小鼠耳蝸血管紋血-迷路屏障免疫組織化學(xué)研究

塞娜 張桐 吳軍 韓維舉

解放軍總醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科（北京100853）

血管紋是耳蝸外側(cè)壁的重要組成部分，位于蝸管外側(cè)壁，是一種血管化了的上皮組織。由與內(nèi)淋巴直接接觸的邊緣細(xì)胞(marginal cell)、靠近螺旋韌帶的基底細(xì)胞(basal cell)、位于二者之間的中間細(xì)胞(intermediate cell)以及毛細(xì)血管網(wǎng)等成分組成。血管紋在維持耳蝸內(nèi)穩(wěn)態(tài)、產(chǎn)生耳蝸內(nèi)電位（EP）、參與內(nèi)淋巴液形成以及K+的分泌與循環(huán)等方面有著重要作用。近幾年，有關(guān)血管紋上血-迷路屏障（blood-labyrinth barrier,BLB）的功能及病理生理學(xué)研究得到越來越多的關(guān)注[1,2]，我們利用免疫組織化學(xué)、免疫熒光染色技術(shù)對血管紋的細(xì)胞及結(jié)構(gòu)進(jìn)行標(biāo)記，詳細(xì)觀察血管紋三層細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征，特別關(guān)注血-迷路屏障各組成部分的結(jié)構(gòu)特征，為今后的相關(guān)研究提供全面的形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗動物

年齡在6-8周的C57BL/6J小鼠15只，出生后0-2天（P0-2）小鼠5只，出生后4-5天（P4-5）小鼠5只，雌雄不限，由解放軍總醫(yī)院實(shí)驗動物中心提供。

1.2 血管紋解剖分離

耳蝸標(biāo)本事先用4%多聚甲醛灌流處理，4℃冰箱內(nèi)固定過夜；取出耳蝸后，于室溫0.01M的PBS溶液中進(jìn)行操作，在解剖顯微鏡觀察下用刀片自圓窗和卵圓窗外緣連線下方切開，使耳蝸與前庭分開；用鑷子自耳蝸背側(cè)小心去除骨質(zhì)直至底轉(zhuǎn)完整暴露，可看到骨壁內(nèi)側(cè)血管網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)——血管紋；輕輕分離并取出整個蝸軸，找到底轉(zhuǎn)勾突部分，將游絲鑷插入螺旋韌帶與血管紋之間，沿耳蝸螺旋走向輕抬游絲鑷尖將整個血管紋剔除下來，最后用細(xì)鉤針小心撕除附著于血管紋邊緣的前庭膜。

1.3 血管紋細(xì)胞骨架蛋白F-actin的熒光染色

將用無水乙醇配制好的羅丹明標(biāo)記鬼筆環(huán)肽（phalloidin）貯存液與0.01M的PBS按照1:20配制成工作液。（1）固定好的標(biāo)本使用PBS洗3遍。（2）使用10%羊血清室溫下封閉30min。（3）傾去羊血清，使用配制好的phalloidin工作液避光染色30min。（4）室溫下用PBS漂洗10min×3次。（5）用含DAPI（標(biāo)記細(xì)胞核）的熒光封片劑封片，制備組織鋪片。

1.4 細(xì)胞緊密連接免疫熒光染色

（1）固定好的標(biāo)本用PBS洗3遍。（2）用0.25%的Triton通透30min后，PBS洗滌5min×3遍。（3）10%羊血清室溫下封閉30min。（4）傾去羊血清，使用PBS按1：50稀釋的抗ZO-1兔多克隆抗體（陰性對照以等量PBS代替一抗），放入4℃冰箱孵育過夜。（5）PBS洗滌5min×3遍。（6）將標(biāo)本移至1：200稀釋的Alexa Fluor 568羊抗兔IgG抗體中，室溫條件下避光孵育1小時后，PBS洗滌15min×3遍。（8）用含DAPI（標(biāo)記細(xì)胞核）的熒光封片劑封片，制備組織鋪片。

