香砂六君子湯對(duì)慢性萎縮性胃炎大鼠胃黏膜核因子—κB p65活化水平及其介導(dǎo)炎性級(jí)聯(lián)反應(yīng)的影響

成映霞 周語(yǔ)平 段永強(qiáng) 王強(qiáng) 楊亞楠 李蘭珍 楊曉軼 段云燕 杜娟 王慶勝

摘要：目的 觀察香砂六君子湯對(duì)脾胃虛弱型慢性萎縮性胃炎（CAG）大鼠胃黏膜組織病理改變、核因子-κB （NF-κB）p65活化水平及其介導(dǎo)的炎性因子腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素（IL）-1β、IL-8和IL-12表達(dá)的影響，探討其作用機(jī)制。方法 實(shí)驗(yàn)大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為空白組和造模組，采用綜合法制作脾胃虛弱型CAG大鼠模型，將成模大鼠隨機(jī)分為模型組、陽(yáng)性對(duì)照組和香砂六君子湯高、中、低劑量組?？瞻捉M和模型組予10 mL/（kg·d）蒸餾水灌胃，香砂六君子湯高、中、低劑量組分別予24、12、6 g/（kg·d）香砂六君子湯藥液灌胃，陽(yáng)性對(duì)照組予0.3 g/（kg·d）維酶素藥液灌胃，給藥120 d后檢測(cè)大鼠胃黏膜TNF-α、IL-1β、IL-8和IL-12含量，實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)大鼠胃黏膜組織NF-κB p65及下游炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-8、IL-12基因表達(dá)，Western blot檢測(cè)NF-κB p65蛋白表達(dá)。結(jié)果 與空白組比較，模型組大鼠一般生存狀況較差，病理顯示胃黏膜明顯變薄，腺體萎縮、排列稀疏而紊亂；胃黏膜組織NF-κB p65 mRNA和蛋白表達(dá)顯著升高（P<0.01），促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-8和IL-12含量及mRNA表達(dá)顯著升高（P<0.05，P<0.01）；與模型組比較，香砂六君子湯高劑量組大鼠一般生存狀況顯著改善，胃黏膜萎縮變薄等病理顯著改善，胃黏膜組織NF-κB p65 mRNA和蛋白表達(dá)顯著降低（P<0.05，P<0.01），TNF-α、IL-1β、IL-8和IL-12含量及mRNA表達(dá)顯著降低（P<0.05）。結(jié)論 香砂六君子湯可能通過(guò)下調(diào)NF-κB p65基因和蛋白表達(dá)，抑制促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-8和IL-12異常分泌而發(fā)揮保護(hù)胃黏膜的作用。

關(guān)鍵詞：香砂六君子湯；慢性萎縮性胃炎；核因子-κB p65；腫瘤壞死因子-α；白細(xì)胞介素-1β；白細(xì)胞介素-8；白細(xì)胞介素-12；大鼠

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2018.05.012

中圖分類號(hào)：R285.5 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1005-5304（2018）05-0050-06

Effects of Xiangsha Liujunzi Decoction on Activated Levels of NF-κB p65

and Inflammatory Cascade Reaction Mediated by NF-κB p65 of

Gastric Mucosa in Chronic Atrophic Gastritis Rats

CHENG Ying-xia1，2，3， ZHOU Yu-ping2， DUAN Yong-qiang2，3， WANG Qiang2，3， YANG Ya-nan4， LI Lan-zhen2，

YANG Xiao-yi1， DUAN Yun-yan2， DU Juan2， WANG Qing-sheng1

1. Key Laboratory of Pharmacology and Toxicology for TCM of Gansu Province， Lanzhou 730000， China；2. Gansu University of Chinese Medicine， Lanzhou 730000， China； 3. Key Laboratory of Traditional Chinese Herbs and Prescription Innovation and Transformation of Gansu Province， Lanzhou 730000， China； 4. Xian Jiaotong

University Health Science Center， Xi'an 710061， China

Abstract： Objective To observe the effects of Xiangsha Liujunzi Decoction on histopathological changes of gastric antrum， activated levels of NF-κB p65 in gastric mucosa and expression levels of inflammatory factors including TNF-α， IL-1β， IL-8 and IL-12 mediated by NF-κB p65 of chronic atrophic gastritis （CAG） rats with spleen-stomach deficiency syndrome； To discuss its mechanism of action. Methods The experimental rats were

