臨產(chǎn)母豬緊急接種豬傳染性胃腸炎+豬流行性腹瀉二聯(lián)活疫苗（HB08+ZJ08株）對初生仔豬保護(hù)效果觀察

劉 浩，韓永剛，魯 瑩

（1.陜西省動物衛(wèi)生監(jiān)督所，陜西 西安 710000；2.漢中市漢臺區(qū)畜牧獸醫(yī)中心，陜西 漢中 723000；3.漢中市動物疫病預(yù)防控制中心，陜西 漢中 723000）

豬流行性腹瀉（Porcine Epidemic Diarrhea,PED）是由豬流行性腹瀉病毒引起的一種高度接觸性腸道傳染病，其特征為體溫升高、厭食、嘔吐、腹瀉及快速脫水[1]。臨床癥狀和病理變化與豬傳染性胃腸炎極為相似。豬流行性腹瀉病毒（PEDV），屬于冠狀病毒科冠狀病毒屬。到目前為止，還沒有發(fā)現(xiàn)該病毒有不同的血清型。本病毒對乙醚、氯仿敏感。病毒粒子呈現(xiàn)多形性，傾向圓形，外有囊膜。從患病仔豬的腸灌液中濃縮和純化的病毒不能凝集家兔、小鼠、豬、豚鼠、綿羊、牛、馬、雛雞和人的紅細(xì)胞。豬舍的環(huán)境溫度可影響豬體內(nèi)病毒的繁殖，在8～12℃的環(huán)境中比30～35℃的環(huán)境中產(chǎn)生的毒價高，這可能是本病在寒冷季節(jié)流行的一個重要因素。病毒不耐熱，在4℃以上不穩(wěn)定，56℃加熱45 min，65℃加熱10 min即死亡。

相反在4℃以下的低溫，病毒可長時間的保持其感染性。在陰暗處7 d仍保持其感染力。腸道內(nèi)的病毒在-20℃可保存6個月，在-18℃保存18個月僅下降一個對數(shù)滴度。病毒在pH 4～8穩(wěn)定，pH 2.5時則被滅活。對光敏感，在陽光下曝曬6 h即被滅活。紫外線能使病毒迅速滅活。該病1971年首發(fā)于英國，20世紀(jì)80年代初我國陸續(xù)發(fā)生本病。2010年10月以來，豬流行性腹瀉在中國和世界其他主要養(yǎng)豬國家大面積流行，在東亞及北美洲地區(qū)流行程度尤劇，造成養(yǎng)殖場較大程度損失，已成為哺乳仔豬高死亡率的主要原因之一。

當(dāng)前市場商品化豬流行性腹瀉活疫苗毒株分別為1976年比利時分離的Group3基因型CV777株和2008年中國浙江分離的Group1基因型ZJ08株[2]。兩者S1基因與當(dāng)前流行株的同源性分別為：CV777，93.3%；ZJ08 株，95%～100%[4]。由于當(dāng)前流行株與中國早期流行株和疫苗毒株親緣關(guān)系并不近，為有效控制疫病發(fā)生、降低初生仔豬死亡率、減少豬場經(jīng)濟(jì)損失，筆者在2016年12月至2017年3月之間，選擇與當(dāng)前流行株同源性較高的Group1基因型ZJ08株豬流行性腹瀉活疫苗對9個發(fā)病豬場進(jìn)行了緊急接種試驗(yàn)，均取得較為理想的控制效果。為積累該病的防控技術(shù)資料，提高規(guī)模豬場對本病的防控水平，現(xiàn)將經(jīng)實(shí)驗(yàn)室病原學(xué)確診的兩個場控制情況綜述如下。

2016年12月中旬和2017年10月底A、B兩豬場反映本場產(chǎn)房仔豬和母豬均出現(xiàn)以厭食、水樣腹瀉、嘔吐為主要臨床癥狀的疫病。嘔吐多發(fā)生于吃食或吃奶后。癥狀的輕重隨年齡的大小而有差異，年齡越小，癥狀越重。7日齡內(nèi)的新生仔豬發(fā)生腹瀉后1～3 d，呈現(xiàn)嚴(yán)重脫水而死亡，死亡率可達(dá)90%～100%。母豬體溫正?；蛏愿?，精神沉郁、委頓，呈厭食和持續(xù)性腹瀉。經(jīng)流行病學(xué)調(diào)查、現(xiàn)場解剖和實(shí)驗(yàn)室檢測，綜合判斷為暴發(fā)豬流行性腹瀉。經(jīng)采取緊急接種豬傳染性胃腸炎+豬流行性腹瀉二聯(lián)活疫苗（HB08+ZJ08株）緊急接種等一系列綜合防控措施，兩場均于緊急接種7～10 d后產(chǎn)房初生仔豬發(fā)病停止，生產(chǎn)逐步恢復(fù)穩(wěn)定。

