金沙江和長(zhǎng)江長(zhǎng)薄鰍人工繁殖及胚胎發(fā)育

張運(yùn)海 丁瑤 顧正選 黃學(xué)瀟 余澤文 舒敏

摘要：2017年6-7月分別對(duì)采集于金沙江攀枝花江段和長(zhǎng)江瀘州江段的長(zhǎng)薄鰍（Leptobotia elongata）進(jìn)行人工繁殖試驗(yàn)，同時(shí)對(duì)金沙江攀枝花江段的長(zhǎng)薄鰍進(jìn)行胚胎發(fā)育的觀察。結(jié)果表明，共催產(chǎn)長(zhǎng)薄鰍4組，共獲得魚苗1.8萬(wàn)尾，長(zhǎng)薄鰍雌性親本成熟較雄魚早，雌雄發(fā)育同步期在6月底。在水溫24 ℃條件下對(duì)胚胎進(jìn)行觀察，發(fā)現(xiàn)受精卵發(fā)育為原腸胚的時(shí)間為5.0 h，平均出膜時(shí)間為31.0 h，出膜仔魚平均長(zhǎng)度為5.2 mm，出膜前魚體長(zhǎng)度與卵膜直徑相當(dāng)，在卵膜內(nèi)能夠伸直魚體自由游動(dòng)，這與其他鰍科魚類以及多數(shù)鯉科魚類有所不同。

關(guān)鍵詞：長(zhǎng)薄鰍（Leptobotia elongata）；金沙江；長(zhǎng)江；人工繁殖；胚胎發(fā)育

中圖分類號(hào)：S917 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2018）08-0104-04

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2018.08.026

Artificial Propagation and Embryonic Development Observation of Leptobotia elongata from Jinsha River and Yangtze River

ZHANG Yun-hai，DING Yao，GU Zheng-xuan，HUANG Xue-xiao，YU Ze-wen，SHU-Min

（Wuhan Sinoeco Ecological Science and Technology Co.， Ltd.， Wuhan 430083， China）

Abstract： Artificial propagation of Leptobotia elongata collected from the Panzhihua section of Jinsha river and Luzhou section of Yangtze river were studied from June to July in 2017. At the same time the embryonic development of Leptobotia elongata from Panzhihua section of Jinsha River were observed. In the experiment of artificial inducing spawning of 4 parents 18 000 fries were received，the study indicated that the females matured earlier than the males，The time they both reach sexual maturity may be in the end of June. Gastrula began in 5.0 h at 24 ℃，and the average hatching time was 31.0 h，the average length of the larvae was 5.2 mm. Before hatching the length of larvae and the diameter of egg membrane was about equal. the fish was able to stretch and swim freely in the egg membrane. This was different from other Cobitidae and most of Cyprinidae.

Key words： Leptobotia elongata； Yangtze river； Jinsha river； artificial propagation； embryonic development

長(zhǎng)薄鰍（Leptobotia elongata）隸屬于鯉形目鰍科沙鰍亞科薄鰍屬，別名花魚、花斑鰍、花泥鰍、紅沙鰍鉆、火軍、花鰍等，是中國(guó)長(zhǎng)江中上游特有珍稀魚類，也是目前已知的鰍科魚類中體型最大的一種[1]。長(zhǎng)薄鰍主要攝食底層小型魚類及底棲動(dòng)物。近年來(lái)，水生態(tài)系統(tǒng)遭受嚴(yán)重威脅，特別是長(zhǎng)江上游江段及金沙江江段，由于水電站的梯級(jí)開發(fā)，使得野生魚類生境發(fā)生劇烈變化；加之過度捕撈，使長(zhǎng)薄鰍的野生種群受到嚴(yán)重威脅。目前長(zhǎng)薄鰍在《中國(guó)物種紅色名錄》《中國(guó)瀕危動(dòng)物紅皮書 魚類》中均被列為易危（VU）等級(jí)。為了對(duì)水電影響江段野生魚類資源進(jìn)行補(bǔ)償，中國(guó)多個(gè)水電站采取人工增殖放流的方式對(duì)流域漁業(yè)資源進(jìn)行修復(fù)。2017年分別在四川省樂山的安谷水電站魚類增殖放流站和四川攀枝花的觀音巖水電站魚類增殖放流站進(jìn)行長(zhǎng)薄鰍的人工繁殖，并取得成功。