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金（81260519、81760830）；甘肅省自然科學(xué)基金（1610RJZA063）；甘肅省中醫(yī)藥管理局資助項(xiàng)目（GZK-2014-73）；甘肅省中醫(yī)方藥挖掘與創(chuàng)新轉(zhuǎn)化重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)放基金（ZYFYZH-KJ-2016-006）

divided into blank group and model group according to the random number table method. The model of CAG rats with spleen-stomach deficiency syndrome was successfully duplicated by comprehensive method. And then the rats were randomly divided into model group， Xiangsha Liujunzi Decoction high-， medium- and low-dose groups and positive control group. The rats in blank and model groups were given 10 mL/（kg·d） distilled water， and Xiangsha Liujunzi Decoction high-， medium- and low-dose groups were given 24， 12， 6 g/（kg·d） Xiangsha Liujunzi Decoction respectively， the positive control group was treated with 0.30 g/（kg·d） vitamin enzyme. 120 days later， the levels of TNF-α， IL-1β， IL-8 and IL-12 in gastric mucosa were detected. Gene expression of NF-κB p65 in gastric mucosa and the above inflammatory factors were detected with real-time fluorescence quantitative PCR， and protein expression of NF-κB p65 was detected by Western blot. Results Compared with the blank group， the general living condition of the model rats was poor， and the pathological changes showed that the gastric mucosa became thinner， the glands were atrophic and its arrangement was sparse and disorder. The expression of NF-κB p65 mRNA and protein in gastric tissue significantly increased （P<0.01）， and the levels of TNF-α， IL-1β， IL-8 and IL-12 significantly increased （P<0.05， P<0.01）. Compared with model group， the normal survival status of the rats in Xiangsha Liujunzi Decoction high- and medium-dose groups was significantly improved， and the pathological changes of the gastric mucosal atrophy and other pathological changes were significantly improved. Gene and protein expression of NF-κB p65 in gastric tissues decreased significantly （P<0.05， P<0.01）， and mRNA and the contents of TNF-α， IL-1β， IL-8 and IL-12 decreased significantly （P<0.05）. Conclusion Xiangsha Liujunzi Decoction plays an important role in protecting the gastric mucosa by down-regulating the expression of NF-κB p65 gene and protein and inhibiting the abnormal secretion of proinflammatory cytokines TNF-α， IL-1β， IL-8 and IL-12.

Keywords： Xiangsha Liujunzi Decoction； chronic atrophic gastritis； NF-κB p65； TNF-α； IL-1β； IL-8； IL-12； rats

慢性萎縮性胃炎（chronic atrophic gastritis，CAG）病理機(jī)制之一在于胃黏膜慢性炎性級(jí)聯(lián)反應(yīng)放大和細(xì)胞增殖與凋亡失衡而造成胃黏膜持續(xù)損傷[1]。臨床應(yīng)用香砂六君子湯及其加減方治療CAG療效顯著[2]。前期研究顯示，香砂六君子湯可改善脾胃虛弱型CAG大鼠胃排空功能、促進(jìn)胃蛋白酶活性和胃壁細(xì)胞能量代謝相關(guān)酶活性以及胃黏膜分泌功能；并可調(diào)控白細(xì)胞介素（IL）-6/IL-10分泌平衡及上調(diào)熱休克蛋白70（HSP70）表達(dá)，下調(diào)低氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）基因和蛋白表達(dá)而保護(hù)胃黏膜[3-5]。另有研究表明，與細(xì)胞分化增殖相關(guān)的核因子（NF）-κB p65異?；罨⒄T導(dǎo)腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、IL-1β、IL-8和IL-12等炎性因子合成分泌水平增高，由此產(chǎn)生的炎性級(jí)聯(lián)放大反應(yīng)在誘發(fā)CAG胃黏膜細(xì)胞生理功能紊亂及病理變化中起重要作用[6-8]。本實(shí)驗(yàn)觀察CAG大鼠胃黏膜組織病理改變、NF-κB p65高表達(dá)而誘生的下游促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-8、IL-12基因和蛋白表達(dá)及香砂六君子湯的干預(yù)效應(yīng)，進(jìn)一步探討該復(fù)方干預(yù)CAG的作用機(jī)制。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 動(dòng)物

