國(guó)產(chǎn)注射用伏立康唑與果糖注射液的配伍穩(wěn)定性研究Δ

盧彥芳，林萍萍，王川平，亢澤坤，任進(jìn)民#(.河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院藥學(xué)部，河北 石家莊 050000； .河北醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，河北 石家莊 050000)

伏立康唑是在氟康唑的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)上合成的新型高親脂性三唑類抗真菌藥，其作用機(jī)制是抑制真菌中由肝藥酶CYP介導(dǎo)的14α-甾醇去甲基化，從而抑制麥角甾醇的生物合成，具有抗菌譜廣、生物利用度高、安全及可通過血-腦脊液屏障等特點(diǎn)[1-3]。由于伏立康唑水溶性低，國(guó)產(chǎn)伏立康唑常用羥丙基-β-環(huán)糊精為輔料制備以增加藥物的溶解性[4-6]。果糖是葡萄糖的同分異構(gòu)體，具有代謝快、不依賴于胰島素調(diào)控的特點(diǎn)，可有效調(diào)節(jié)血糖，安全性高[7-10]。在臨床上，果糖注射液常用于代替葡萄糖注射液作為藥物的溶劑[11-14]。而伏立康唑的藥品說明書中僅推薦使用5%葡萄糖注射液、0.9%氯化鈉注射液作為稀釋劑，該藥與其他溶液的相容性尚不清楚。本研究以配伍溶液的外觀性狀、不溶性微粒數(shù)、pH及伏立康唑含量作為指標(biāo)，考察了以羥丙基-β-環(huán)糊精為輔料的國(guó)產(chǎn)注射用伏立康唑與果糖注射液的配伍穩(wěn)定性，以期為臨床安全、有效地配伍用藥提供參考依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

Waters e2695型高效液相色譜儀，包括四元梯度泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、2489型紫外/可見光檢測(cè)器及Empower色譜工作站(美國(guó)Waters公司)；GWF-8JA型微粒分析儀(天津天河醫(yī)療儀器有限公司)；pH-213臺(tái)式酸度測(cè)定儀(北京天信偉業(yè)科貿(mào))；CPA 225D型分析天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)。

1.2 藥品與試劑

伏立康唑?qū)φ掌?晉城海斯制藥有限公司，原料藥批號(hào)：20151103)；酮康唑?qū)φ掌?西安楊森制藥有限公司，原料藥批號(hào)：pvk031)；注射用伏立康唑(晉城海斯制藥有限公司，批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H20058963，批號(hào)：20161201)；果糖注射液(江蘇正大豐海制藥有限公司，批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H20031178，批號(hào)：1609231)；乙腈為色譜純；磷酸二氫鉀為分析純；水為蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為Diamonsil C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相為乙腈-10 mmol/L磷酸二氫鉀水溶液(V∶V=50 ∶50，以三乙胺調(diào)節(jié)pH至6.5)，流速為1 ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm，柱溫為35 ℃，進(jìn)樣量為10 μl。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品貯備液的制備：稱取伏立康唑?qū)φ掌芳s50 mg，精密稱定，置于25 ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得質(zhì)量濃度為2 mg/ml的伏立康唑?qū)φ掌焚A備液。

2.2.2 內(nèi)標(biāo)溶液的制備：稱取酮康唑?qū)φ掌芳s50 mg，精密稱定，置于25 ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 配伍溶液的制備：模擬臨床用藥濃度，取注射用伏立康唑200 mg，用適量注射用水溶解后，取溶解液加入100 ml容量瓶中，加果糖溶液稀釋至刻度，搖勻，制得質(zhì)量濃度為2 mg/ml的配伍溶液。

2.3 專屬性試驗(yàn)

精密量取果糖注射液0.1 ml置于10 ml容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度，得空白溶液；取伏立康唑?qū)φ掌焚A備液0.1 ml、內(nèi)標(biāo)溶液0.1 ml置于10 ml容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度，得對(duì)照品溶液；精密量取配伍溶液0.1 ml置于10 ml容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度，即得供試品溶液。分別取空白溶液、對(duì)照品溶液及供試品溶液按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，色譜圖見圖1。結(jié)果表明，果糖溶液對(duì)伏立康唑的測(cè)定無干擾，方法專屬性良好。

A.對(duì)照品溶液；B.空白溶液；C.供試品溶液；1.伏立康唑；2.酮康唑A. reference solution; B. blank solution; C. test solution 1.voriconazole; 2.ketoconazole圖1 高效液相色譜圖Fig 1 High performance liquid chromatography

2.4 線性關(guān)系考察

精密量取對(duì)照品貯備液1.0 ml置于10 ml容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度，得0.199 mg/ml的對(duì)照品溶液。精密量取對(duì)照品溶液0.25、0.50、1.00、2.00及4.00 ml置于10 ml容量瓶中，分別加入內(nèi)標(biāo)溶液0.1 ml，用蒸餾水稀釋至刻度，即得質(zhì)量濃度為4.98、9.95、19.90、39.80及79.60 μg/ml系列工作液。按“2.1”項(xiàng)下色譜條件依次進(jìn)樣測(cè)定。以伏立康唑峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積之比為縱坐標(biāo)(Y)、以伏立康唑質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(X)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：Y=0.082 4X-0.084(r=0.999 6)。結(jié)果表明，伏立康唑在4.98～79.60 μg/ml質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn)