1 材料與方法

1.1 材料

所用的試驗(yàn)材料為天然水域人工采集的野生親本，其中觀音巖水電站魚類增殖放流站的長(zhǎng)薄鰍親本采集于金沙江攀枝花江段，采集時(shí)間為2016年5月27日，采集后對(duì)魚體進(jìn)行消毒處理，消毒后將親本暫養(yǎng)于循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)中，催產(chǎn)時(shí)間為2017年6月14日；安谷水電站魚類增殖放流站的長(zhǎng)薄鰍采集于長(zhǎng)江瀘州江段，采集時(shí)間為2017年7月11日，由于親本發(fā)育良好，采集后立即運(yùn)回增殖放流站進(jìn)行人工催產(chǎn)。

1.2 方法

1.2.1 親本選擇 選擇體表無(wú)傷，活力較強(qiáng)的個(gè)體作為親本，通常繁殖季節(jié)雌性長(zhǎng)薄鰍腹部柔軟膨大，可見明顯的卵巢輪廓，雄魚腹部輪廓不明顯，生殖孔微紅，輕壓雌鰍腹部有乳白色精液流出，并且遇水即溶解。

1.2.2 人工催產(chǎn) 采用PG、HCG、LHRH-A3 3種催產(chǎn)藥物進(jìn)行催產(chǎn)，其中第一針?biāo)玫拇弋a(chǎn)劑為L(zhǎng)HRH-A3，注射劑量為2 μg/kg，雄魚不注射。第二針采用混合催產(chǎn)劑，其中PG用量為8 mg/kg，LHRH-A3用量為15 μg/kg，HCG用量為800～1 000 IU/kg，雄魚視發(fā)育情況（精子遇水?dāng)U散快則發(fā)育好，慢則發(fā)育一般）注射劑量為雌魚的1/3～1/2，針距6 h，催產(chǎn)水溫23～25 ℃。注射催產(chǎn)劑后將親本放入催產(chǎn)池，開流水刺激，密切觀察親本動(dòng)態(tài)，若出現(xiàn)追逐，可將雌魚撈起，輕輕擠壓腹部，若有卵粒流出便可進(jìn)行人工授精。

1.2.3 人工授精 由于長(zhǎng)薄鰍精子量較少，擠出的精液很容易黏連在體壁上難以落入采卵盆中，因此采集精液時(shí)，一人將雄魚抓起，腹部朝上，一人配合擦干生殖孔周圍水分，輕壓雄魚腹部，用干燥的吸管吸取精液，吸取精液后將精液滴入預(yù)先配置好的精子保存液中，保存液參照丁淑荃等[2]的精子保存液配方。

將雌魚抓起，并擦干生殖孔及尾部的水分，一只手從背部抓住雌魚，一只手從尾部抓住，同時(shí)將尾部略朝背側(cè)彎曲，以免造成魚卵沿尾部流下造成魚卵損失，注意從頭向尾部方向慢慢推壓腹部，將魚卵擠入干燥的白瓷盆中，可連續(xù)推壓多次，直到擠不出魚卵為止，避免用力過度造成雌魚損傷。

精卵采集完成后將保存液中的精子加入魚卵中，用羽毛沿一個(gè)方向輕輕攪拌均勻，加入充分曝氣的潔凈清水激活精子完成受精，加入的水量為魚卵量的2倍左右，緩慢攪拌1 min讓精卵充分結(jié)合，然后將用清水將魚卵帶水漂洗干凈。