1 基本情況

A場為2013年3月新建場地投產(chǎn)的豬場，正常母豬存欄規(guī)模為400頭，投產(chǎn)后場內(nèi)生產(chǎn)一切正常；未免疫過腹瀉疫苗。2016年12月10日左右，產(chǎn)房母豬發(fā)現(xiàn)個別出現(xiàn)腹瀉癥狀，初生仔豬未發(fā)病。場內(nèi)技術(shù)人員誤判為其他因素引起，未引起足夠重視，1周后產(chǎn)房母豬腹瀉比例上升，達(dá)到70%，同時仔豬出生當(dāng)日發(fā)病，快速死亡，死亡率90%～100%。獸醫(yī)技術(shù)人員對母豬、仔豬使用抗生素治療均沒有取得效果。

B場為2006年建場投產(chǎn)，正常母豬存欄規(guī)模為550頭。2017年9月10日左右，全場母豬普免豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉、輪狀病毒三聯(lián)活疫苗，10月24日產(chǎn)房母豬發(fā)現(xiàn)個別出現(xiàn)腹瀉癥狀，初生仔豬隨即發(fā)病。初生仔豬通常在出生當(dāng)日發(fā)病，快速死亡，死亡率90%～100%。技術(shù)人員對母豬、仔豬使用抗生素治療均沒有取得效果。

2 解剖癥狀

病死仔豬胃內(nèi)有大量凝乳塊，眼觀變化僅限于小腸，小腸擴(kuò)張，內(nèi)充滿黃色液體，腸系膜充血，腸系膜淋巴結(jié)水腫，小腸絨毛縮短。組織學(xué)變化，見空腸段上皮細(xì)胞的空泡形成和表皮脫落，腸絨毛顯著萎縮。

3 實(shí)驗(yàn)室檢測

采集病死豬腸內(nèi)容物、胃內(nèi)容物及嘔吐物等部位病料，送天津眾聯(lián)檢測實(shí)驗(yàn)室（第三方檢測機(jī)構(gòu)）按照PCR標(biāo)準(zhǔn)核酸提取方法，各取等量病料混勻提取核酸，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室RT-PCR檢測。檢測結(jié)果如圖1—圖2、表1所示。

圖1 A場PEDV病原學(xué)檢測結(jié)果

圖2 B場PEDV病原學(xué)檢測結(jié)果

表1 病原學(xué)檢測結(jié)果統(tǒng)計

RT-PCR檢測結(jié)果表明，A場送檢的病死豬腸內(nèi)容物樣品2份，豬流行性腹瀉病毒核酸均檢出陽性；提醒該場豬群可能存在豬流行性腹瀉的感染。

RT-PCR檢測結(jié)果表明，B場送檢的病死豬腸內(nèi)容物樣品5份、仔豬嘔吐物3份、腸系膜淋巴組織5份，除1份嘔吐物外其余樣品豬流行性腹瀉病毒核酸均檢出陽性；且嘔吐物和組織樣品各檢出圓環(huán)病毒2型核酸陽性各1份；提醒該場豬群可能存在豬流行性腹瀉和豬圓環(huán)病毒病的雙重感染。

兩場的樣品均未檢出豬瘟、偽狂犬病核酸陽性樣品，提示A、B兩場送檢豬群豬瘟、偽狂犬病感染壓力較小，防控狀況良好。

結(jié)合臨床癥狀，解剖及病原學(xué)檢測和疫病流行病學(xué)綜合分析，上述豬場均為豬流行性腹瀉病例，且B場豬群還存在豬圓環(huán)病毒2型的混合感染。

4 防制措施與效果

4.1 立即封群并強(qiáng)化生物安全隔離措施，強(qiáng)化全場消毒措施，盡量減少橫向傳染。

4.2 控制繼發(fā)細(xì)菌感染，吸附腸內(nèi)毒素。采用福欣（10%多西環(huán)素）1 000 g+普桿新（10%阿莫西林）1 000 g+霉毒凈（以酵母細(xì)胞壁粉為主）2 000 g拌料1 000 kg，連續(xù)飼喂7 d，控制繼發(fā)細(xì)菌感染，降低腸內(nèi)毒素對腸壁的刺激，緩解腹瀉癥狀。

4.3 采用豬傳染性胃腸炎+豬流行性腹瀉二聯(lián)活疫苗（HB08+ZJ08株）對臨產(chǎn)7 d以上的母豬進(jìn)行緊急免疫，劑量為2頭份/頭。對所有臨產(chǎn)前3～5 d的母豬間隔1 d，注射兩次豬用干擾素，每次5 mL。

