Quechers方法測定動物源性食品中獸藥殘留氯霉素的不確定度評定

□ 張虹艷 王小喬 吳福祥 蘭州市食品藥品檢驗所

1 材料與方法

1.1 試驗儀器與設(shè)備

液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（安捷倫6460）、天平（梅特勒MS105DU）。

氯霉素對照品（Dr純度98.5%）、Quechers（ EMR-Lipid萃取管、EMRLipid Polish反萃取管）。

1.2 試驗方法

1.2.1 供試樣

稱取2 g均質(zhì)樣品于50 mL離心管中，加入 5mL酸化乙腈（含有5%甲酸），蓋緊瓶蓋在機(jī)械振蕩器中劇烈振搖2 min，4 000轉(zhuǎn)離心10 min，加入5 mL緩沖液（5 mmol/L乙酸銨）至15 mL EMR-Lipid dspE管中搖勻，再移取樣品上清液至15 mL EMRLipid dspE管中，立即混合使樣液分散，在渦旋儀上渦旋1 min， 4 000轉(zhuǎn)離心10 min，移取上清液至EMRLipid Polish反萃管中，漩渦混合后離心，取上層ACN層濃縮至近干，用20%甲醇水定容至1.00 mL，過0.22 μm的濾膜，待測。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液測定

精密稱取氯霉素對照品13.42 mg至100 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，得到132.2 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。再精密移取上述溶液1.00 mL至100 mL容量瓶中，得到1.322 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，精密吸取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液0.10、0.20、0.40、0.60、1.60、3.00 mL置于10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻靜置，配制成系列標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液。

2 數(shù)學(xué)模型和不確定度來源分析

2.1 測量模型

其中：X——試樣中氯霉素的含量（μg/kg）；c——樣品濃度（ng/mL）；V——試樣定容體積（mL)；m——試樣稱樣量 (g)；f——稀釋倍數(shù)；1000——換算系數(shù)。

2.2 檢測結(jié)果

重復(fù)測定樣品中氯霉素含量6次，稱樣2.003 g，測定結(jié)果為71.22、77.84、74.07、77.41、79.66、74.84 μg/kg。

3 不確定度的來源識別和分析

3.1 不確定度的A類評定

按貝塞爾公式計算得標(biāo)準(zhǔn)偏差：

S(x)=U(x)=3.051 μg/kg

測定結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)不確定度值為：

相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

3.2 不確定度的B類評定

3.2.1 樣品稱重m引入的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度

（1）試樣質(zhì)量m稱量引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度評定。天平經(jīng)檢定合格，根據(jù)檢定證書提供的數(shù)據(jù)，天平的擴(kuò)展不確定度為U=0.1 mg，k=2。則標(biāo)準(zhǔn)不確定度u1(m)=U/K=0.1 mg/2=0.05 mg。本實驗中稱樣量為2 g，樣品質(zhì)量引入的相對不確定度：

3.2.2 樣品定容體積V的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度評定

（1）移液槍的校準(zhǔn)：1 000 μL微量移液器移取1 000 μL液體時，系統(tǒng)相對誤差為0.01%，偶然誤差為0.18%，相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

（2）溫度引起的不確定度 假設(shè)定容在（20+3）℃條件下進(jìn)行，甲醇體積膨脹系數(shù)為1.1×10-3/℃，假定為平均分布，則不確定度為：

則：測定用樣液V的相對不確定度為：

3.3 由標(biāo)準(zhǔn)溶液引入的不確定度

由標(biāo)準(zhǔn)曲線求得結(jié)果A引入的不確定度，包括氯霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制和擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線非線性所引入的不確定度。

3.3.1 氯霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液引入的不確定度

（1）對照品引入的不確定度

氯霉素對照品由Dr.Ehrenstorfer提供，純度為99.3%，標(biāo)準(zhǔn)證書給出的相對擴(kuò)展不確定度為0.5%，包含因子為2，則其引入的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

（2）稱量產(chǎn)生的不確定度

用天平準(zhǔn)確稱取對照品13.42 mg，并用甲醇定容至100 mL，根據(jù)3.2.1，天平引入的不確定度為：

urel（s2）=0.05 mg/13.42 mg=0.003 73

（3）對照品溶液稀釋引入的不確定度

第一次定容：（100±0.1）mL容量瓶服從三角分布，標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

甲醇的體積膨脹系數(shù)為1.1×10-3，故溫度引起的不確定度為：

則第一次定容產(chǎn)生的不確定度為：

第一次移液：（1±0.015）mL移液管服從三角分布，計算同上，產(chǎn)生的不確定度為：

第二次定容同第一次：則第二次定容產(chǎn)生的不確定度為：

標(biāo)曲第一、第二、第三、第四個點(diǎn)分別用（1±0.015）mL移液管移取，不確定度同：

標(biāo)曲第五、第六個點(diǎn)使用5 mL移液管，（5±0.030）mL移液管服從三角分布，產(chǎn)生的不確定度為：

標(biāo)曲第五、六個點(diǎn)定容引入的不確定度為：

故配制標(biāo)準(zhǔn)曲線引入的不確定度計算如下：

（4）合成標(biāo)準(zhǔn)溶液配置引入的不確定度。

3.4 由標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合引入的不確定度

由標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合引入的標(biāo)準(zhǔn)偏差可由下式標(biāo)示：

則標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合引入的不確定度為：

根據(jù)A類不確定度評定，因重復(fù)性引入的相對不確定度為：

3.5 合成不確定度

U=x×urel=0.075 8×0.065 6=0.004 97 mg/kg擴(kuò)展不確定度U=ku，置信概率為95%，k=2。則U=2×0.004 97=0.009 94 mg/kg 。即稱樣量約為2 g時，氯霉素測定結(jié)果為（0.075 8+0.009 94）mg/kg。

4 結(jié)論與討論

從試驗方法和計算公式可知，氯霉素含量的不確定度來源于以下幾個因素：①重復(fù)測量引入的不確定度，屬于A類不確定度；②稱樣質(zhì)量引入的不確定度；③樣品定容體積引入的不確定度，受移液槍校正以及溫度對操作過程的影響；④對照品溶液配制引入的不確定度，受容量瓶校正和稀釋因子的影響；⑤標(biāo)準(zhǔn)曲線引入的不確定度。