SPF級(jí)健康Wistar大鼠54只，雌雄各半，2月齡，體質(zhì)量（160±10）g，甘肅中醫(yī)藥大學(xué)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心，動(dòng)物合格證號(hào)SCXK（甘）2011-0001-0001010。飼養(yǎng)于甘肅中醫(yī)藥大學(xué)SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)室，室溫（23±2）℃，相對(duì)濕度45%～55%，自由攝食飲水。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處理遵守中國(guó)國(guó)家健康與醫(yī)學(xué)研究委員會(huì)動(dòng)物道德準(zhǔn)則。

1.2 藥物及制備

香砂六君子湯按人參∶白術(shù)∶茯苓∶陳皮∶姜半夏∶砂仁∶木香∶生姜∶炙甘草=6∶12∶12∶ 5∶6∶5∶2∶12∶4比例配制（上述飲片均購(gòu)自蘭州復(fù)興厚中藥材有限責(zé)任公司，并經(jīng)甘肅中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥生藥學(xué)教研室楊扶德教授鑒定合格），全方加10倍量蒸餾水浸泡2 h后，按常法煎煮2次，每次40 min，濾出藥液加熱濃縮至每1 mL藥液含原藥材2 g，冷卻后置于4 ℃冰箱保存?zhèn)溆?，使用時(shí)稀釋至所需濃度；維酶素片，新鄉(xiāng)恒久遠(yuǎn)藥業(yè)有限公司，0.2 g/片，批號(hào)20140108。

1.3 主要試劑及儀器

吲哚美辛，上海信誼黃河制藥有限公司；脫氧膽酸鈉，西格瑪奧德里奇上海貿(mào)易有限公司；乙醇，天津市富宇精細(xì)化工有限公司；氨水，白銀良友化學(xué)試劑有限公司；考馬斯亮蘭蛋白測(cè)定試劑盒，南京建成生物科技有限公司；TNF-α、L-1β、IL-8、IL-12試劑盒，杭州聯(lián)科生物技術(shù)有限公司；引物GAPDH、NF-κB p65、TNF-α、IL-1β、IL-8、IL-12，美國(guó)Gene Copoeia公司；Trizol試劑、反轉(zhuǎn)錄及qRT-PCR試劑盒，美國(guó)Promega Corporation公司；一抗NF-κB p65，美國(guó)ImmunoWay公司；辣根酶標(biāo)記山羊抗兔IgG，北京中杉金橋生物科技有限公司。HH-4數(shù)顯恒溫水浴箱，江蘇省金壇市友聯(lián)儀器研究所；Benchmark Plus酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀、BIOMATE 3S核酸蛋白測(cè)定儀、S1000TM反轉(zhuǎn)錄儀、Chemi DOC XRS+凝膠成像分析系統(tǒng)、CFX96TM Optics Module PCR儀，美國(guó)BIO-RAD公司。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 造模和分組

除空白組8只大鼠正常飼養(yǎng)不予造模外，其余大鼠參照文獻(xiàn)[9]方法，采用復(fù)合慢性損傷因素聯(lián)合造模。①60%乙醇，每3 d空腹灌胃1次，每次8 mL/kg；②20 mmol/L脫氧膽酸鈉灌胃，每次8 mL/kg，每日1次；③每日配制0.1%氨水作為大鼠日常飲用水自由飲用，記錄每日飲用量；④0.05%吲哚美辛灌胃，每次8 mL/kg，每日1次；⑤采用饑飽失常喂養(yǎng)法，2 d足量喂養(yǎng)，1 d禁食，連續(xù)造模40周。實(shí)驗(yàn)期間每2 d足量喂養(yǎng)并記錄飼料消耗量，每3 d測(cè)定體質(zhì)量增加量。待綜合法造模30周后，每隔1周隨機(jī)抽檢大鼠，取胃黏膜組織做病理檢查并判定胃黏膜萎縮病理變化，評(píng)價(jià)CAG模型大鼠胃黏膜萎縮病理形成后，將CAG大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為模型組、陽(yáng)性對(duì)照組和香砂六君子湯高、中、低劑量組（中藥高、中、低劑量組），每組8只。

