兩種膜式液基薄層細(xì)胞制片儀的應(yīng)用對比研究

李維前，高立永，季洪菊，王玉瑩，劉霞

1.徐州醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院 a.病理科；b.婦產(chǎn)科，江蘇 徐州 221003；2.徐州市第一人民醫(yī)院 病理科，江蘇 徐州 221000

引言

宮頸癌是臨床上常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率僅次于乳腺癌、肺癌、結(jié)腸癌，居女性惡性腫瘤第4位[1]。日常性生活比較紊亂或頻繁的女性較易引發(fā)人類乳頭瘤病毒（HPV）感染，未得到及時有效治療，較易惡化為宮頸癌[2-3]。宮頸由正常細(xì)胞經(jīng)過LSIL到HSIL再到原位癌最后發(fā)展為浸潤癌需要數(shù)年漫長的過程，臨床通過加強女性群體的早期診斷率減少其病變情況的同時降低死亡率[4]。加強宮頸癌篩查對提高早期確診率、早期采取有效的措施處理預(yù)防宮頸癌的發(fā)生具有重要的意義[5]。以往的篩查方式主要為巴氏涂片診斷法，近年來，膜式液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查即液基薄層細(xì)胞檢測（TCT）法在宮頸癌及癌前病變早期篩查中得到大力推廣，已取代傳統(tǒng)的巴氏涂片檢查法[6]，但是市場上各種TCT儀較多，臨床上選擇哪個廠家的TCT儀效果更好，常常難以抉擇。結(jié)合我院先后使用的兩種TCT儀即鄭州科力（品牌A）、福州泰普（品牌B）的實際情況，探討研究它們在宮頸癌及癌前病變早期篩查中的應(yīng)用效果。報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

隨機選取2012年7月至2016年7月我院宮頸TCT檢查的婦女200例，根據(jù)檢查方法不同將患者分為觀察組和對照組。觀察組100例，年齡21～72歲，年齡平均 （40.9±2.5）歲；對照組100例，年齡22～70歲，年齡平均（41.5±2.9）歲。本次臨床診斷試驗均得到患者和家屬同意，試驗通過醫(yī)院倫理會批準(zhǔn)，患者一般資料差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

1.2 方法

對照組采用品牌A（Keli Expert TCT）進(jìn)行篩查。方法：婦科醫(yī)師將一次性宮頸采樣器毛刷頭的前半部伸入患者宮頸內(nèi)，后半部緊貼在宮頸口，沿著同一方向轉(zhuǎn)4～5圈后取出，將毛刷在保存瓶內(nèi)液體里搖振使細(xì)胞洗脫在保存液里，或?qū)⒚㈩^直接退在保存瓶里加蓋標(biāo)記后送檢。上機操作嚴(yán)格遵循品牌A生產(chǎn)的試劑盒及儀器要求進(jìn)行，將制好的片子固定、HE染色樹膠封片后鏡下閱片。

觀察組采用品牌B（TIB-Auto prep 1000）進(jìn)行篩查。方法：標(biāo)本取材、上機操作同品牌A。將涂片固定行HE染色，中性樹膠封片[7-8]。具體操作嚴(yán)格按品牌B公司的儀器和試劑盒操作要求進(jìn)行。陰道鏡下于碘染色不著色處或醋酸試驗白色上皮處或?qū)m頸鱗柱上皮交界3、6、9、12點多處盲取組織送病理科檢查。病理活檢一般采取HE染色，有的需要免疫組化染色、原位雜交染色等。

1.3 診斷標(biāo)準(zhǔn)

參考TBS分級系統(tǒng)分為正常、炎性細(xì)胞及ASCUS、AGC、分為LSIL、HSIL、原位癌、浸潤癌等宮頸上皮內(nèi)病變[9]。觀察有無念珠菌、滴蟲、紅細(xì)胞及炎癥細(xì)胞，除無上皮內(nèi)病變情況外，其他出現(xiàn)的各類病變診斷結(jié)果均被認(rèn)為陽性[10]，即ASCUS以后均為異常。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