1.2.4 人工孵化及胚胎發(fā)育觀察 受精完成后將魚卵倒入孵化桶進(jìn)行孵化，剛開始水流適當(dāng)加大，每隔15～20 min取樣觀察受精卵發(fā)育情況，拍照并記錄發(fā)育時(shí)期，待原腸胚中期統(tǒng)計(jì)受精率。魚苗破膜前期減小孵化桶的水流直到魚苗完全出膜，觀察魚苗形態(tài)并統(tǒng)計(jì)出苗率。發(fā)育時(shí)期的劃分參照文獻(xiàn)[3]，有一半以上個(gè)體達(dá)到特定時(shí)期發(fā)育特征方可記錄發(fā)育時(shí)間。

2 結(jié)果與分析

2.1 人工繁殖效果

分別于2017年6月14日和2017年7月11日對(duì)金沙江攀枝花江段和長(zhǎng)江瀘州江段采集的長(zhǎng)薄鰍親本進(jìn)行人工催產(chǎn)（表1）。催產(chǎn)金沙江攀枝花江段采集的長(zhǎng)薄鰍親本2組，催產(chǎn)水溫25 ℃，效應(yīng)時(shí)間7 h，催產(chǎn)率100%，獲得魚卵3萬(wàn)粒，受精率50%左右，出苗1萬(wàn)尾左右，平均出苗率33%；催產(chǎn)長(zhǎng)江瀘州江段采集的長(zhǎng)薄鰍親本2組，催產(chǎn)水溫24 ℃，效應(yīng)時(shí)間7.5 h，催產(chǎn)率100%，其中第一組受精率65%，第二組受精率95%，第一組由于魚卵過熟沒有出苗，第二組出苗率80%，獲得魚苗8 000尾左右。

2.2 胚胎發(fā)育觀察

長(zhǎng)薄鰍卵受精后吸水膨脹，吸水后平均卵徑約4.1 mm，比重與水相當(dāng)，魚卵無(wú)黏性，屬典型漂流性卵。受精后約40 min動(dòng)物極逐漸隆起形成胎盤。此后進(jìn)入卵裂期，每隔20 min左右卵裂一次，3.0 h后卵裂期進(jìn)入尾聲，細(xì)胞逐漸變得很小以至于難以分辨，逐漸隆起，形成最初的胚層，3.5 h后胚層逐漸抬高，形似西洋紳士帽，覆蓋于卵黃囊上方，此后胚層逐漸降低并向卵黃囊頂部靠近，隨著囊胚層與卵黃囊的界限逐漸模糊，胚層下包開始意味著囊胚期的結(jié)束。受精后5.0 h，胚層逐漸下包至卵黃囊的1/2處，標(biāo)志著原腸胚期的開始，受精后7.0 h胚層下包至卵黃囊的2/3處，進(jìn)入原腸胚中期，受精后9.5 h胚層下包距卵黃囊底部約1/4，進(jìn)入原腸胚晚期，此時(shí)胚層不對(duì)稱，表明胚體分化開始。受精后11.0 h卵黃囊?guī)缀跬耆慌邔影?，胚體逐漸形成，似一條粗線，神經(jīng)板開始發(fā)育。受精后12.0 h胚層完全包裹卵黃囊，胚孔封閉，胚體清晰可見。受精后13.0 h胚體中部開始出現(xiàn)肌節(jié)。受精后14.0 h胚體近腦端開始出現(xiàn)橢圓形眼囊。受精后15.0 h眼囊后方出現(xiàn)一卵圓形的耳囊，脊索已經(jīng)非常明顯。受精后16.5 h胚體末端逐漸脫離卵黃囊，形成獨(dú)立的尾牙。受精后22.5 h，魚苗脊索伸直，開始出現(xiàn)耳石，此時(shí)魚苗開始扭動(dòng)身體。受精后28.0 h，魚苗開始通過頭部撞擊和尾部擺動(dòng)使得卵膜破裂，進(jìn)而變成出膜仔魚，出膜后魚體平臥，身體透明，出膜仔魚平均全長(zhǎng)5.2 mm，具體發(fā)育時(shí)期及特征見表2。

