，腹部臌脹有明顯緩解。2月4日（25日齡）病情再次惡化，早晨喂奶時(shí)發(fā)現(xiàn)幼虎全身癱軟無力，心跳維持在較高水平（120～150次/min），呼吸較為急促，食欲廢絕，幾乎不起身活動，偶爾出現(xiàn)全身抽搐，經(jīng)過搶救無效于當(dāng)天中午死亡，存活時(shí)間27 d。

3 解剖結(jié)果

為對幼虎死亡原因進(jìn)行研究，分別對2只幼虎進(jìn)行了解剖。兩只幼虎均四肢正常，無明顯皮外傷或感染，毛發(fā)柔順?biāo)绍洠厣秃谏嚅g，肚皮處毛色主要為白色有光澤，口腔、鼻腔未發(fā)現(xiàn)異物。打開腹腔對主要內(nèi)臟器官進(jìn)行逐一解剖檢查，兩只幼虎的心臟和肺臟均未發(fā)現(xiàn)異?；虿∽儭５珒芍挥谆⒌哪懩揖桓闻K包裹且從肝葉正中漏出，胃均有不同程度的發(fā)育不良，腎臟分別有腫大和充血的情況。

3.1 肝膽器官發(fā)育

主體器官位于腹腔前部，分左右兩葉，紅褐色，膽囊從肝葉正中露出，從肝葉后面觀察膽囊包裹在左側(cè)肝葉中間（見圖1、圖2）。2只幼虎的肝臟與膽囊的相對位置基本一致，且膽囊均被肝臟包裹，由此認(rèn)為該癥狀為遺傳型病理性表現(xiàn)。

圖1 1號幼虎肝臟正面

圖2 1號幼虎肝臟背面

3.2 消化系統(tǒng)

將消化管至大腸末端的部分取出、展開，發(fā)現(xiàn)兩只幼虎的胃都有明顯臌脹。1號雄性幼虎的胃壁薄至透明（見圖3），刺破后有刺鼻氣體和少量白色奶狀液體溢出；2號雌性幼虎的胃壁較?。ㄒ妶D4），刺破后有少量氣體，大腸和小腸未見明顯病理變化。

圖3 1號虎的胃（透明狀）

圖4 2號虎的胃

3.3 沁尿系統(tǒng)

用鑷子提起后葉尾端的粘膜，用手術(shù)刀刀柄小心將腎與體壁分離，取出腎?？擅黠@觀察出1號幼虎腎臟稍有腫大（見圖5），2號幼虎腎臟呈暗紅，稍有充血（見圖6）。2只幼虎的膀胱均未發(fā)現(xiàn)有明顯病理變化。

圖5 1號幼虎的腎臟

圖6 2號幼虎的腎臟

4 討論與分析

4.1 病理學(xué)分析

2只新生幼虎初期體重增長明顯，但發(fā)病后至死亡體重幾乎沒有增加，2只幼虎的病癥和死亡原因具有某些共性。從解剖情況來看，2只幼虎的胃透明呈氣球狀，存在著一定程度的病變，說明幼虎在營養(yǎng)吸收方面存在著嚴(yán)重的問題。此外，2只幼虎的肝臟與膽囊的位置有著同樣的畸形變異，這種遺傳型病理性表現(xiàn)有可能會影響膽汁輸出，導(dǎo)致幼虎消化和營養(yǎng)吸收不良，但這種可能也不能定性為幼虎死亡的直接原因。本文作者認(rèn)為：造成華南虎幼虎死亡主要是由于幼虎體質(zhì)孱弱，機(jī)體免疫力較差，在人工哺育過程中可能受到感染，引發(fā)幼虎胃腸道系統(tǒng)疾病系列炎癥反應(yīng)，造成多器官功能障礙，最終導(dǎo)致幼虎死亡。因此，在人工哺育過程中，應(yīng)選擇適宜奶粉，保持育幼場所干凈衛(wèi)生，做好用器消毒，減少人為接觸，防止人為因素造成幼虎死亡。

4.2 遺傳學(xué)分析

廣義的遺傳多樣性是指地球上所有生物所攜帶的遺傳信息的總和。但一般所指的遺傳多樣性是指種內(nèi)的遺傳多樣性，即種內(nèi)個(gè)體之間或一個(gè)群體內(nèi)不同個(gè)體的遺傳變異總和[6]。遺傳多樣性（Genetic diversity）是生物多樣性的核心，保護(hù)生物多樣性最終是要保護(hù)其遺傳多樣性，因?yàn)橐粋€(gè)物種的穩(wěn)定性和進(jìn)化潛力依賴其遺傳多樣性，而物種的經(jīng)濟(jì)和生態(tài)價(jià)值也依賴其特有的基因組成[6]。經(jīng)過華南虎譜系信息查詢，本文討論的521♂虎種，顯示其父本348♂與母本394♀為父女關(guān)系，配對近交系數(shù)為0.6，屬于高度近親繁殖，導(dǎo)致521♂出生后尾巴較短，存在遺傳缺陷。從配對情況來看，近年來521♂分別與488♀和528♀配對，近交系數(shù)均為0.4，配對組合良好。但從配對繁殖結(jié)果來看，521♂與488♀共交配3次，受孕1次，受孕率33.3%，產(chǎn)仔1只，出生時(shí)為死胎；521♂與528♀共交配10次，受孕4次，受孕率40%，共產(chǎn)仔5只，其中2只死胎，1只流產(chǎn)，2只器官發(fā)育不良，幼虎成活率為0。從交配過程發(fā)現(xiàn)，2只與521♂配對的母虎，發(fā)情欲望強(qiáng)列，主動性和配合能力較強(qiáng)，而521♂表現(xiàn)被動，日交配次數(shù)較少，應(yīng)對交配能力表現(xiàn)較差，這些是否與521♂遺傳多樣性下降或不穩(wěn)定有關(guān)需要作進(jìn)一步研究。

