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    日糧添加蛋氨酸對(duì)宮內(nèi)發(fā)育遲緩生長(zhǎng)豬腸道發(fā)育和抗氧化功能的影響

    2018-06-19 09:11:34蘇偉鵬應(yīng)志雄張禮根張莉莉
    食品科學(xué) 2018年11期
    關(guān)鍵詞:蛋氨酸空腸活力

    蘇偉鵬,張 昊,應(yīng)志雄,李 悅,張禮根,張莉莉,王 恬*

    (南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院,江蘇 南京 210095)

    胎兒宮內(nèi)發(fā)育遲緩(intrauterine growth retardation,IUGR)是圍產(chǎn)期的常見并發(fā)癥之一,臨床表現(xiàn)為胎兒初生體質(zhì)量低,各組織器官生長(zhǎng)發(fā)育受阻,高發(fā)病率和死亡率等[1-2]。流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn),IUGR會(huì)導(dǎo)致胎兒成年后發(fā)生代謝綜合征的風(fēng)險(xiǎn)升高,如高血壓、糖尿病和肥胖癥等[3]。據(jù)統(tǒng)計(jì),全球每年約有5%~10%的IUGR新生兒,IUGR已經(jīng)成為困擾人類醫(yī)學(xué)的一大難題[4]。腸道是營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化吸收的主要部位,同時(shí)也是外界抗原、微生物和病毒入侵的主要位點(diǎn)[5]。諸多研究表明,IUGR可引起機(jī)體氧化應(yīng)激及腸道黏膜損傷,導(dǎo)致腸道功能紊亂[6-8]。

    近年來,膳食氨基酸的臨床應(yīng)用在維持腸道健康和預(yù)防腸道疾病方面已受到廣泛關(guān)注[9]。蛋氨酸(methionine,Met)屬于含硫氨基酸,是人體的必需氨基酸之一[10]。研究發(fā)現(xiàn),蛋氨酸在促進(jìn)蛋白質(zhì)代謝、提供活性甲基、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能等方面具有重要作用[11-12]。同時(shí),體外實(shí)驗(yàn)表明,蛋氨酸可以緩解過氧化氫誘導(dǎo)的線粒體氧化損傷[13],具有潛在的抗氧化作用。Nkabyo等[14]報(bào)道,含硫氨基酸的缺乏會(huì)導(dǎo)致大鼠血漿和腸道黏膜中還原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽(reduced glutathione/oxidized glutathione,GSH/GSSG)的氧化還原狀態(tài)失衡。另外,缺乏含硫氨基酸會(huì)顯著抑制腸道黏膜生長(zhǎng),具體表現(xiàn)為腸道絨毛萎縮以及腸上皮細(xì)胞增殖減少[15]。蛋氨酸代謝產(chǎn)物半胱氨酸及其參與形成的GSH,在提高機(jī)體抗氧化防御能力以及維持腸道功能方面也發(fā)揮著積極作用[11,16]。因此,蛋氨酸作為食品營(yíng)養(yǎng)添加劑對(duì)于改善人體健康和維持腸道功能具有重要意義。

    但有關(guān)蛋氨酸緩解IUGR后代腸道損傷方面的報(bào)道較少,特別是在生長(zhǎng)發(fā)育迅速的關(guān)鍵階段。豬和人在腸道結(jié)構(gòu)、消化系統(tǒng)等方面均有較高的相似性,IUGR豬作為人類理想的動(dòng)物模型,對(duì)臨床治療IUGR后代腸道功能紊亂具有重要的參考意義[17]。因此,本研究以IUGR生長(zhǎng)豬為動(dòng)物模型,探討蛋氨酸對(duì)IUGR生長(zhǎng)豬腸道發(fā)育和抗氧化功能的影響,為改善IUGR后代腸道損傷提供新的思路,同時(shí)為蛋氨酸在食品營(yíng)養(yǎng)添加劑中的應(yīng)用提供參考依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    L-蛋氨酸(純度99%) 韓國(guó)希杰有限公司;蔗糖酶試劑盒、麥芽糖酶試劑盒、乳糖酶試劑盒、丙二醛(malondialdehyde,MDA)試劑盒、蛋白質(zhì)羰基(protein carbonyl,PC)試劑盒、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)試劑盒、谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)試劑盒、谷胱甘肽還原酶(glutathione reductase,GR)試劑盒、總谷胱甘肽(total glutathione,T-GSH)/GSSG試劑盒、總蛋白定量測(cè)定(二辛可寧酸(bicinchoninic acid,BCA)法)試劑盒 南京建成生物工程研究所;TRIzol試劑 美國(guó)英杰生命技術(shù)有限公司;mRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒、SYBR Green定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)試劑盒 寶生物工程(大連)有限公司。