選用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，兩組陽性檢出率進(jìn)行卡方檢驗，P＜0.05差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組膜式液基薄層細(xì)胞制片儀陽性率比較

觀察組共檢出15例異常，陽性率為15%，對照組共檢出5例異常，陽性率為5%，兩組對比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表 1。

表1 觀察組和對照組的儀器檢驗結(jié)果對比（%）

2.2 觀察組和對照組的病理檢測比較

觀察組共檢出17例異常，陽性率為17%，對照組共檢出15例異常，陽性率為15%，兩組相比，差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

表2 觀察組和對照組的儀器檢驗結(jié)果對比（%）

2.3 觀察組的儀器檢驗結(jié)果和病理檢驗結(jié)果對比

觀察組儀器共檢出15例異常，陽性率為15%，病理共檢出17例異常，陽性率為17%，兩種檢查方法相比，差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表3。

表3 觀察組的儀器檢驗結(jié)果和病理檢驗結(jié)果對比（%）

2.4 對照組的儀器檢驗結(jié)果和病理檢驗結(jié)果對比

對照組儀器共檢出5例異常，陽性率為5%，病理共檢出15例異常，陽性率為15%，兩種檢查方法相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表4。

表4 對照組的儀器和病理檢查結(jié)果對比（%）

2.5 兩組制片質(zhì)量比較

觀察組涂片鏡下黏液絲溶解，背景相對干凈，能清晰的顯示細(xì)胞結(jié)構(gòu)，細(xì)胞呈單層均勻分布且數(shù)量足夠，容易辨認(rèn)。對照組細(xì)胞基本呈單層分布、較容易辨認(rèn)但數(shù)量較少，黏液絲相對較多，細(xì)胞有時重疊，背景較不潔凈，有紅染物，見圖 1～2。

圖1 觀察組涂片結(jié)果

圖2 對照組涂片結(jié)果

3 結(jié)論

觀察組病理共檢出17例異常，陽性率為17%，對照組共檢出15例異常，陽性率為15%，兩組相比，差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義。觀察組儀器共檢出15例異常，陽性率為15%，病理共檢出17例異常，陽性率為17%，兩種檢查方法相比，差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義。對照組儀器共檢出 5例異常，陽性率為5%，病理共檢出15例異常，陽性率為15%，兩種檢查方法相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）見表4。這說明宮頸癌及癌前病變患者采用品牌B檢查效果理想，效果優(yōu)于品牌A。

4 討論

宮頸癌誘因相對較多：多產(chǎn)、性生活紊亂、性伴侶過多、人乳頭瘤病毒感染等，發(fā)病早期臨床表現(xiàn)缺乏特異性。加強宮頸癌及癌前病變篩查對提高臨床診斷率，降低臨床死亡率具有重要的意義[11]。巴氏涂片法因：① 采集的細(xì)胞不是病變部位細(xì)胞；② 采集后樣本的處理及轉(zhuǎn)移過程中容易造成細(xì)胞的大量流失，導(dǎo)致假陰性率較高、敏感性低，難以達(dá)到預(yù)期的效果。TCT法是細(xì)胞學(xué)上的一次革命，它是利用先進(jìn)的液基細(xì)胞保存技術(shù)和計算機控制過濾技術(shù)及流體力學(xué)負(fù)壓抽吸技術(shù)，幾乎可搜集到所有細(xì)胞，能制備出更加清晰的超薄涂片，能有效的提高宮頸陰道學(xué)疾病診斷的準(zhǔn)確性，降低了傳統(tǒng)巴氏涂片的假陽性率及假陰性率，能在宮頸陰道細(xì)胞學(xué)基本診斷、治療及監(jiān)測中提供依據(jù)和參考。