2.2 給藥

中藥高、中、低劑量組每日分別給予24、12、6 g/kg 香砂六君子湯藥劑灌胃（相當(dāng)于60 kg成人劑量的12、6、3倍），陽(yáng)性對(duì)照組每日給予0.3 g/kg維酶素灌胃（相當(dāng)于60 kg成人劑量的6倍），等效劑量按人與動(dòng)物體型系數(shù)折算[10]，空白組和模型組每日給予等體積蒸餾水灌胃。給藥體積均為10 mL/kg，共120 d。

2.3 一般觀察

觀察并記錄各組大鼠活動(dòng)度、被毛色澤、糞便性狀并測(cè)定平均每日攝食量、平均每日體質(zhì)量增加量。

2.4 標(biāo)本采集與檢測(cè)

各組大鼠末次灌胃給藥后禁食不禁水24 h，測(cè)體質(zhì)量并用烏拉坦（1 g/kg）麻醉后全部殺檢。胃黏膜組織勻漿制備：低溫下快速剖取近胃竇黏膜組織，以冰冷生理鹽水沖洗，稱重后快速剪碎，置于勻漿器中，用組織重9倍生理鹽水勻漿，3500 r/min離心10 min，取上清液，置于4 ℃冰箱保存，按ELISA試劑盒說(shuō)明待測(cè)胃黏膜TNF-α、IL-1β、IL-8和IL-12含量。

2.5 qRT-PCR檢測(cè)胃黏膜組織核因子-κB p65、腫瘤壞死因子-α及白細(xì)胞介素-1β、8、12的基因表達(dá)

采用Trizol法提取總RNA，測(cè)定其OD260/OD280均在1.8～2.0之間，經(jīng)總RNA瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)符合純度要求，反轉(zhuǎn)為cDNA，以GAPDH作為內(nèi)參基因，反應(yīng)體系及參數(shù)依據(jù)GoTaq 2-Step RT-qPCR試劑盒說(shuō)明書(shū)設(shè)置，相同模板相同基因設(shè)3個(gè)復(fù)孔、6次平行實(shí)驗(yàn)，得到各擴(kuò)增反應(yīng)的Ct值。采用樣點(diǎn)擬合法分析結(jié)果得到目的基因和β-actin的Ct值，以β-actin為內(nèi)參，比較Ct值法計(jì)算相對(duì)表達(dá)量：ΔΔCt=（測(cè)試組目的基因Ct值-測(cè)試組內(nèi)參基因Ct值）-（對(duì)照組目的基因Ct值-對(duì)照組內(nèi)參基因Ct值），相對(duì)表達(dá)量為2-ΔΔCt。

2.6 Western blot檢測(cè)胃黏膜組織核因子-κB p65的蛋白表達(dá)

常規(guī)提取組織蛋白，BCA試劑盒進(jìn)行蛋白定量，20 μg/道上樣量進(jìn)行SDS-PAGE電泳，轉(zhuǎn)至PVDF膜后，5%牛血清白蛋白封閉后分別加入一抗。GAPDH一抗溶液（1∶700）配制：GAPDH一抗10 μL，牛奶封閉液7 mL；NF-κB p65一抗溶液（1∶750）配制：NF-κB p65一抗1 μL，封閉液7.5 mL。4 ℃搖床過(guò)夜，洗滌后加入HRP標(biāo)記羊抗兔二抗。辣根酶標(biāo)記山羊抗兔（1∶7500）二抗溶液配制：山羊抗兔二抗2 μL，牛奶封閉液15 mL。室溫孵育1 h，采用化學(xué)發(fā)光底物進(jìn)行化學(xué)發(fā)光，暗室曝光顯影，定影后用Bio-RAD Quantity one圖像分析軟件進(jìn)行掃描分析。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以—x±s表示，組間比較用方差分析，方差齊用S-N-K法比較，方差不齊用Tamhanes T2法比較。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

