宮頸鱗癌及CIN中FOXP3的表達(dá)及其意義

袁利

（遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院婦科 貴州 遵義 563000）

宮頸癌在全球婦女癌癥死亡率中居第二位，也是與病毒感染密切相關(guān)的癌癥之一。目前認(rèn)為，免疫逃逸是腫瘤的發(fā)生發(fā)展的重要機(jī)制，而越來越多的證據(jù)表明CD4+CD25+Treg在腫瘤免疫逃逸中扮演了重要角色。叉樣頭轉(zhuǎn)錄因子3（forkheadbox protein 3，F(xiàn)OXP3）是CD4+CD25+Treg的特異性標(biāo)志，并在其分化發(fā)育及介導(dǎo)的腫瘤免疫逃逸中發(fā)揮關(guān)鍵作用。本研究意在探討FOXP3在宮頸癌及癌前病變中的表達(dá)及其意義。

1.材料與方法

1.1 標(biāo)本采集

收集2011年10月—2012年6月首次在遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院婦科門診接受宮頸活檢患者共67例，經(jīng)遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科確診宮頸鱗癌26例（Ⅰ級(jí)5例，Ⅱ級(jí)14例，Ⅲ級(jí)7例），癌前病變21例，慢性宮頸炎20例。

1.2 試劑

鼠抗人FOXP3單克隆抗體（工作濃度為1：50）購(gòu)自美國(guó)abcam公司；Envision試劑盒及其他配套試劑均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3 方法

將病理科存檔蠟塊作4μm厚連續(xù)切片，行HE染色重新閱片進(jìn)一步明確診斷，Envision免疫組化染色。免疫組化實(shí)驗(yàn)過程嚴(yán)格按照說明書操作步驟進(jìn)行，DAB顯色，蘇木精復(fù)染。用淋巴結(jié)組織染色作陽(yáng)性切片對(duì)照。組織抗原修復(fù)采用高壓處理。

1.4 結(jié)果判斷

FOXP3蛋白陽(yáng)性信號(hào)染色呈棕黃色或棕褐色，定位于細(xì)胞核。免疫組織化學(xué)染色強(qiáng)度按如下標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分：著淺黃色為1分，著棕黃色為2分，著棕褐色為3分。隨機(jī)選擇10個(gè)高倍視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，共計(jì)1000個(gè)細(xì)胞，計(jì)算出每張切片上的陽(yáng)性表達(dá)百分比(公式為：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù)@100%)。陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)10%～30%為2分，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)31%～50%為3分，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＞51%為4分；無明顯陽(yáng)性細(xì)胞或不論染色強(qiáng)度只要陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜10%為陰性(-)，3分為(+)，4～5分為(6)，6～7分為(7)，+、6、7均歸為陽(yáng)性表達(dá)[4]。綜合染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞占總細(xì)胞數(shù)的百分比進(jìn)行半定量處理。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所得數(shù)據(jù)采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料采用等級(jí)相關(guān)秩和檢驗(yàn)，兩者之間的相關(guān)性采用spearman相關(guān)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 觀察切片

FOXP3陽(yáng)性反應(yīng)呈棕黃色或棕褐顆粒，表達(dá)于淋巴細(xì)胞，定位在細(xì)胞核，集中在癌巢周圍的間質(zhì)中，宮頸鱗癌及CIN細(xì)胞中無表達(dá)。

2.2 慢性宮頸炎組織中可見FOXP3呈弱表達(dá)或無表達(dá)，宮頸鱗癌及CIN中見FOXP3呈強(qiáng)表達(dá)；宮頸鱗癌組織中FOXP3的表達(dá)高于CIN組織及慢性宮頸炎組織（P＜0.05），CIN組織中FOXP3表達(dá)高于慢性宮頸炎組（P＜0.05）。

2.3 尚不能認(rèn)為宮頸鱗癌中FOXP3的表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)及年齡無關(guān)（P＞0.05）。(見表1、表2)。

表1 FOXP3在各宮頸組織中的表達(dá)情況Tab.1 The results of FOXP3 expression in different group

表2 FOXP3在宮頸癌組織中陽(yáng)性表達(dá)與病理特征的關(guān)系Tab.2 In cervical squamous carcinoma, the comparision of the positive expression of FOXP3 in different histological grade and age