    1.2 儀器與設(shè)備

    BSA224S-CW型分析天平 德國(guó)Sartorius公司;Bio-Gen Series PRO 200型勻漿機(jī) 美國(guó)PRO Scientific公司;5804R型臺(tái)式高速冷凍離心機(jī) 德國(guó)Eppendorf公司;DK-S24型電熱恒溫水浴鍋 上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司;T-6m型紫外-可見分光光度計(jì) 南京菲勒儀器有限公司;DW-25L262型醫(yī)用低溫保存箱青島海爾特種電器有限公司;Multiskan Go型全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀、8925型-80 ℃超低溫冰箱、實(shí)時(shí)熒光PCR儀美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司;ECLIPSE 80i型顯微鏡日本Nikon公司。

    1.3 方法

    1.3.1 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

    在體況相似、胎次接近、品種相同的30 頭母豬所產(chǎn)的新生仔豬中,每窩各挑選1 頭正常初生體質(zhì)量(normal birth weight,NBW)和2 頭IUGR新生仔豬(以初生體質(zhì)量接近群體平均值且小于0.5 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差的仔豬為NBW仔豬,以初生體質(zhì)量低于群體平均值2 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差的仔豬為IUGR仔豬[18-19]),所用仔豬全部為母豬。所有仔豬于21 日齡斷奶,30 頭NBW斷奶仔豬飼喂基礎(chǔ)(control,CON)日糧(NBW-CON組),60 頭IUGR斷奶仔豬隨機(jī)分成兩個(gè)處理組,分別飼喂基礎(chǔ)日糧(IUGR-CON組)和蛋氨酸日糧(IUGR-MET組),每個(gè)處理組6 個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)5 頭豬。實(shí)驗(yàn)期為84 d。日糧配制參照美國(guó)國(guó)家研究委員會(huì)(2012)豬的營(yíng)養(yǎng)需要[20],日糧配方和營(yíng)養(yǎng)水平見表1。實(shí)驗(yàn)豬飼養(yǎng)管理嚴(yán)格執(zhí)行衛(wèi)生防疫制度。

    表1 日糧配方和營(yíng)養(yǎng)水平Table 1 Composition and nutrient levels of the experimental diets%

    1.3.2 樣品采集

    實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí),每組的每個(gè)重復(fù)中挑選1 頭體質(zhì)量適中的實(shí)驗(yàn)豬,肌內(nèi)注射戊巴比妥鈉(50 mg/kg)麻醉后處以安樂死。迅速剖開腹腔,分離出空腸和回腸。在每段腸道中間分別取1.0 cm的腸段并用4%(質(zhì)量分?jǐn)?shù),下同)多聚甲醛固定。用手術(shù)剪剪開腸道,刮取腸道黏膜并裝入凍存管中,液氮速凍后置于-80 ℃超低溫冰箱保存。

    1.3.3 測(cè)定指標(biāo)

    1.3.3.1 腸道組織形態(tài)變化觀察

    從4%多聚甲醛固定液中取出腸道組織進(jìn)行常規(guī)石蠟包埋,蘇木精-伊紅染色,利用顯微成像系統(tǒng)對(duì)組織切片進(jìn)行觀察拍照。使用Image-Pro Plus軟件測(cè)量絨毛高度(villus height,VH)/μm、絨毛寬度(villus width,VW)/μm和隱窩深度(crypt depth,CD)/μm,并計(jì)算絨毛高度/隱窩深度比值(VH/CD)和絨毛表面積(villus surface area,VSA)/mm2,VSA根據(jù)下式計(jì)算[21]。

    1.3.3.2 腸道黏膜勻漿液制備與指標(biāo)測(cè)定

    稱取0.2 g左右腸道黏膜組織,按照1∶4(m/V)的比例加入預(yù)冷的生理鹽水,冰水浴條件下機(jī)械勻漿,然后在4 ℃下3 000 r/min離心10 min,取上清液(即20%腸道黏膜勻漿液),放置于-20 ℃冰箱保存待用。使用BCA法測(cè)定蛋白含量;腸道黏膜勻漿液中MDA含量采用硫代巴比妥酸法測(cè)定[22];PC含量采用2,4-二硝基苯肼法測(cè)定[23];SOD活力采用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定[24];GSH-Px活力[25]和GSSG含量[26]采用2-硝基苯甲酸法測(cè)定,GSH含量=T-GSH含量-2×GSSG含量;GR活力采用還原型輔酶Ⅱ法測(cè)定[27]。以上指標(biāo)的測(cè)定均嚴(yán)格按照產(chǎn)品說明書進(jìn)行操作。