如何有效的選取TCT儀及其試劑盒，需要臨床研究數(shù)據(jù)的支持。本研究結(jié)果顯示宮頸癌及癌前病變患者采用品牌B檢查效果理想，效果優(yōu)于品牌A。實際操作中不同廠家的儀器又各有其優(yōu)缺點：品牌A是機器自動過濾而品牌B是手工過濾；品牌B自動卸片，自動卸膜杯，而品牌A手工卸片、手工卸膜杯。病理分析人員應(yīng)根據(jù)實際情況選擇合適的儀器、試劑盒，規(guī)避其缺點。

TCT檢查需要注意：① 避開月經(jīng)期、妊娠期、哺乳期、盆腔放療期，取材前24 h內(nèi)不外用藥（陰道栓劑、痔瘡栓、各種軟膏等）及避孕藥和過性生活[12-13]；② 盡量避免短期內(nèi)（小于三個月）重復(fù)取材檢查，以免出現(xiàn)假陰性結(jié)果；③ 當(dāng)有分泌物或有血時，應(yīng)用棉簽輕輕拭去，也不可用力以免損傷出血，以清除干擾物潔凈陰部[14-15]；④ 采集刷刷頭要充分接觸患者宮頸各解剖部位（包括頸管內(nèi)和宮頸外口）稍用力同向轉(zhuǎn)5周，以充分采取細(xì)胞；⑤ 刷頭應(yīng)在保存液里充分振蕩，細(xì)胞全部洗脫在保存液里，并且細(xì)胞團分散開成單個細(xì)胞，無效物質(zhì)被保存液充分破壞；⑥ 載玻片和膜管要安裝恰當(dāng)不歪不偏，膜管正對保存瓶口（當(dāng)膜管下移時不會碰瓶口壁），膜管垂直接觸載玻片的底面，涂成半徑1 cm圓形區(qū)域；⑦ 當(dāng)保存液里有大黏液塊、血絲、血塊等雜物時用鑷子夾取除掉，并過濾雜質(zhì)，以免細(xì)胞分布不勻、厚薄不均、背景不潔凈；⑧ 當(dāng)制好片潮干后及時固定以防細(xì)胞變性影響診斷；⑨ 上機操作前，看保存液里是否有氣泡，如有，加幾滴95%酒精除去，以免所制涂片標(biāo)本圓形區(qū)內(nèi)有空白無標(biāo)本；當(dāng)制片不滿意時，及時重新制片、多次制片或者查找原因解決以提高診斷率減少誤診率和漏診率[16]；每天初用時，膜杯口可以抹少許95%酒精或戊二醛消毒液潤濕杯口以便安裝；兩種儀器都是逐個標(biāo)本運行，每次只能做一個，一次需要3～5 min，不適合大量標(biāo)本或體檢使用，對于大量標(biāo)本或體檢最好使用一次可以做十個以上的儀器更省時方便；TCT只是細(xì)胞學(xué)檢查，TCT結(jié)果異常不足以確診，還應(yīng)進(jìn)一步做陰道鏡和病理活檢，有的做原位雜交檢測HPV-DNA[17]或者DNA定量分析以排除人乳頭瘤病毒感染，整體提高診斷率[18]；TCT制片技術(shù)人員要不斷總結(jié)制閱片水平，不放過任何一個可疑細(xì)胞，減少漏診誤診情況；臨床醫(yī)生加強采集技術(shù)，病理技術(shù)人員不斷提高TCT制片水平，加強采集和制片的標(biāo)準(zhǔn)控制。

如今，TCT技術(shù)還用于其他脫落細(xì)胞學(xué)樣本的制備，如： 痰液、胸水及腹水、尿液、氣管沖洗液、各種穿刺液等。將細(xì)胞學(xué)材料放置在以酒精為主的細(xì)胞保存溶液中，配合適當(dāng)?shù)南?，能克服傳統(tǒng)制片過程中存在的材料厚、細(xì)胞重疊、炎性細(xì)胞引起的涂片不清晰等問題[19]。文獻(xiàn)報道顯示[20]：TCT檢查獲得的細(xì)胞分布相對均勻，不重疊、清晰，能有效的縮短閱片時間，降低假陽性率，提高臨床確診率，為患者后續(xù)治療提供依據(jù)和參考。

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