3.討論

目前，已在動(dòng)物模型及多種人類惡性腫瘤中檢測(cè)到FOXP3的表達(dá)增加，且數(shù)目與腫瘤的進(jìn)展程度和預(yù)后、生存率等呈負(fù)相關(guān)[1]。去除Tregs或封閉其抑制功能，可增強(qiáng)抗腫瘤免疫反應(yīng)[2]。FOXP3在某些惡性腫瘤中除表達(dá)于CD4+CD25+Treg外，其在腫瘤細(xì)胞上也有表達(dá)，如在胰腺導(dǎo)管細(xì)胞癌[3]、黑色素瘤[4]、食道鱗癌[5]等腫瘤的癌細(xì)胞中，均有Foxp3陽(yáng)性表達(dá)。同時(shí)在肺癌、乳腺癌、結(jié)腸癌等細(xì)胞株上也觀察到有Foxp3的表達(dá)[6]。國(guó)內(nèi)在對(duì)皮膚癌及癌前病變中FOXP3的表達(dá)情況進(jìn)行研究時(shí)發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)oxp3+Tregs和Foxp3在皮膚癌前病變和惡性腫瘤中均有表達(dá)，但在正常表皮上未見表達(dá)。且Foxp3在皮膚腫瘤中的陽(yáng)性率與病情的惡性程度呈現(xiàn)相關(guān)性[7]。

目前宮頸癌中FOXP3表達(dá)特異性定位于胞漿或薄膜上及定位于細(xì)胞核均有報(bào)道，本實(shí)驗(yàn)與后者相符，F(xiàn)OXP3在宮頸鱗癌中僅表達(dá)于淋巴細(xì)胞，癌細(xì)胞中無表達(dá)，定位于細(xì)胞核。現(xiàn)有研究表明，F(xiàn)OXP3在慢性宮頸炎、CIN及宮頸癌中表達(dá)逐漸加強(qiáng)，本實(shí)驗(yàn)也提示宮頸癌中FOXP3的表達(dá)與其余兩組存在差異（P＜0.05）。通過檢測(cè)宮頸鱗癌局部FOXP3表達(dá)增強(qiáng)，可能提示其局部CD4+CD25+Treg數(shù)量增多或功能加強(qiáng)，這能使機(jī)體局部的免疫抑制功能加強(qiáng)，使其處于一種高度的免疫耐受狀態(tài)，導(dǎo)致腫瘤能在一定程度上逃避免疫攻擊。

在對(duì)CIN中局部免疫的研究中也發(fā)現(xiàn)，CINⅠ與CINⅡ之間的變化無統(tǒng)計(jì)意義，而CINⅢ與CINⅠ、CINII比較有明顯差異。對(duì)FOXP3在CIN中的表達(dá)進(jìn)行研究時(shí)發(fā)現(xiàn)，宮頸炎、CINΙ級(jí)及CINⅡ級(jí)各組病變組織中Foxp3 表達(dá)無差異（P＞0.05），而CINⅢ級(jí)與其他各組間Foxp3表達(dá)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）[9]。

[1]Hiraoka N，Onozato K，Kosuge T，et al.Prevalence of FOXP3+ regulatory T cells increases during the progression of pancreatic ductal adenocarcinoma and its premalignant lesions[J].Clin Cancer Res，2006，12（18）:5423-5434.

[2]Nagai H，Horikawa T，Hara I，et al.In vivo elimination of CD25+ regulatory T cells leads to tumor rejection of B16F-10 melanoma，when combined with interleukin-12 genetransfer[J].Exp Dermatol，2004，13（10）:613-620.

[3]Sebastian Hinz，Laia Pagerols-Raluy，Hans-Heinrich Oberg，et al. Foxp3 expression in pancreatic carcinoma cells as a novel mechanism of immune evasion in cancer[J].Cancer Res，2007，67（17）:8344-8350.

[4]Lisa M.Eber，Bee Shin Tan，Judy Browning，et al.The Regulatory Tcell-associated transcription factor FoxP3 is expressed by tumor cells [J].Cancer Res，2008，68（8）:3001-3009.

[5]Xue L，Lu H Q，He J，et al.Expression of FOXP3 in esophagial squamous cell carcinoma relating to the clinical data[J].Dis Esophagus，2010，23（4）:340-346.

[6]Vaios Karanikas，Matthaios Speletas，Maria Zamanakou，et al.Foxp3 expression in human cancer cells[J].Journal of Translational Medicine，2008，6（1）:19.

[7]劉干，黃堒.皮膚鱗癌及癌前病變中Foxp3蛋白的表達(dá)[J].重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，36（6）：660-663.