1.5 中間細(xì)胞層免疫熒光染色

步驟（1）-（3）同上。（4）傾去羊血清，使用兔抗-Desmin抗體（1：100）、兔抗F4/80單克隆抗體（1:200）（陰性對照以等量PBS代替一抗），放入4℃冰箱孵育過夜。（5）PBS洗滌5min×3遍。（6）將標(biāo)本移至1：100稀釋的Alexa Fluor 568羊抗兔IgG抗體、Alexa Fluor 488羊抗小鼠IgG抗體、Alexa Fluor 647 GS-IB4中，室溫條件下避光孵育1小時后，PBS洗滌15min×3遍。（7）用含DAPI（標(biāo)記細(xì)胞核）的熒光封片劑封片，制備組織鋪片。

1.6 激光掃描共聚焦顯微鏡觀察

激光共聚焦掃描OLYMPUS FV1000-光譜掃描型-(倒置顯微鏡IX81)設(shè)置熒光標(biāo)本的激發(fā)光波長（DAPI、488nm、568nm、647nm），選擇放大倍數(shù)20倍或60倍的物鏡，逐層掃描標(biāo)本。

2 結(jié)果

出生后4天內(nèi)的小鼠外側(cè)壁血管紋和螺旋韌帶無法分開，4天后可將兩層組織分離，完整剝離的小鼠血管紋組織呈自然彎曲狀態(tài)、有一定韌性（圖1），底轉(zhuǎn)的勾突（hook）區(qū)域?qū)挻蟪噬谞?，勾突稍向上與底轉(zhuǎn)相接處稍縮窄（圖5,6）。未經(jīng)心內(nèi)灌流動物的血管紋由于毛細(xì)血管內(nèi)血液存在，呈淡紅半透明狀，邊緣界限清晰，自底轉(zhuǎn)到頂轉(zhuǎn)寬度逐漸變窄。

2.1 邊緣細(xì)胞及基底細(xì)胞形態(tài)

圖1 光學(xué)顯微鏡下完整小鼠血管紋Fig.1 Intact mouse stria vascularis under microscope

phalloidin染色細(xì)胞骨架F-actin以及ZO-1染色緊密連接蛋白，觀察到血管紋邊緣細(xì)胞呈近圓球形，細(xì)胞間緊密相接如城墻狀致密排列，層掃觀察其剖面呈近圓形的多邊形，形狀較規(guī)則，耳蝸各轉(zhuǎn)的邊緣細(xì)胞大小基本一致。近螺旋凸處的細(xì)胞形態(tài)與其余部位明顯不同，該處細(xì)胞呈細(xì)長不規(guī)則多邊形。

基底細(xì)胞與螺旋韌帶相接，位于血管紋的基底部，形態(tài)相對不規(guī)則，多為扁平長形呈近似紡錘狀，細(xì)胞之間排列緊密。

2.2 中間細(xì)胞形態(tài)及毛細(xì)血管網(wǎng)

致密的毛細(xì)血管網(wǎng)貫穿血管紋全程（圖5A），底轉(zhuǎn)與頂轉(zhuǎn)毛細(xì)血管管徑基本一致，頂轉(zhuǎn)較底轉(zhuǎn)血管密度稍稀疏（圖5B、C）。毛細(xì)血管周圍的周細(xì)胞（PC），是一類環(huán)繞在內(nèi)皮細(xì)胞表面的可收縮細(xì)胞，與血管外壁緊密接觸，與內(nèi)皮細(xì)胞由基底膜共同包被，如劍鞘樣結(jié)構(gòu)伴隨毛細(xì)血管走形，一起構(gòu)成了微血管和組織間隙的屏障（圖6）。

圖5 血管紋毛細(xì)血管網(wǎng)形態(tài)觀察。GS-IB4標(biāo)記毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞（紅色）。（A）完整血管紋毛細(xì)血管網(wǎng)，寬度自頂轉(zhuǎn)至底轉(zhuǎn)逐漸變窄。比例尺：250μm。（B）和(C）分別為底轉(zhuǎn)和頂轉(zhuǎn)毛細(xì)血管，可見底轉(zhuǎn)寬度可為頂轉(zhuǎn)2-3倍左右，底轉(zhuǎn)血管密度稍低于頂轉(zhuǎn)。Fig.5 Morphological observation of capillary network of stria vascularis.GS-IB4 marked capillary endothelial cells(red).(A)An intact stria vascular capillary network with a gradually narrowing width from top to bottom.(B)and(C),respectively,for the bottom and apical capillaries,showing that the bottom section can be about 2-3 times the apical turn,the capillary density in bottom turn is slightly lower than the apical turn.