    1.3.3.3 腸道黏膜相關(guān)基因mRNA相對(duì)表達(dá)量測(cè)定

    采用TRIzol試劑提取腸道黏膜組織總RNA,并按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書的方法和步驟進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。使用SYBR Green定量PCR試劑盒進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR(20 μL體系):cDNA 2 μL,上、下游引物各0.4 μL,SYBR Premix Ex Taq 10 μL,Rox Reference Dye 0.4 μL,超純水6.8 μL。反應(yīng)程序如下:95 ℃ 30 s;95 ℃ 5 s,60 ℃ 30 s,重復(fù)40 個(gè)循環(huán)。選擇β-actin作為內(nèi)參基因,采用2?ΔΔCt法計(jì)算各目的基因mRNA相對(duì)表達(dá)量。各目的基因引物序列見表2。

    表2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR引物序列Table 2 Primer sequences used in real-time PCR

    1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

    實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件中的單因素方差分析進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn),并采用Tukey法進(jìn)行多重比較,以P<0.05作為差異顯著。實(shí)驗(yàn)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 日糧添加蛋氨酸對(duì)IUGR生長(zhǎng)豬腸道絨毛形態(tài)的影響

    表3 日糧添加蛋氨酸對(duì)IUGR生長(zhǎng)豬腸道絨毛形態(tài)的影響Table 3 Effect of dietary methionine supplementation on villus morphology in the intestine of growing pigs with IUGR

    由表3可知,與NBW-CON組生長(zhǎng)豬相比,IUGR-CON組生長(zhǎng)豬空腸VH和VSA顯著降低(P<0.05),VW、CD和VH/CD值無顯著差異(P>0.05);回腸VH顯著降低(P<0.05),VW、CD、VH/CD值和VSA無顯著差異(P>0.05)。與IUGR-CON組生長(zhǎng)豬相比,IUGR-MET組生長(zhǎng)豬空腸VH顯著升高(P<0.05),VW、CD、VH/CD值和VSA無顯著差異(P>0.05);回腸絨毛形態(tài)無顯著差異(P>0.05)。與NBW-CON組生長(zhǎng)豬相比,IUGR-MET組生長(zhǎng)豬空腸和回腸絨毛形態(tài)均無顯著差異(P>0.05)。

    2.2 日糧添加蛋氨酸對(duì)IUGR生長(zhǎng)豬腸道二糖酶活力的影響

    表4 日糧添加蛋氨酸對(duì)IUGR生長(zhǎng)豬腸道二糖酶活力的影響Table 4 Effect of dietary methionine supplementation on disaccharidases activities in the intestine of growing pigs with IUGR U/mg pro

    由表4可知,與NBW-CON組生長(zhǎng)豬相比,IUGR-CON組生長(zhǎng)豬空腸二糖酶活力無顯著差異(P>0.05);回腸蔗糖酶和麥芽糖酶活力顯著降低(P<0.05),乳糖酶活力無顯著差異(P>0.05)。與IUGR-CON組生長(zhǎng)豬相比,IUGR-MET組生長(zhǎng)豬空腸二糖酶活力無顯著差異(P>0.05);回腸麥芽糖酶活力顯著升高(P<0.05),蔗糖酶和乳糖酶活力無顯著差異(P>0.05)。與NBW-CON組生長(zhǎng)豬相比,IUGR-MET組生長(zhǎng)豬空腸和回腸二糖酶活力均無顯著差異(P>0.05)。

    2.3 日糧添加蛋氨酸對(duì)IUGR生長(zhǎng)豬腸道氧化還原狀態(tài)的影響

    表5 日糧添加蛋氨酸對(duì)IUGR生長(zhǎng)豬腸道氧化還原狀態(tài)的影響Table 5 Effect of dietary methionine supplementation on oxidative status in the intestine of growing pigs with IUGR

    由表5可知,與NBW-CON組生長(zhǎng)豬相比,IUGR-CON組生長(zhǎng)豬空腸MDA含量顯著升高(P<0.05),GSH含量和GSH/GSSG值顯著降低(P<0.05),PC和GSSG含量、SOD、GSH-Px和GR活力無顯著差異(P>0.05);回腸SOD活力顯著降低(P<0.05),MDA、PC、GSH和GSSG含量、GSH-Px和GR活力、GSH/GSSG值無顯著差異(P>0.05)。與IUGR-CON組生長(zhǎng)豬相比,IUGR-MET組生長(zhǎng)豬空腸MDA含量顯著降低(P<0.05),GSH含量顯著升高(P<0.05),PC和GSSG含量、SOD、GSH-Px和GR活力、GSH/GSSG值無顯著差異(P>0.05);回腸氧化還原狀態(tài)無顯著差異(P>0.05)。與NBW-CON組生長(zhǎng)豬相比,IUGR-MET組生長(zhǎng)豬空腸和回腸氧化還原狀態(tài)均無顯著差異(P>0.05)。

