羅漢果葉黃酮對力竭性運(yùn)動(dòng)大鼠心肌組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

謝一鋒

摘 要：力竭性運(yùn)動(dòng)使運(yùn)動(dòng)的機(jī)體耗氧過多，局部組織缺氧、代謝產(chǎn)物堆積，對線粒體的氧化功能產(chǎn)生影響。羅漢果葉片中的黃酮物質(zhì)具有活血化瘀的藥理作用，并有較強(qiáng)的抗氧化性，其抗氧化性優(yōu)于化學(xué)制劑，能有效清除運(yùn)動(dòng)導(dǎo)致機(jī)體內(nèi)產(chǎn)生的過量自由基。本研究擬構(gòu)建力竭運(yùn)動(dòng)動(dòng)物模型，以雄性大鼠為研究對象，在對照實(shí)驗(yàn)中補(bǔ)充羅漢果葉黃酮補(bǔ)劑，通過離體實(shí)驗(yàn)測試來探索研究羅漢果葉黃酮對運(yùn)動(dòng)大鼠心肌線粒體的影響。

關(guān)鍵詞：羅漢果葉黃酮 力竭運(yùn)動(dòng) 心肌組織 影響

中圖分類號：G804 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：2095-2813（2018）06（b）-0009-02

近年來，黃酮類化合物備受關(guān)注，國內(nèi)外已經(jīng)發(fā)現(xiàn)數(shù)千種黃酮類化合物，廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥。對于羅漢果的重要成分黃酮類物質(zhì)，已有的研究表明，黃酮類物質(zhì)具有健胃、保肝利膽、降血脂血壓、降低毛細(xì)血管滲透性、抗炎、抗菌、抗病毒、利尿、治療心血管疾病、類腎上腺素等藥理作用。羅漢果作為一種純天然的中藥材，其毒副作用小，具有很高的安全性。從羅漢果研究部位來看，主要是對羅漢果果實(shí)的研究，羅漢果的葉片方面的研究相對較少，種仁、根塊、花朵方面的研究。羅漢果葉片中的黃酮提取物與運(yùn)動(dòng)相結(jié)合的研究可謂是鳳毛翎角，故本研究將羅漢果葉黃酮對力竭性運(yùn)動(dòng)進(jìn)行藥物干預(yù)，系統(tǒng)的探索和分析葉黃酮對運(yùn)動(dòng)后的心肌組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響，力圖能為羅漢果葉黃酮的藥理作用研究提供了實(shí)驗(yàn)支持和理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)對象

由醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供健康清潔級（SPF級）六周齡SD雄性大鼠50只，體重為129～170g。分籠飼養(yǎng)，每籠5只，飼養(yǎng)籠為鋼絲制品，并配用不銹鋼罩、塑料吸水瓶，自由飲水，飼養(yǎng)溫度控制在（26±4）°C，醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供標(biāo)準(zhǔn)齟齒類混合飼料。

1.2 實(shí)驗(yàn)分組與方案

適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后將SD大鼠隨機(jī)分為5組，安靜組、一次力竭運(yùn)動(dòng)組、一次力竭藥物組、多次力竭運(yùn)動(dòng)組、多次力竭性藥物組，每組10只。運(yùn)動(dòng)模型參照Tanaka等的方法制備，采用急性力竭運(yùn)動(dòng)制備運(yùn)動(dòng)性心肌損傷模型，運(yùn)動(dòng)方式為跑步。運(yùn)動(dòng)中采用聲音、光刺激或者毛刷刺激老鼠尾部，極少數(shù)情況下，對偷懶老鼠采取電刺激。

安靜組常規(guī)飼養(yǎng)，不進(jìn)行力竭性跑臺訓(xùn)練；一次力竭運(yùn)動(dòng)組、一次力竭藥物組只在取材之前做一次力竭跑臺訓(xùn)練；多次力竭運(yùn)動(dòng)組、多次力竭性藥物組進(jìn)行力竭跑臺訓(xùn)練，速度由最初15m/min逐漸在10min內(nèi)增加至30m/min（約75%VO2max）后，然后維持在該運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度保持不變，坡度為0°，訓(xùn)練30d，每周訓(xùn)練6d，休息1d，每隔一周稱重一次，并記錄數(shù)據(jù)，所有藥物干預(yù)組，每天以體重200mg/g灌胃羅漢果葉黃酮藥劑，持續(xù)灌胃30d，根據(jù)體重調(diào)節(jié)灌胃劑量。

1.3 取材

最后一次力竭性跑臺運(yùn)動(dòng)24h后腹腔注射烏拉坦溶液（3mL/kg）麻醉處死，將各組大鼠按照實(shí)驗(yàn)方案在冰上分批解剖，迅速取出大鼠心肌，放入預(yù)冷的生理鹽水漂洗去血液，除去脂肪組織、結(jié)締組織和血管，用濾紙吸去水分，將心尖組織放入10%甲醛溶液中固定，標(biāo)號記錄，待做石蠟包埋、HE染色，病理分析。心臟剩余部分用錫箔紙包裹，細(xì)麻繩系緊，標(biāo)號后立刻放入液氮罐速凍，轉(zhuǎn)至-80°C超低溫冰箱保存。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