圖2 邊緣細(xì)胞骨架形態(tài)結(jié)構(gòu)。（A）細(xì)胞骨架由phalloidin標(biāo)記（紅色）。（B）細(xì)胞核由DAPI標(biāo)記（藍(lán)色）?？梢娺吘壖?xì)胞形狀較規(guī)則、排列緊密、大小基本一致，核呈近圓形，而近螺旋凸處的細(xì)胞移行區(qū)（白色箭頭），其形態(tài)與其他區(qū)域完全不同，呈細(xì)長的多邊形。比例尺：30μm。Fig.2 Morphology of the Marginal cells.(A)The cytoskeleton F-actin is marked by phalloidin(red).(B)Nuclei labeled by DAPI(blue).It can be seen that the shape of the marginal cells is regular,closely arranged,and the size is similar,the nucleus is nearly round,and the cells transition zone(white arrow)are completely different from other regions.

圖3 緊密連接蛋白標(biāo)記邊緣細(xì)胞觀察細(xì)胞形態(tài)。（A）緊密連接由ZO-1標(biāo)記（紅色），（B）細(xì)胞核由DAPI標(biāo)記（藍(lán)色）。緊密連接呈連續(xù)線性表達(dá)，形態(tài)與細(xì)胞骨架類似。Fig.3 Tight junction protein labeled marginal cells to observe cell morphology.(A)Tight junctions are labeled with ZO-1(red),(B)Nuclei are labeled with DAPI(blue).The tight junctions are continuous and linear and their morphology is similar to which of the cytoskeleton.

基底細(xì)胞層位于血管紋最外側(cè)，緊鄰螺旋韌帶，該層細(xì)胞呈扁平長型，連成一片，細(xì)胞間連接以緊密連接蛋白（圖4）。

圖4 緊密連接標(biāo)記觀察基底細(xì)胞形態(tài)。（A）緊密連接由ZO-1標(biāo)記（紅色），（B）細(xì)胞核由DAPI標(biāo)記（藍(lán)色）。基底細(xì)胞呈扁平型，核呈橢圓形，緊密連接蛋白表達(dá)較彌散。Fig.4 The basal cell morphology was observed by a tight junction marker.(A)Tight junctions are labeled with ZO-1(red),(B)Nuclei are labeled with DAPI(blue).The basal cells are flat and the nucleus is oval.The expression of tight junction proteins is more diffuse.

圖6 毛細(xì)血管網(wǎng)及周細(xì)胞形態(tài)。（A）Desmin標(biāo)記周細(xì)胞（綠色）。（B）GS-IB4標(biāo)記毛細(xì)血管。周細(xì)胞呈扁長橢圓形緊貼于血管壁上，包裹血管。Fig.6 Capillary network and pericyte morphology.(A)Desmin labeled pericytes(green).(B)GS-IB4 marker capillaries.Pericytes are oval in shape and cling to blood vessel wall and enclose blood vessels.

中間細(xì)胞位于邊緣細(xì)胞和基底細(xì)胞之間，目前認(rèn)為其主要的成分是毛細(xì)血管周黑色素樣巨噬細(xì)胞（Perivascular-residentmelanocyte-like macrophage，PVM/Ms)。PVM/Ms是在毛細(xì)血管周圍的一種兼具巨噬細(xì)胞和黑色素細(xì)胞特征的細(xì)胞。形態(tài)上類似星形膠質(zhì)細(xì)胞和視網(wǎng)膜神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，推測其應(yīng)有類似星形膠質(zhì)細(xì)胞之于血-腦屏障，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞之于血-視網(wǎng)膜屏障的作用。該細(xì)胞伴隨毛細(xì)血管周圍分布于血管紋全程（圖7），其形態(tài)大多為樹枝狀，胞體不與毛細(xì)血管直接接觸，通過胞體伸出的多個胞漿突觸（圖7,8）與毛細(xì)血管壁接觸，將毛細(xì)血管包裹起來（圖8,9）。Fig.8 Capillary network and PVM/Ms morphology.(A)F4/80 marks PVM/Ms(green).(B)GS-IB4 marker capillaries(red).PVM/Ms are distributed around the capillaries in dendritic shape with a certain distance from the vessels,and contact with the capillaries by the process.