3 小結(jié)與討論

3.1 長(zhǎng)薄鰍人工繁殖季節(jié)

6月14日催產(chǎn)的金沙江攀枝花江段的雌性親本發(fā)育較好，雄性親本催產(chǎn)后精子量少，遇水?dāng)U散狀況不佳，因此該批魚卵受精率低；7月11日長(zhǎng)江瀘州江段的雄性親本發(fā)育達(dá)到最佳，但雌性親本出現(xiàn)魚卵過熟現(xiàn)象，過熟魚卵流動(dòng)性過強(qiáng)，部分魚卵開始坍塌，受精后胚胎發(fā)育止于囊胚期，之后受精卵逐漸消融。由2次人工繁殖試驗(yàn)可以看出，長(zhǎng)薄鰍雌雄發(fā)育不同步，雌性成熟較雄性早。5月底金沙江攀枝花江段雄性親本還未達(dá)到最佳成熟期，加之長(zhǎng)薄鰍精巢呈現(xiàn)細(xì)長(zhǎng)的分支裝結(jié)構(gòu)，不易擠出精子，難以滿足干法授精的操作要求，采用適當(dāng)?shù)木颖４嬉合♂尯笤龠M(jìn)行授精能夠解決這一問題，由2次繁殖結(jié)果推測(cè)，長(zhǎng)薄鰍最佳繁殖季節(jié)應(yīng)該在6月底，此時(shí)長(zhǎng)薄鰍雌雄親本發(fā)育較為同步，具體時(shí)間還需要通過進(jìn)一步試驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證。

3.2 親本暫養(yǎng)

研究發(fā)現(xiàn)5月27日采集于金沙江攀枝花江段的長(zhǎng)薄鰍親本，在增殖放流站循環(huán)水系統(tǒng)中暫養(yǎng)17 d后，很大程度上親本出現(xiàn)性腺退化現(xiàn)象。原因可能是野生魚類親本從天然水域過度到循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)中時(shí)，由于養(yǎng)殖環(huán)境發(fā)生變化，引起魚類的應(yīng)激反應(yīng)，使得性腺退化[4-8]。這種現(xiàn)象在其他鰍科魚類中也有出現(xiàn)[9]，因此筆者推測(cè)，這可能與大多數(shù)鰍科魚類的生活習(xí)性較其他游泳性魚類不同有關(guān)，常規(guī)養(yǎng)殖環(huán)境很難模擬自然狀態(tài)下鰍科魚類的生活環(huán)境。因此通過野外生態(tài)調(diào)查，了解長(zhǎng)薄鰍的生活及生態(tài)習(xí)性，進(jìn)而模擬長(zhǎng)薄鰍自然狀態(tài)下的生活環(huán)境是阻止長(zhǎng)薄鰍人工養(yǎng)殖條件下性腺退化的可行途徑。

3.3 長(zhǎng)薄鰍胚胎發(fā)育特點(diǎn)

長(zhǎng)薄鰍卵沒有黏性，屬于漂流性卵，這一點(diǎn)類似于中華沙鰍[10]，而與大多數(shù)產(chǎn)黏性卵的高原鰍不同[11-13]；本研究長(zhǎng)薄鰍受精卵吸水后卵膜徑相較于梁銀銓等[14]研究結(jié)果略大，這可能與長(zhǎng)薄鰍個(gè)體大小、成熟情況或采樣點(diǎn)不同有關(guān)。其次長(zhǎng)薄鰍胚體長(zhǎng)度在出膜前小于卵膜徑，能夠自由擺動(dòng)身體，這一點(diǎn)與其他鰍科魚以及多數(shù)鯉科魚類有所差異。本研究長(zhǎng)薄鰍胚胎發(fā)育時(shí)間較梁銀銓等[14]研究結(jié)果有所提前，這可能與研究胚胎發(fā)育時(shí)水溫略高有關(guān)。

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