經(jīng)采取上述綜合防治措施后，以上兩場臨產(chǎn)前7～8 d注射疫苗母豬產(chǎn)仔后，初生仔豬腹瀉發(fā)病率降低為20%～30%（個體），且腹瀉仔豬死亡率由之前的90%～100%降低至10%以下。臨產(chǎn)前10 d進(jìn)行腹瀉二聯(lián)活疫苗緊急注射的母豬，所產(chǎn)仔豬未繼續(xù)發(fā)病。母豬疫苗注射1周后整群精神轉(zhuǎn)好，采食量上升，防治效果較為理想。

5 分析

5.1 利用RT-PCR和基因測序技術(shù)，分別對豬流行性腹瀉病毒疫苗株（PEDV-ZJ08株）和豬傳染性胃腸炎病毒疫苗株（TGEV-HB08株）的主要毒力基因S1基因區(qū)域進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增和測序，并利用分子進(jìn)化分析軟件與臨床流行毒株進(jìn)行同源性和進(jìn)化樹分析，結(jié)果表明PEDV-ZJ08株和TGEV-HB08株與我國當(dāng)前流行毒株的同源性分別為95%～97%、97%～99%之間，提示PEDV-ZJ08株和TGEV-HB08株與我國流行毒株高度同源。

5.2 豬流行性腹瀉疫苗通常主要對懷孕后期的母豬進(jìn)行跟胎免疫，給初生仔豬提供有效保護(hù)。由于流行性腹瀉病毒是一種消化道感染病毒，有明顯的腸道組織嗜性，因此母源抗體的保護(hù)作用除體液免疫和細(xì)胞免疫的作用外，更主要依靠局部腸黏膜免疫的分泌型IgA（Secretory immunoglobulinA,SIgA），我國目前所使用的商品化疫苗以滅活苗為主，肌肉注射通常不能有效激發(fā)機(jī)體的黏膜免疫應(yīng)答，分泌足夠的SIgA，可能是滅活疫苗免疫保護(hù)效果不佳的原因之一[5]。因此懷孕母豬免疫同源性高的活疫苗是防治本病的主要措施。

5.3 黏膜免疫在抵御外界病原微生物的侵襲中發(fā)揮重要作用。分泌型IgA是黏膜免疫系統(tǒng)的主要效應(yīng)分子，主要存在于淚液、唾液、乳汁和呼吸道、消化道及泌尿生殖道等黏膜表面分泌液中。SIgA合成和分泌受多種因素的影響和調(diào)節(jié)。在腸黏膜局部中CD4+T細(xì)胞可分為主要增強(qiáng)免疫功能的輔助性T細(xì)胞（Th）1和增強(qiáng)抗體反應(yīng)的Th2細(xì)胞。Th1細(xì)胞分泌白細(xì)胞介素（IL）2、γ 干擾素（IFN-γ）。Th2 細(xì)胞分泌 IL4、IL5、IL6和IL10。IL2、IL4、IL5、IL6和IL10促進(jìn)mIg陽性B細(xì)胞分化為漿細(xì)胞，提高IgA分泌量。Mellman等報道IFN-γ和腫瘤壞死因子（TNF）能增強(qiáng)SIgA的轉(zhuǎn)運(yùn)，從而增加SIgA分泌量[6]。因此可以對臨產(chǎn)前母豬補(bǔ)充外源性IFN-γ有利于提高初乳中SIgA含量，提高初生仔豬防控豬流行性腹瀉的臨床效果。

[1]Pensnert M B,De Bouck P.A new coronavinis-like particle associated with diarrhen in swine[J].Archives of virology,1978,58(3)：243-247.

[2]杜曉莉，王一成，吳潤，等.2010—2013年浙江省豬流行性腹瀉病毒臨床檢測及PEDV-S基因型分析[J].浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報，2014，26（3）：581-587.

[3]孫瑩.基因2b亞型豬流行性腹瀉病毒變異株的分離鑒定和疫苗研制[D].揚(yáng)州：揚(yáng)州大學(xué)，2017.

[4]陳靜.豬流行性腹瀉病毒變異株與經(jīng)典疫苗株S蛋白免疫原性差異分析[D].鄭州：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)，2015.

[5]De Arriba M L,Carvajal A,Pozo J,et al.Mucosal and syslemic isotype-specific antibrly responses and protection in congventional pigs exposed to virulent or attenuated porcine epidemic diarrhoea virus[J].Telerinary immunology and immunopathology,2002,85(1-2)：85-97.

[6]曾常茜.分泌型IgA在黏膜抗感染中的應(yīng)用[J].北華大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2005，6（1）：33-35.