    2.4 日糧添加蛋氨酸對(duì)IUGR生長(zhǎng)豬腸道基因mRNA相對(duì)表達(dá)量的影響

    由表6可知,與NBW-CON組生長(zhǎng)豬相比,IUGR-CON組生長(zhǎng)豬空腸OCLN mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著降低(P<0.05),SOD1、GPx1、CLDN2和ZO1 mRNA相對(duì)表達(dá)量無顯著差異(P>0.05);回腸各基因mRNA相對(duì)表達(dá)量均無顯著差異(P>0.05)。與IUGR-CON組生長(zhǎng)豬相比,IUGR-MET組生長(zhǎng)豬空腸OCLN mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著升高(P<0.05),SOD1、GPx1、CLDN2和ZO1 mRNA相對(duì)表達(dá)量無顯著差異(P>0.05);回腸各基因mRNA相對(duì)表達(dá)量均無顯著差異(P>0.05)。與NBW-CON組生長(zhǎng)豬相比,IUGR-MET組生長(zhǎng)豬空腸和回腸各基因mRNA相對(duì)表達(dá)量均無顯著差異(P>0.05)。

    表6 日糧添加蛋氨酸對(duì)IUGR生長(zhǎng)豬腸道基因mRNA相對(duì)表達(dá)量的影響Table 6 Effect of dietary methionine supplementation on mRNA expression in the intestine of growing pigs with IUGR

    3 討 論

    研究表明,IUGR對(duì)后代腸道發(fā)育和抗氧化功能均具有不同程度的負(fù)面作用,導(dǎo)致其健康狀況長(zhǎng)期受損,阻礙機(jī)體的正常生長(zhǎng)發(fā)育[28]。隨著人們營(yíng)養(yǎng)觀念和生活水平的提高,通過營(yíng)養(yǎng)干預(yù)改善IUGR的健康狀況已經(jīng)受到廣泛關(guān)注。作為人體必不可少的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),蛋氨酸的代謝與蛋白質(zhì)合成、DNA甲基化和腸道功能等方面密切相關(guān)[11,29]。因此,蛋氨酸在食品營(yíng)養(yǎng)添加劑中的應(yīng)用具有廣闊的發(fā)展前景。但長(zhǎng)期攝入高水平蛋氨酸可能會(huì)給機(jī)體帶來不利影響[10]。研究表明,蛋氨酸是毒性最強(qiáng)的氨基酸之一[30]。Gomez等[31]發(fā)現(xiàn),大鼠攝入過量的蛋氨酸會(huì)導(dǎo)致肝中毒,并伴隨著肝臟線粒體活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)的增多以及線粒體DNA損傷。Garlick[32]報(bào)道,盡管蛋氨酸作為高半胱氨酸的前體,但并沒有證據(jù)表明在合理范圍內(nèi)攝入蛋氨酸會(huì)引發(fā)機(jī)體中毒。因此,攝入適量的蛋氨酸對(duì)于機(jī)體生長(zhǎng)發(fā)育和健康狀況具有重要意義。本研究對(duì)在合理范圍內(nèi)添加蛋氨酸對(duì)IUGR生長(zhǎng)豬腸道發(fā)育和抗氧化功能的影響進(jìn)行探討。

    腸道的正常結(jié)構(gòu)和功能是機(jī)體充分消化吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的關(guān)鍵[33]。VH增高和VSA增大可以增加腸道與營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的接觸面積,從而強(qiáng)化機(jī)體對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收。本研究發(fā)現(xiàn),IUGR導(dǎo)致105 日齡生長(zhǎng)豬空腸和回腸VH降低以及空腸VSA減小,提示IUGR可導(dǎo)致機(jī)體對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收能力降低,從而阻礙機(jī)體的生長(zhǎng)發(fā)育。王遠(yuǎn)孝[28]的研究表明,160 日齡IUGR豬空腸和回腸VH均顯著低于NBW豬,與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果相似。本研究中,通過添加蛋氨酸可顯著升高IUGR生長(zhǎng)豬空腸VH,提示蛋氨酸可在一定程度上促進(jìn)IUGR后代腸道黏膜發(fā)育。另外,Chen Ying等[34]研究發(fā)現(xiàn),日糧添加蛋氨酸可提高斷奶仔豬空腸VH以及VH/CD比值,與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果相似。

