離子色譜法連續(xù)測定乳制品中的NO-2和NO-3分析

□ 方富良 李 娜 杭州貝因美營養(yǎng)品有限公司

硝酸鹽、亞硝酸鹽均為典型的護(hù)色劑，常被添加到乳制品中，但對于亞硝酸鹽而言，其能夠與組胺類物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)，生成致癌物質(zhì)，而針對硝酸鹽來講，其在細(xì)菌作用與影響下，能還原成亞硝酸鹽，硝酸鹽通常表現(xiàn)為亞硝酸鹽的毒性，所以，食品衛(wèi)生要求對亞硝酸鹽及硝酸鹽用量進(jìn)行嚴(yán)格控制。當(dāng)前，測定乳制品中硝酸鹽的方法有鎘柱法，而測定亞硝酸鹽的方法主要有鹽酸萘乙二胺法、示波極譜法，除此之外，還有離子色譜法、催化光度法等。本文就色譜法連續(xù)測定乳制品中的NO-2和NO-3方法進(jìn)行探討。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

選用市場上售賣的奶制品；NO-3與NO-2標(biāo)準(zhǔn)儲存液（1 000 mg/L）；Ag2O（德國Merck公司）；超純水、乙酸及Na2CO3均購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；尼龍濾膜購自英國Whatman公司，規(guī)格為0.45 μm。

1.2 儀器與設(shè)備

DX-600型離子色譜儀（美國Dionex公司產(chǎn)）；Beckman AvantiJ-25I型高速冷凍離心機(jī)（美國Beckman公司產(chǎn)）；TGL-16C離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠產(chǎn)）；HH數(shù)顯恒溫水浴鍋（金壇市金城國勝實(shí)驗(yàn)儀器廠產(chǎn)）。

1.3 方法

（1）色譜條件。運(yùn)用Dionex Ion Pac AS9-HC分析柱，型號為4 mm×250 mm；淋洗液選用9.0 mmol/L Na2CO3溶液，開展抑制電導(dǎo)檢測，電流設(shè)定為50 mA，進(jìn)樣量控制在25 μL。（2）繪制工作曲線。運(yùn)用超純水，稀釋NO-2、NO-3標(biāo)準(zhǔn)儲存液，形成9個不同的質(zhì)量濃度標(biāo)準(zhǔn)系列，即 100、20、5、2、0.2、0.08、50、10、0.4 mg/L，依照上述色譜條件實(shí)施測定，各質(zhì)量濃度均連續(xù)進(jìn)行4次進(jìn)樣，求出峰面積的平均值。把質(zhì)量濃度當(dāng)作橫坐標(biāo)，而峰面積作為縱坐標(biāo)，至此便可完成標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。（3）樣品前處理。取200 g乳制品，充分混勻，精取10.0 g，置入具塞三角瓶中（100 mL），加入溫度為30 ℃的去離子水100 mL，充分混合，分為3組，靜置10 min，然后均超聲30 min。將水提液（40 mL）轉(zhuǎn)移到低溫冷凍離心管中（50 mL），以12 000 r/min進(jìn)行實(shí)時離心操作，時間為10 min，趁冷，將中間的清液取出，置入具塞試管中，備用。移液管取清液4.0 mL，置入塑料離心管中，將體積分?jǐn)?shù)為0.9%的乙酸溶液1.0 mL晃勻，靜置，同轉(zhuǎn)速進(jìn)行離心處理，時間為6 min，從中精取上清液3.0 mL，置入離心管，另將0.1 mL的NaOH溶液加入其中，晃勻，加入Ag2O，劑量為17～19 mg，取上清液，稀釋2倍進(jìn)樣[1]。

1.4 計算

依據(jù)如下公式計算出樣品中的NaNO3、NaNO2含量：

在公式中，V表示的是樣品溶液的體積；m表示的是樣品質(zhì)量；r表示的是稀釋倍數(shù)；M表示的是摩爾質(zhì)量（g/mol）；C表示的是待測溶液的質(zhì)量濃度（mg/L）。

2 結(jié)果與分析

2.1 選擇色譜柱

本實(shí)驗(yàn)所選用的是離子交換柱（AS9-HC型），此色譜柱能夠在比例為10 000:1的CI-:NO-2下，成功分離CI-與NO-2。因此，將CI-所造成的干擾除去，不額外添加Ag2O，防止Ag2O過量而損壞色譜柱[2]。

2.2 線性范圍及精密度實(shí)驗(yàn)

當(dāng) 在 0.08～ 100 mg/L，NO-2與NO-3標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量濃度與峰面積之間有較好的線性關(guān)系。

2.3 最低檢出限

NO2標(biāo)準(zhǔn)溶液為0.04 mg/L時能檢出，而NO3為0.08 mg/L時能檢出。運(yùn)用本方法對凈化樣品進(jìn)行處理后，不稀釋進(jìn)樣，樣品當(dāng)中的NO2檢出限為0.5 mg/L，而NO3為1.0 mg/L。NO2＜本方法的檢出限0.5 mg/L，NO3＜本方法檢出限1.0 mg/L，即未檢出。

2.4 樣品測定

基于上述方法與條件，測試樣品。從所得出的樣品色譜圖可得知，將Ag2O加入奶制品提液中，并進(jìn)行攪拌后，將其中的CI-除去，使其不干擾到NO2的定量檢測。

3 結(jié)論

奶制品通過去脂肪、蛋白質(zhì)及CI-處理后，運(yùn)用離子色譜法對其中的NO-2與NO-3同時進(jìn)行測定。此方法操作簡單且費(fèi)用低，在0.08～100 mg/L，NO-2與NO-3標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量濃度與峰面積之間有較好的線性關(guān)系，適合在奶制品中同時檢測硝酸鹽與亞硝酸鹽。

[1]李紅敏,陳霞,劉長勇,等.離子色譜法測定發(fā)酵乳制品中的NO_2～-、NO_3～-和 SCN～-[J].食 品 工業(yè),2015(6):291-294.

[2]樓穎偉,黃振華.離子色譜法測定食品中亞硝酸鹽和硝酸鹽的不確定度分析[J].上海預(yù)防醫(yī)學(xué),2011,23(4):182-184.