體外真菌(1-3)-β-D葡聚糖檢測影響因素探討

（1四川省婦幼保健院檢驗(yàn)科 四川 成都 610045）

（2西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科 四川 瀘州 646000）

（3四川省婦幼保健院功能影像科 四川 成都 610045）

成春嵐1 向成玉（通訊作者）2 朱巧英1 陳曦3 石艷艷1 倪雪梅1 李寧1

真菌(1-3)-β-D葡聚糖的檢測是診斷深部真菌感染的快速準(zhǔn)確的方法，其特異性和敏感性已經(jīng)得到一致的公認(rèn)[1.2.3.4.5]。但是據(jù)報(bào)道生物大分子和頭孢菌素等對檢測結(jié)果有影響[3.4.5]，常常出現(xiàn)假陽性、假陰性結(jié)果。為了觀察體外檢測過程中是否受到常見介質(zhì)的影響。我們選擇了正常血漿、無熱原蒸餾水、0.9%的生理鹽水、0.02%兩性霉素B生理鹽水和0.75%氟康唑生理鹽水對白色念珠菌進(jìn)行稀釋，以觀察治療用藥兩性霉素B和氟康唑?qū)w外檢測結(jié)果的影響?，F(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1.材料與方法

1.1 儀器與試劑

MD-80型微生物動態(tài)快速檢測系統(tǒng)，T01智能恒溫儀，冰浴槽以及GKT109動態(tài)真菌檢測試劑盒(定量),均由北京金山川科技發(fā)展公司提供。

1.2 待測液制備

將白色假絲酵母菌用正常血漿、無熱原蒸餾水、0.9%的生理鹽水、0.02%兩性霉素B生理鹽水和0.75%氟康唑生理鹽水稀釋為0.05麥?zhǔn)蠁挝唬ê咨钪榫?×107CFU/ml）。取上述制備好的各樣本100ul，加入樣品處理液中混勻后70℃保溫10分鐘取出后立刻放入冰水浴中即為待測樣品。細(xì)菌培養(yǎng)取每種液體10ul傾注于平板接種，根據(jù)生長的菌落進(jìn)行計(jì)算。

1.3 測定分析

取待測樣品200ul直接加入反應(yīng)主劑中，溶解后使用微量加樣器轉(zhuǎn)移至10×75mm標(biāo)準(zhǔn)玻璃反應(yīng)管中（操作規(guī)程中不要產(chǎn)生氣泡），插入MD-80微生物快速動態(tài)測定系統(tǒng)中進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后由標(biāo)準(zhǔn)曲線自動計(jì)算出待測血漿中葡聚糖含量。操作過程中注意避免微生物及細(xì)菌污染。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

測定結(jié)果用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件t檢驗(yàn)進(jìn)行分析,(1-3)-β-D葡聚糖含量以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，P＜0.05為差異有顯著性意義。

2.結(jié)果

實(shí)驗(yàn)組白色假絲酵母菌菌落數(shù)大于10萬CFU/L，葡聚糖含量為93.8±15.8ug/L，對照組白色假絲酵母菌菌落數(shù)為2000CFU/L，葡聚糖含量為7.1±2.5ug/L,經(jīng)spss統(tǒng)計(jì)軟件t檢驗(yàn)，組內(nèi)結(jié)果無顯著性差異（P＞0.05），組間結(jié)果有顯著性差異（P＜0.05）。結(jié)果見附表。

表1 兩組(1-3)-β-D葡聚糖濃度（ug/L）

表2 兩組白色假絲酵母菌菌落數(shù)（CFU/L）

3.討論

（1-3）-β-D葡聚糖是一種多糖，普遍存在于除接合菌外的真菌細(xì)胞壁中，占真菌細(xì)胞壁干重的50%以上，尤其在酵母樣真菌中含量最高[1]，其他微生物如細(xì)菌、病毒及動物、人體細(xì)胞均缺乏此成分。因此，血漿（1-3）-β-D葡聚糖檢測對真菌深部感染早期診斷具有重要意義[1.2.3.4.5]。

某些情況可干擾檢測結(jié)果而出現(xiàn)假陽性，如標(biāo)本污染等。本研究中所需器皿均行滅菌、去熱源處理，操作中堅(jiān)持無菌原則，所選病例均排除了干擾因素，檢測結(jié)果可靠。

為了觀察體外其他因素對結(jié)果的影響，我們對檢測介質(zhì)進(jìn)行研究，所選幾種介質(zhì)除抗真菌藥外，基本為實(shí)驗(yàn)時(shí)常用的介質(zhì)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：實(shí)驗(yàn)組、對照組內(nèi)葡聚糖體外檢測無顯著差異，表明檢測結(jié)果與液體介質(zhì)無關(guān)；特別是在真菌治療過程中使用兩性霉素和氟康唑很普遍，但本研究未發(fā)現(xiàn)治療用兩性霉素和氟康唑?qū)Y(jié)果有異常的影響。組間結(jié)果差異有顯著性，表明與菌落數(shù)顯著相關(guān)，說明一定濃度的真菌溶液葡聚糖含量才足夠檢出。當(dāng)溶液中含有的真菌小于10000個(gè)菌落數(shù)時(shí)，體外檢測其葡聚糖含量不能測出，說明這一計(jì)量真菌溶液葡聚糖含量還達(dá)不到體外檢測檢出水平。至于是否能引起感染，尚需動物實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證明。這需要下一步實(shí)驗(yàn)來研究。

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