    二糖酶作為腸道中重要的消化酶,是腸道黏膜發(fā)育成熟的標(biāo)志[35]。研究發(fā)現(xiàn),IUGR影響腸道黏膜中消化酶的發(fā)育成熟[21]。本實(shí)驗(yàn)中,IUGR導(dǎo)致105 日齡生長(zhǎng)豬回腸蔗糖酶和麥芽糖酶活力顯著降低,提示IUGR阻礙腸道黏膜發(fā)育成熟。王遠(yuǎn)孝[28]的研究表明,160 日齡IUGR豬空腸蔗糖酶和麥芽糖酶活力分別比NBW豬降低了39.07%和42.39%,與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果相似。本研究中,通過添加蛋氨酸可顯著升高IUGR生長(zhǎng)豬回腸麥芽糖酶活力,表明蛋氨酸對(duì)腸道二糖酶發(fā)育成熟具有一定的促進(jìn)作用。研究發(fā)現(xiàn),缺乏含硫氨基酸會(huì)抑制腸上皮細(xì)胞增長(zhǎng)[15],從而影響腸道的消化吸收功能。因此,膳食補(bǔ)充蛋氨酸對(duì)IUGR后代腸道吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)具有重要意義。

    腸道緊密連接是腸道與外界屏障的重要組成部分,維持完整的緊密連接形態(tài)和功能對(duì)保護(hù)腸道黏膜屏障和防止細(xì)菌入侵具有重要意義[36]。研究表明,緊密連接蛋白OCLN是緊密連接的主要功能調(diào)節(jié)蛋白[37],OCLN表達(dá)量降低可引起腸上皮屏障通透性增強(qiáng)[38]。本研究發(fā)現(xiàn),IUGR顯著降低生長(zhǎng)豬空腸OCLN mRNA相對(duì)表達(dá)量,提示IUGR腸道黏膜屏障受損。Wang Wei等[39]研究表明,IUGR導(dǎo)致新生仔豬腸道OCLN基因相對(duì)表達(dá)量降低并增加腸道通透性。本研究發(fā)現(xiàn),日糧添加蛋氨酸后IUGR生長(zhǎng)豬空腸OCLN mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著升高。Chen Ying等[34]給斷奶仔豬補(bǔ)充蛋氨酸,提高了腸道OCLN蛋白表達(dá)量,與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果相似。

    先前的研究發(fā)現(xiàn),氧化應(yīng)激是導(dǎo)致IUGR后代腸道損傷的重要因素[6]。機(jī)體在正常的新陳代謝過程中會(huì)不斷地生成ROS,并與機(jī)體內(nèi)的抗氧化系統(tǒng)保持良好的動(dòng)態(tài)平衡[40]。當(dāng)機(jī)體ROS的生成與抗氧化系統(tǒng)失衡時(shí),則會(huì)引起機(jī)體氧化應(yīng)激[41]。研究表明,IUGR與氧化應(yīng)激密切相關(guān),易加劇機(jī)體脂質(zhì)過氧化程度[42]。MDA是脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物之一,常用來反映機(jī)體氧化應(yīng)激的程度[43]。本研究發(fā)現(xiàn),IUGR可導(dǎo)致105 日齡生長(zhǎng)豬空腸MDA含量顯著升高。SOD是清除ROS的金屬酶,可迅速捕捉體內(nèi)生成的ROS,維持機(jī)體抗氧化系統(tǒng)平衡[44]。GSH是一種小分子巰基化合物,參與組成機(jī)體內(nèi)非酶促抗氧化系統(tǒng)[45]。本研究發(fā)現(xiàn),IUGR生長(zhǎng)豬回腸SOD活力顯著降低,空腸GSH含量和GSH/GSSG值顯著降低。由此可見,IUGR會(huì)導(dǎo)致豬腸道抗氧化酶活力和抗氧化物質(zhì)含量顯著降低,加劇氧化應(yīng)激程度,導(dǎo)致腸道發(fā)育受阻。蛋氨酸是合成半胱氨酸的重要成分,而半胱氨酸是合成GSH的前體物質(zhì)[46]。半胱氨酸可通過調(diào)節(jié)機(jī)體氧化還原狀態(tài)促進(jìn)腸上皮細(xì)胞增殖,對(duì)腸上皮細(xì)胞的抗氧化功能起著重要作用[47]。Chen Ying等[34]研究發(fā)現(xiàn),在豬日糧中添加蛋氨酸可顯著提高十二指腸和空腸GSH含量,顯著降低GSSG含量。本研究發(fā)現(xiàn),日糧添加蛋氨酸可顯著降低IUGR生長(zhǎng)豬空腸MDA含量,顯著升高空腸GSH含量,與上述結(jié)果相似,表明蛋氨酸對(duì)IUGR后代腸道氧化損傷具有一定的改善作用。