4 結(jié)果

4.1 一般狀況

空白組大鼠始終表現(xiàn)為反應(yīng)靈敏，活動(dòng)及攝食量均正常，體質(zhì)量正常增長(zhǎng)。模型組大鼠第6～8周后出現(xiàn)少食怠動(dòng)、消瘦倦臥、被毛稀疏失澤、反應(yīng)遲鈍、每日攝食量和體質(zhì)量增加均減緩等。各給藥組大鼠從給藥第10周開(kāi)始少食怠動(dòng)、消瘦倦臥、被毛稀疏失澤、反應(yīng)遲鈍逐漸減輕或消失，活動(dòng)度及每日攝食量趨于正常，尤其以中藥高劑量組大鼠一般生存狀況改善明顯。

4.2 病理變化

空白組大鼠胃黏膜上皮細(xì)胞、腺體排列規(guī)整，大小及形狀較一致，黏膜固有層未見(jiàn)炎性細(xì)胞或僅見(jiàn)少量淋巴細(xì)胞及嗜酸性細(xì)胞散在，無(wú)充血、水腫及腸上皮化生；模型組大鼠胃黏膜明顯變薄，甚至可見(jiàn)胃黏膜全層萎縮，腺體排列稀疏而紊亂，大量腺體腸化，部分腺體增生性囊狀擴(kuò)張，黏膜及黏膜下層炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，可見(jiàn)顯著腸化病理改變；中藥高劑量組大鼠胃黏膜輕度變薄，腺體排列較為整齊，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)不明顯，無(wú)腸化病理改變；中藥中劑量組大鼠胃黏膜輕度變薄，腺體排列稀疏，排列較規(guī)整，可見(jiàn)少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，偶見(jiàn)散在杯狀細(xì)胞，可見(jiàn)腸化病理改變；中藥低劑量組大鼠胃黏膜輕度變薄，腺體排列稀疏而稍顯紊亂，少量腺體擴(kuò)張，少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，可見(jiàn)腸化病理改變；陽(yáng)性對(duì)照組大鼠胃黏膜較薄，腺體數(shù)量減少，排列整齊，大量腺體增生性擴(kuò)張，少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，未見(jiàn)明顯腸化。結(jié)果見(jiàn)圖1。

4.3 香砂六君子湯對(duì)模型大鼠胃黏膜組織核因子-κB p65基因和蛋白表達(dá)的影響

與空白組比較，模型組大鼠胃黏膜組織NF-κB p65基因和蛋白表達(dá)均顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；與模型組比較，中藥高劑量組大鼠胃黏膜組織NF-κB p65基因和蛋白表達(dá)均顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05，P<0.01）。結(jié)果見(jiàn)表1、圖2。

4.4 香砂六君子湯對(duì)模型大鼠胃黏膜組織腫瘤壞死因子-α mRNA表達(dá)和含量的影響

與空白組比較，模型組大鼠胃黏膜組織TNF-α mRNA表達(dá)和含量均顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；與模型組比較，中藥高劑量組大鼠胃黏膜組織TNF-α mRNA表達(dá)和TNF-α含量均顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)果見(jiàn)表2。

4.5 香砂六君子湯對(duì)模型大鼠胃黏膜組織白細(xì)胞介素-1β mRNA表達(dá)和含量的影響

與空白組比較，模型組大鼠胃黏膜組織IL-1β mRNA表達(dá)和含量均顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與模型組比較，中藥高劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組大鼠胃黏膜組織IL-1β mRNA表達(dá)和含量均顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)果見(jiàn)表3。

4.6 香砂六君子湯對(duì)模型大鼠胃黏膜組織白細(xì)胞介素-8 mRNA表達(dá)和含量的影響

與空白組比較，模型組大鼠胃黏膜組織IL-8 mRNA表達(dá)和含量均顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；與模型組比較，中藥高劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組大鼠胃黏膜組織IL-8 mRNA表達(dá)和含量均顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05，P<0.01）。結(jié)果見(jiàn)表4。

4.7 砂六君子湯對(duì)模型大鼠胃黏膜組織白細(xì)胞介素-12 mRNA表達(dá)和含量的影響

與空白組比較，模型組大鼠胃黏膜組織IL-12 mRNA表達(dá)和含量均顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與模型組比較，中藥高劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組大鼠胃黏膜組織IL-12 mRNA表達(dá)和含量均顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05，P<0.01）。結(jié)果見(jiàn)表5。