遺傳基因漂變是指當(dāng)一個(gè)種群中的生物個(gè)體的數(shù)量較少時(shí)，下一代的個(gè)體容易因?yàn)橛械膫€(gè)體沒有產(chǎn)生后代，或是有的等位基因沒有傳給后代，而和上一代有不同的等位基因頻率。一個(gè)等位基因可能（在經(jīng)過一個(gè)以上的世代后）因此在這個(gè)種群中消失，或固定成為唯一的等位基因。這種現(xiàn)象就叫”遺傳基因漂變”。一般情況下，族群的生物個(gè)體的數(shù)量越少，族群中就越容易發(fā)生遺傳基因漂變。它和選擇、突變、近親繁殖等等都是影響等位基因頻率的因素[7]。結(jié)合全國華南虎的情況來看，人工圈養(yǎng)的華南虎是一個(gè)高度近親繁殖的延續(xù)種群，華南虎的遺傳基因漂變程度較高，遺傳多樣性減退嚴(yán)重，導(dǎo)致華南虎繁殖力不斷下降，抗逆性差，死胎、流產(chǎn)率增加，有些個(gè)體出現(xiàn)行為異常、交配障礙、不孕不育等現(xiàn)象，影響了華南虎種群的發(fā)展。

4.3 總結(jié)及建議

本文討論了導(dǎo)致2只新生幼虎死亡的病理學(xué)和遺傳學(xué)原因，發(fā)現(xiàn)華南虎在繁育研究中遇到最嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)是種群建立者數(shù)量極少（僅6只），造成現(xiàn)有的華南虎種群已經(jīng)處于高度近親繁殖，種群平均近交系數(shù)接近0.4，所以要堅(jiān)持近交系數(shù)小于等于0.4的華南虎才能配對的原則，才能優(yōu)化華南虎種群質(zhì)量，保護(hù)華南虎遺傳多樣性。華南虎是食肉目的大型貓科動物，其性情兇猛，飼養(yǎng)難度大、成本高，長期的圈養(yǎng)造成現(xiàn)有華南虎缺乏鍛煉，造成體質(zhì)孱弱、免疫力低下?；蜻z傳缺陷導(dǎo)致各種顯性和隱性的遺傳性疾病成為其擴(kuò)大種群的嚴(yán)重障礙，也是華南虎死胎率高和新生幼虎成活率低下的重要原因。因此，建議各華南虎飼養(yǎng)單位應(yīng)該通力合作，堅(jiān)持華南虎近交系數(shù)小于0.4的配對原則，采取更多防止和減輕近交衰退的措施。在日常飼養(yǎng)中應(yīng)滿足其營養(yǎng)需要，特別是維生素和微量元素等營養(yǎng)一旦失衡，就無法保證華南虎的健康。進(jìn)行園區(qū)豐容，給華南虎創(chuàng)造良好的生活環(huán)境，擴(kuò)大活動空間有利于華南虎的身體健康。建議設(shè)立華南虎項(xiàng)目基金，鼓勵(lì)進(jìn)行華南虎繁育相關(guān)研究，有效解決華南虎遺傳多樣性問題。

[1] 李石洲，鄒文軍．半野化狀態(tài)下華南虎的繁育技術(shù)研究[J]．廣東林業(yè)科技，2012，28（4）：40-43．

[2] 陳連潮，李石洲．半野化條件下華南虎繁殖行為研究[J]．林業(yè)與環(huán)境科學(xué)，2016，32（5）：74-76．

[3] 李石洲，雷勝橋．幼齡華南虎三種哺育方法結(jié)果初報(bào)[J]．獸類學(xué)報(bào)，2013，33（1）：90-93．

[4] 李石洲，陳斌．華南虎幼虎肺部感染的診斷和治療[J]．野生動物，2012，33（4）：205-207．

[5] 李石洲，蔡勤輝．華南虎繁育技術(shù)[M]．北京：中國科學(xué)技術(shù)出版社，2012．

[6] 沈浩，劉登義．遺傳多樣性概述[J]．生物學(xué)雜志，2001，6（3）：92-96．

[7] 沈顯生．生命科學(xué)概論[M]．北京：科學(xué)出版社，2007．