    4 結(jié) 論

    本研究表明,IUGR顯著升高生長(zhǎng)豬腸道MDA含量,顯著降低抗氧化酶活力和非酶物質(zhì)含量,引起腸道絨毛萎縮、二糖酶活力降低和OCLN mRNA表達(dá)水平下調(diào)。日糧添加蛋氨酸顯著降低IUGR生長(zhǎng)豬腸道MDA含量,顯著升高GSH含量,并顯著緩解IUGR介導(dǎo)生長(zhǎng)豬腸道絨毛萎縮、麥芽糖酶活力降低和OCLN mRNA表達(dá)水平下調(diào)。上述結(jié)果提示,IUGR導(dǎo)致生長(zhǎng)豬腸道氧化損傷,破壞抗氧化防御系統(tǒng),從而引起腸道結(jié)構(gòu)、功能以及黏膜屏障受損。日糧添加蛋氨酸可通過改善生長(zhǎng)豬腸道抗氧化能力,緩解IUGR導(dǎo)致的腸道功能紊亂。本研究進(jìn)一步豐富了蛋氨酸作為食品營(yíng)養(yǎng)添加劑在促進(jìn)腸道健康方面的積極作用,也為建立IUGR后代營(yíng)養(yǎng)干預(yù)方法提供新的思路和理論依據(jù)。

    [1] VALSAMAKIS G, KANAKA-GANTENBEIN C, MALAMITSIPUCHNER A, et al. Causes of intrauterine growth restriction and the postnatal development of the metabolic syndrome[J]. Annals of the New York Academy of Sciences, 2006, 1092(1): 138-147.DOI:10.1196/annals.1365.012.

    [2] MANDRUZZATO G, ANTSAKLIS A, BOTET F, et al. Intrauterine restriction (IUGR)[J]. Journal of Perinatal Medicine, 2008, 36(4): 277-281. DOI:10.1515/JPM.2008.050.

    [3] SUHAG A, BERGHELLA V. Intrauterine growth restriction (IUGR):etiology and diagnosis[J]. Current Obstetrics and Gynecology Reports,2013, 2(2): 102-111. DOI:10.1007/s13669-013-0041-z.

    [4] WU G, BAZER F W, DATTA S, et al. Proline metabolism in the conceptus: implications for fetal growth and development[J]. Amino Acids, 2008, 35(4): 691-702. DOI:10.1007/s00726-008-0052-7.

    [5] HUANG Ying, SHAO Xiaomei, NEU J. Immunonutrients and neonates[J]. European Journal of Pediatrics, 2003, 162(3): 122-128.DOI:10.1007/s00431-002-1128-0.

    [6] WANG Xiaoqiu, WU Weizong, LIN Gang, et al. Temporal proteomic analysis reveals continuous impairment of intestinal development in neonatal piglets with intrauterine growth restriction[J]. Journal of Proteome Research, 2010, 9(2): 924-935. DOI:10.1021/pr900747d.

    [7] TRAHAIR J F, DEBARRO T M, ROBINSON J S, et al. Restriction of nutrition in utero selectively inhibits gastrointestinal growth in fetal sheep[J]. Journal of Nutrition, 1997, 127(4): 637-641. DOI:10.1093/jn/127.4.637.

    [8] WANG Yuanxiao, ZHANG Lili, ZHOU Genlai, et al. Dietary L-arginine supplementation improves the intestinal development through increasing mucosal Akt and mammalian target of rapamycin signals in intra-uterine growth retarded piglets[J]. British Journal of Nutrition, 2012, 108(8): 1371-1381. DOI:10.1017/S0007114511006763.

    [9] WANG W W, QIAO S Y, LI D F. Amino acids and gut function[J].Amino Acids, 2009, 37(1): 105-110. DOI:10.1007/s00726-008-0152-4.

    [10] MASTROTOTARO L, SPONDER G, SAREMI B, et al.Gastrointestinal methionine shuttle: priority handling of precious goods[J]. IUBMB Life, 2016, 68(12): 924-934. DOI:10.1002/iub.1571.

    [11] MéTAYER S, SEILIEZ I, COLLIN A, et al. Mechanisms through which sulfur amino acids control protein metabolism and oxidative status[J]. Journal of Nutritional Biochemistry, 2008, 19(4): 207-215.DOI:10.1016/j.jnutbio.2007.05.006.

    [12] VAN BRUMMELEN R, DU TOIT D. L-methionine as immune supportive supplement: a clinical evaluation[J]. Amino Acids, 2007,33(1): 157-163. DOI:10.1007/s00726-006-0390-2.

    [13] WU Pengfei, LONG Lihong, ZENG Jianhua, et al. Protection of L-methionine against H2O2-induced oxidative damage in mitochondria[J]. Food and Chemical Toxicology, 2012, 50(8):2729-2735. DOI:10.1016/j.fct.2012.04.047.