5 討論

CAG屬中醫(yī)學(xué)“胃痞”范疇，香砂六君子湯是臨床治療脾胃虛弱，氣機(jī)阻滯而變生胃痞的效方。相關(guān)研究顯示，NF-κB p65異常活化及下游細(xì)胞因子如TNF-α、IL-1β和IL-6異常分泌或表達(dá)參與胃黏膜炎性反應(yīng)和級(jí)聯(lián)放大可加重胃黏膜損傷[1-3]，而香砂六君子湯是否通過(guò)調(diào)控上述效應(yīng)指標(biāo)異常表達(dá)而改善CAG胃黏膜損傷，這是本研究的重點(diǎn)。

NF-κB p65是多種組細(xì)胞內(nèi)最重要的核轉(zhuǎn)錄因子，激活后參與多種基因表達(dá)和調(diào)控，并在炎癥持續(xù)、氧化應(yīng)激、細(xì)胞增殖和凋亡等病理過(guò)程中發(fā)揮作用[11]。若NF-κB被激活后進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)，可與多種炎性因子啟動(dòng)子區(qū)域中κB序列結(jié)合，通過(guò)調(diào)控一系列炎性因子（TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8和IL-12等）轉(zhuǎn)錄、表達(dá)引起炎性反應(yīng)，而上述炎性因子又可進(jìn)一步促進(jìn)NF-κB活化而產(chǎn)生級(jí)聯(lián)反應(yīng)，從而使炎性反應(yīng)長(zhǎng)時(shí)間持續(xù)和病理?yè)p傷加重[12-13]。有關(guān)NF-κB與IL-1β、TNF-α級(jí)聯(lián)響應(yīng)效應(yīng)的研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)NF-κB活化后，可使機(jī)體細(xì)胞迅速產(chǎn)生IL-1β，刺激中性粒細(xì)胞引起炎癥介質(zhì)釋放，又進(jìn)一步促進(jìn)NF-κB活化； 同時(shí)IL-1β能夠刺激TNF-α、IL-8等其他細(xì)胞因子大量分泌，并形成級(jí)聯(lián)釋放而加重細(xì)胞炎癥反應(yīng)或造成組織損傷，而且NF-κB p65的活化水平可代表NF-κB的激活程度[14]。而TNF-α亦能增強(qiáng)自然殺傷細(xì)胞、輔助性T細(xì)胞及腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞的細(xì)胞毒性，釋放大量氧自由基和一氧化氮，同時(shí)誘導(dǎo)IL-1、IL-6、IL-8、IL-12等細(xì)胞因子大量分泌，從而加重細(xì)胞損害[15-16]。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與空白組比較，模型組大鼠一般生存狀況較差，胃黏膜組織NF-κB p65基因和蛋白表達(dá)均升高，TNF-α、IL-1β、IL-8和IL-12基因表達(dá)和分泌水平亦顯著升高，提示CAG胃黏膜損傷與NF-κB p65高表達(dá)及其活化水平活躍而誘生的促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-8和IL-12異常分泌產(chǎn)生的炎性級(jí)聯(lián)反應(yīng)有關(guān)；與模型組比較，中藥高劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組大鼠一般生存狀況顯著改善，胃黏膜組織NF-κB p65基因和蛋白表達(dá)均顯著降低，TNF-α、IL-1β、IL-8和IL-12基因表達(dá)和含量均顯著降低；且病理結(jié)果顯示，模型組大鼠胃黏膜明顯變薄，腺體萎縮、排列稀疏而紊亂病理改變，而中藥高劑量組大鼠胃黏膜萎縮、變薄等病理顯著改善，表明香砂六君子湯可通過(guò)下調(diào)NF-κB p65基因和蛋白的表達(dá)，進(jìn)而抑制促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-8和IL-12的合成分泌，減輕由此產(chǎn)生的炎性級(jí)聯(lián)放大反應(yīng)，從而發(fā)揮保護(hù)胃黏膜的作用。

參考文獻(xiàn)：

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（收稿日期：2017-08-14）

（修回日期：2017-09-20；編輯：華強(qiáng)）