取“2.4”項(xiàng)下質(zhì)量濃度為19.9 μg/ml的伏立康唑?qū)φ掌啡芤?，按?.1”項(xiàng)下色譜條件重復(fù)進(jìn)樣分析6次。結(jié)果顯示，伏立康唑峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積比值的RSD為0.77%，表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取“2.4”項(xiàng)下質(zhì)量濃度為19.9 μg/ml的伏立康唑?qū)φ掌啡芤?，在室?25 ℃)下放置0、1、2、3、4及5 h時(shí)進(jìn)樣分析。結(jié)果顯示，伏立康唑峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積比值的RSD為1.33 %，表明5 h內(nèi)對(duì)照品溶液穩(wěn)定性良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備配伍溶液6份，分別精密量取0.1 ml置于10 ml容量瓶中，加入內(nèi)標(biāo)溶液0.1 ml，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。按“2.1”項(xiàng)下色譜條件下進(jìn)樣分析，記錄色譜圖。結(jié)果伏立康唑含量的RSD為1.85%，表明方法的重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

精密量取伏立康唑?qū)φ掌穬?chǔ)備液適量置于100 ml容量瓶中，加內(nèi)標(biāo)溶液1.0 ml，分別按比例加入果糖注射液，用蒸餾水稀釋至刻度。按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣分析，記錄色譜圖，測(cè)定伏立康唑與內(nèi)標(biāo)的峰面積比值，并代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算濃度，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)Tab 1 Results of sample recovery tests (n=6)

2.9 配伍穩(wěn)定性試驗(yàn)

2.9.1 溶液性狀及pH測(cè)定：按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備配伍溶液，室溫下放置0、1、2、3、4及5 h時(shí)觀察其外觀、并測(cè)定pH。結(jié)果顯示，配伍液在5 h內(nèi)均為無色澄清液體，顏色未發(fā)生改變，未出現(xiàn)渾濁，澄明度良好；0～5 h內(nèi)，各配伍液的pH無明顯變化，RSD為0.9%(n=5)，見表2。

2.9.2 不溶性微粒數(shù)測(cè)定：按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備配伍溶液，參照《中華人民共和國(guó)藥典：四部》(2015年版)通則中“不溶性微粒檢查法”，采用光阻法，使用GWF-8JA微粒檢測(cè)儀測(cè)定配伍溶液在室溫條件下放置0、1、2、3、4及5 h后配伍溶液中不溶性微粒的數(shù)量。結(jié)果顯示，5 h內(nèi)，配伍溶液中≥10 μm和≥25 μm的微粒數(shù)均無明顯變化，且符合《中華人民共和國(guó)藥典》(2015年版)規(guī)定[15]，見表2。

2.9.3 伏立康唑含量測(cè)定：在室溫條件下于0、1、2、3、4及5 h分別精密量取1.0 ml配伍溶液，置于100 ml容量瓶中，同時(shí)分別加入內(nèi)標(biāo)溶液1.0 ml，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖。以0 h伏立康唑含量為100%，計(jì)算各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的相對(duì)含量。結(jié)果顯示，5 h內(nèi)配伍液中伏立康唑的含量無明顯變化，RSD為1.8%(n=5)，見表2。

表2 5 h內(nèi)果糖配伍溶液外觀、pH、不溶性微粒數(shù)及藥物含量變化(n=5)Tab 2 Changes of appearance of solution, pH, the number of insoluble particle and drug content of fructose mixture solution within 5 hours (n=5)

3 討論

在優(yōu)選流動(dòng)相配比時(shí)發(fā)現(xiàn)，隨著流動(dòng)相pH的增加，伏立康唑及內(nèi)標(biāo)酮康唑色譜峰形逐漸變好，拖尾情況逐漸得到改善，最終選擇流動(dòng)相的pH為6.5，可滿足伏立康唑含量的分析測(cè)定。相對(duì)于外標(biāo)法，內(nèi)標(biāo)法可避免因樣品前處理及進(jìn)樣體積誤差影響測(cè)定結(jié)果。

國(guó)產(chǎn)注射用伏立康唑的藥品說明書規(guī)定其滴注濃度在2～5 mg/ml范圍內(nèi)，故本研究使用果糖注射液100 ml稀釋200 mg的伏立康唑，配伍液的最終質(zhì)量濃度為2 mg/ml，符合藥品說明書的規(guī)定。

注射用伏立康唑?yàn)闊o菌凍干粉末，因此，從微生物學(xué)的角度，藥品稀釋后必須立即使用；靜脈制劑最終應(yīng)配置成含量為2～5 mg/ml的溶液，滴注時(shí)間1～2 h。因此，本研究考察了藥品配伍5 h內(nèi)的穩(wěn)定性。在配伍后5 h內(nèi)藥物含量均在0 h藥物含量的±5%內(nèi)，變化不明顯，對(duì)臨床應(yīng)用無影響。

伏立康唑與果糖注射液配伍后，5 h內(nèi)溶液均為無色透明液體，澄明度良好，未見氣泡生成，未發(fā)生渾濁；溶液中不溶性微粒數(shù)目符合《中華人民共和國(guó)藥典：四部》(2015年版)相關(guān)規(guī)定[15]；pH穩(wěn)定在3.72～3.79之間，未發(fā)生明顯變化；藥物含量無顯著變化，且無其他色譜峰產(chǎn)生。

綜上所述，配伍溶液在5 h內(nèi)性質(zhì)較為穩(wěn)定，未發(fā)生明顯的物理化學(xué)變化，提示該配伍是可行的，可用于需以果糖注射液作為溶劑的注射用伏立康唑臨床治療方案中。

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