    [14] NKABYO Y S, GU L H, JONES D P, et al. Thiol/disulfide redox status is oxidized in plasma and small intestinal and colonic mucosa of rats with inadequate sulfur amino acid intake[J]. Journal of Nutrition,2006, 136(5): 1242-1248. DOI:10.1093/jn/136.5.1242.

    [15] BAUCHART-THEVRET C, STOLL B, CHACKO S, et al. Sulfur amino acid deficiency upregulates intestinal methionine cycle activity and suppresses epithelial growth in neonatal pigs[J]. American Journal of Physiology Endocrinology and Metabolism, 2009, 296(6): 1239-1250. DOI:10.1152/ajpendo.91021.2008.

    [16] BAUCHART-THEVRET C, STOLL B, BURRIN D G. Intestinal metabolism of sulfur amino acids[J]. Nutrition Research Reviews,2009, 22(2): 175-187. DOI:10.1017/S0954422409990138.

    [17] FERENC K, PIETRZAK P, GODLEWSKI M M, et al. Intrauterine growth retarded piglet as a model for humans-studies on the perinatal development of the gut structure and function[J]. Reproductive Biology, 2014, 14(1): 51-60. DOI:10.1016/j.repbio.2014.01.005.

    [18] WANG Tian, HUO Yongjiu, SHI Fangxiong, et al. Effects of intrauterine growth retardation on development of the gastrointestinal tract in neonatal pigs[J]. Biology of the Neonate, 2005, 88(1): 66-72.DOI:10.1159/000084645.

    [19] D'INCA R, KLOAREG M, GRAS-LE GUEN C, et al. Intrauterine growth restriction modifies the developmental pattern of intestinal structure, transcriptomic profile, and bacterial colonization in neonatal pigs[J]. Journal of Nutrition, 2010, 140(5): 925-931. DOI:10.3945/jn.109.116822.

    [20] National Research Council. Nutrient requirements of swine[M].Washington D. C.: National Academy Press, 2012: 208-367.

    [21] DONG Li, ZHONG Xiang, HE Jintian, et al. Supplementation of tributyrin improves the growth and intestinal digestive and barrier functions in intrauterine growth-restricted piglets[J]. Clinical Nutrition,2016, 35(2): 399-407. DOI:10.1016/j.clnu.2015.03.002.

    [22] PLACER Z A, CUSHMAN L L, JOHNSON B C. Estimation of product of lipid peroxidation (malonyl dialdehyde) in biochemical systems[J]. Analytical Biochemistry, 1966, 16(2): 359-364.DOI:10.1016/0003-2697(66)90167-9.

    [23] GANH?O R, MORCUENDE D, ESTéVEZ M. Protein oxidation in emulsified cooked burger patties with added fruit extracts: influence on colour and texture deterioration during chill storage[J]. Meat Science,2010, 85(3): 402-409. DOI:10.1016/j.meatsci.2010.02.008.

    [24] SUN Yi, OBERLEY L W, LI Ying. A simple method for clinical assay of superoxide dismutase[J]. Clinical Chemistry, 1988, 34(3): 497-500.

    [25] HAFEMAN D G, SUNDE R A, HOEKSTRA W G. Effect of dietary selenium on erythrocyte and liver glutathione peroxidase in the rat[J]. Journal of Nutrition, 1974, 104(5): 580-587. DOI:10.1093/jn/104.5.580.

    [26] TIETZE F. Enzymic method for quantitative determination of nanogram amounts of total and oxidized glutathione: applications to mammalian blood and other tissues[J]. Analytical Biochemistry, 1969,27(3): 502-522. DOI:10.1016/0003-2697(69)90064-5.

    [27] CARLBERG I, MANNERVIK B. Glutathione reductase[J].Methods in Enzymology, 1985, 113: 484-490. DOI:10.1016/s0076-6879(85)13062-4.

    [28] 王遠(yuǎn)孝. IUGR豬的生長(zhǎng)與腸道發(fā)育及L-精氨酸和大豆卵磷脂的營(yíng)養(yǎng)調(diào)控研究[D]. 南京: 南京農(nóng)業(yè)大學(xué), 2011: 61-94.

    [29] FANG Zhengfeng, YAO Kang, ZHANG Xiaoling, et al. Nutrition and health relevant regulation of intestinal sulfur amino acid metabolism[J]. Amino Acids, 2010, 39(3): 633-640. DOI:10.1007/s00726-010-0502-x.

    [30] BENEVENGA N J, STEELE R D. Adverse effects of excessive consumption of amino acids[J]. Annual Review of Nutrition, 1984,4(1): 157-181. DOI:10.1146/annurev.nu.04.070184.001105.