根據(jù)圖1可知，A：安靜組心尖組織HE染色切片；B：一次力竭對照組心尖組織HE染色切片；C：一次力竭藥物組心尖組織HE染色切片；D：多次力竭對照組心尖組織HE染色切片；E：多次力竭藥物組心尖組織HE染色切片。

如圖1所示，安靜組：心肌纖維排列正常，細(xì)胞核呈橢圓形，位居中；一次力竭運(yùn)動(dòng)組：心肌纖維排列及細(xì)胞核形態(tài)改變，出現(xiàn)較多的紅色斑點(diǎn)；一次力竭藥物組：心肌纖維排列及細(xì)胞核形態(tài)有少許改變，出現(xiàn)少量紅色斑點(diǎn)；多次力竭運(yùn)動(dòng)組：心肌纖維排列紊亂、疏散，心肌纖維腫脹，間隙增寬，部分細(xì)胞核變性，間質(zhì)出血嚴(yán)重；多次力竭藥物組：心肌纖維極性排列無序、心肌纖維間隙增寬，炎性細(xì)胞浸潤。

3 分析與討論

力竭性運(yùn)動(dòng)使運(yùn)動(dòng)的機(jī)體耗氧過多，局部組織缺氧、代謝產(chǎn)物堆積，對線粒體的氧化功能產(chǎn)生影響，從而引起機(jī)體內(nèi)源性自由基生成增多。機(jī)體本身存在著可以使體內(nèi)產(chǎn)生的自由基得到有效清除，從而使自由基的形成和清除達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡。

羅漢果葉黃酮對力竭性運(yùn)動(dòng)大鼠心肌組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響如下。

由圖1所示的心肌HE染色結(jié)果，安靜組：大鼠心肌細(xì)胞正常，肌纖維排列整齊，呈短柱狀，結(jié)構(gòu)清晰，肌纖維和細(xì)胞核大小均勻，著色均勻，未見異常；一次力竭運(yùn)動(dòng)組心肌纖維排列出現(xiàn)紊亂，肌纖維縫隙增寬，心肌細(xì)胞不規(guī)則斷裂，細(xì)胞核大小不均，細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)較多的紅色斑點(diǎn)；一次力竭藥物組心肌纖維排列稍紊亂，肌纖維縫隙偶見增寬，細(xì)胞核大小不均，細(xì)胞漿內(nèi)有少量紅色斑點(diǎn)，說明一次性力竭運(yùn)動(dòng)心肌會產(chǎn)生損傷性改變。多次力竭運(yùn)動(dòng)組心肌纖維的形態(tài)結(jié)構(gòu)明顯改變，渾濁腫脹，心肌纖維非常紊亂，肌纖維縫隙大大增寬，細(xì)胞境界模糊不清，細(xì)胞核形狀發(fā)生變化，大量炎性細(xì)胞浸潤；多次力竭藥物組心肌纖維排列無序，心肌細(xì)胞不規(guī)則斷裂，細(xì)胞間隙加大，細(xì)胞核形狀異變，有較多散在紅色斑點(diǎn)。提示多次力竭運(yùn)動(dòng)，導(dǎo)致大鼠疲勞累積，大鼠心肌缺血缺氧性損傷加重。力竭運(yùn)動(dòng)時(shí)，機(jī)體需氧量大于耗氧量，會導(dǎo)致心肌缺氧，長期力竭運(yùn)動(dòng)會誘發(fā)血漿內(nèi)皮素上升，機(jī)體內(nèi)一氧化氮與內(nèi)皮素失衡，進(jìn)而冠狀動(dòng)脈持續(xù)收縮，自由基增多，機(jī)體自由基的產(chǎn)生和清除的平衡狀態(tài)遭到破壞，線粒體鈣離子聚集，導(dǎo)致心肌缺氧、缺血，繼而發(fā)生心肌損傷。藥物組心肌損傷小于力竭運(yùn)動(dòng)組，相關(guān)研究表明，羅漢果具有較強(qiáng)的抗氧化性，可以清除運(yùn)動(dòng)引起的自由基過多，說明羅漢果葉黃酮對力竭運(yùn)動(dòng)引起的自由基增多有一定的清除的效果，羅漢果葉黃酮的抗血液凝聚的功效也可能緩解力竭運(yùn)動(dòng)后紅細(xì)胞聚集現(xiàn)象以及降低血液粘稠，使毛細(xì)血管灌注阻力不至于過高，血液流動(dòng)性不受到太大影響，緩解心臟缺血、缺氧，從一定程度上緩解心肌損傷。

4 結(jié)語

一次力竭運(yùn)動(dòng)會引起心肌纖維排列及細(xì)胞核形態(tài)改變，多次力竭運(yùn)動(dòng)會導(dǎo)致心肌纖維排列紊亂、疏散，心肌纖維腫脹，間隙增寬，部分細(xì)胞核變性，間質(zhì)出血嚴(yán)重。一次性力竭運(yùn)動(dòng)會引起心肌損傷，反復(fù)多次的力竭運(yùn)動(dòng)會加重心肌損傷，羅漢果能緩解心肌缺血缺氧現(xiàn)象，可從一定程度上減輕心肌損傷。

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