    [31] GOMEZ J, CARO P, SANCHEZ I, et al. Effect of methionine dietary supplementation on mitochondrial oxygen radical generation and oxidative DNA damage in rat liver and heart[J]. Journal of Bioenergetics and Biomembranes, 2009, 41(3): 309-321.DOI:10.1007/s10863-009-9229-3.

    [32] GARLICK P J. Toxicity of methionine in humans[J]. Journal of Nutrition, 2006, 136(6): 1722S-1725S. DOI:10.1093/jn/136.6.1722s.

    [33] WANG Bin, WU Guoyao, ZHOU Zhigang, et al. Glutamine and intestinal barrier function[J]. Amino Acids, 2015, 47(10): 2143-2154.DOI:10.1007/s00726-014-1773-4.

    [34] CHEN Ying, LI Defa, DAI Zhaolai, et al. L-methionine supplementation maintains the integrity and barrier function of the small-intestinal mucosa in post-weaning piglets[J]. Amino Acids,2014, 46(4): 1131-1142. DOI:10.1007/s00726-014-1675-5.

    [35] CUMMINS A G, STEELE T W, LABROOY J T, et al. Maturation of the rat small intestine at weaning: changes in epithelial cell kinetics,bacterial flora, and mucosal immune activity[J]. Gut, 1988, 29(12):1672-1679. DOI:10.1136/gut.29.12.1672.

    [36] ULLUWISHEWA D, ANDERSON R C, MCNABB W C, et al.Regulation of tight junction permeability by intestinal bacteria and dietary components[J]. Journal of Nutrition, 2011, 141(5): 769-776.DOI:10.3945/jn.110.135657.

    [37] HIRASE T, STADDON J M, SAITOU M, et al. Occludin as a possible determinant of tight junction permeability in endothelial cells[J].Journal of Cell Science, 1997, 110(14): 1603-1613.

    [38] WALSH S V, HOPKINS A M, NUSRAT A. Modulation of tight junction structure and function by cytokines[J]. Advanced Drug Delivery Reviews,2000, 41(3): 303-313. DOI:10.1016/s0169-409x(00)00048-x.

    [39] WANG Wei, DEGROOTE J, VAN GINNEKEN C, et al. Intrauterine growth restriction in neonatal piglets affects small intestinal mucosal permeability and mRNA expression of redox-sensitive genes[J].FASEB Journal, 2016, 30(2): 863-873. DOI:10.1096/fj.15-274779.

    [40] DURACKOVá Z. Some current insights into oxidative stress[J].Physiological Research, 2010, 59(4): 459-469.

    [41] YU B P. Cellular defenses against damage from reactive oxygen species[J]. Physiological Reviews, 1994, 74(1): 139-162.DOI:10.1152/physrev.1994.74.1.139.

    [42] KAMATH U, RAO G, KAMATH S U, et al. Maternal and fetal indicators of oxidative stress during intrauterine growth retardation(IUGR)[J]. Indian Journal of Clinical Biochemistry, 2006, 21(1):111-115. DOI:10.1007/BF02913077.

    [43] MATEOS R, LECUMBERRI E, RAMOS S, et al. Determination of malondialdehyde (MDA) by high-performance liquid chromatography in serum and liver as a biomarker for oxidative stress : application to a rat model for hypercholesterolemia and evaluation of the effect of diets rich in phenolic antioxidants from fruits[J]. Journal of Chromatography B, 2005, 827(1): 76-82. DOI:10.1016/j.jchromb.2005.06.035.

    [44] ZELKO I N, MARIANI T J, FOLZ R J. Superoxide dismutase multigene family: a comparison of the CuZn-SOD (SOD1),Mn-SOD (SOD2), and EC-SOD (SOD3) gene structures, evolution, and expression[J]. Free Radical Biology and Medicine, 2002, 33(3): 337-349.DOI:10.1016/S0891-5849(02)00905-X.

    [45] FORMAN H J, ZHANG H, RINNA A. Glutathione: overview of its protective roles, measurement, and biosynthesis[J]. Molecular Aspects of Medicine, 2009, 30(1/2): 1-12. DOI:10.1016/j.mam.2008.08.006.

    [46] WU Guoyao, FANG Yunzhong, YANG Sheng, et al. Glutathione metabolism and its implications for health[J]. Journal of Nutrition,2004, 134(3): 489-492. DOI:10.1093/jn/134.3.489.

    [47] SHOVELLER A K, STOLL B, BALL R O, et al. Nutritional and functional importance of intestinal sulfur amino acid metabolism[J].Journal of Nutrition, 2005, 135(7): 1609-1612. DOI:10.1093/jn/135.7.1609.

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