2.3 血-迷路屏障的組成

血-迷路屏障（BLB）由血管紋毛細(xì)血管血管內(nèi)皮細(xì)胞、周細(xì)胞（PC）、血管周巨噬細(xì)胞（PVMs）等組成。周細(xì)胞位于兩層基膜之間緊貼毛細(xì)血管壁伴行（圖6,9），PVMs從胞體伸出突起與血管壁緊密接觸將血管包裹起來（圖7,8,9），這些結(jié)構(gòu)以細(xì)胞間的緊密連接為基礎(chǔ)，共同構(gòu)成能夠選擇性阻擋大分子物質(zhì)自由出入耳蝸的血-迷路屏障。

3 討論

3.1 小鼠血管紋解剖特點(diǎn)

圖7 完整血管紋中間細(xì)胞形態(tài)。F4/80標(biāo)記PVM/Ms細(xì)胞Fig.7 Intermediate cells in an intact stria vascularis.F4/80 labeled PVM/Ms cells.

圖8 毛細(xì)血管網(wǎng)及PVM/Ms細(xì)胞形態(tài)。（A）F4/80標(biāo)記PVM/Ms（綠色）。（B）GS-IB4標(biāo)記毛細(xì)血管（紅色）。PVM/Ms呈樹枝狀分布于毛細(xì)血管周圍，胞體與血管有一定距離，通過突起與毛細(xì)血管壁接觸。

圖9 毛細(xì)血管、周細(xì)胞及PVM/Ms形態(tài)觀察。F4/80標(biāo)記PVM/Ms（綠色），GS-IB4標(biāo)記毛細(xì)血管（藍(lán)色），Desmin標(biāo)記周細(xì)胞（紅色）。周細(xì)胞緊貼毛細(xì)血管壁伴行，PVM通過胞質(zhì)突起與血管壁緊密接觸使得血管被包裹在突觸套中。Fig.9 Morphological observation of capillaries,pericytes,and PVM/Ms.F4/80 labeled PVM/Ms(green),GS-IB4 labeled capillaries(blue),Desmin labeled pericytes(red).The pericytes are closely attached to the wall of the capillaries.The PVMs are in close contact with the vessel wall through the process so that the vessels are wrapped in the synaptic sleeves.

小鼠血管紋形態(tài)結(jié)構(gòu)與人類基本相同，但其發(fā)育與人類不同，據(jù)Bibas報道，人類胚胎發(fā)育至17-18周時血管紋開始出現(xiàn)典型的三層細(xì)胞結(jié)構(gòu)，21周后形態(tài)既接近成人的結(jié)構(gòu)[3]，即人類在出生前血管紋的形態(tài)功能就已基本成熟，而小鼠在出生時底轉(zhuǎn)才可以辨別出血管紋的三層細(xì)胞[4]。我們解剖P0-P2小鼠的外側(cè)壁，可在顯微鏡下觀察到外側(cè)壁上已有淡紅色的血管網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，但血管紋和螺旋韌帶之間難以分離；P4-5小鼠的血管紋可完整與螺旋韌帶分離。表明剛出生的小鼠血管紋雖已具有血管網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，但其形態(tài)、功能仍不成熟，需要進(jìn)一步發(fā)育成熟。解剖觀察5只小鼠發(fā)現(xiàn)，出生4天后的小鼠血管紋均可完整與螺旋韌帶分離，形態(tài)結(jié)構(gòu)與成年鼠基本一致。研究者在對沙鼠耳蝸外側(cè)壁毛細(xì)血管網(wǎng)發(fā)育的研究中發(fā)現(xiàn)，出生后0天的沙鼠螺旋韌帶處的毛細(xì)血管網(wǎng)已經(jīng)形成，之后3-9天毛細(xì)血管網(wǎng)逐漸發(fā)展分化為螺旋韌帶和血管紋兩層，出生后第9天血管紋處的毛細(xì)血管網(wǎng)和螺旋韌帶分開，耳蝸外側(cè)壁兩層毛細(xì)血管網(wǎng)結(jié)構(gòu)趨于成熟[5]，這與小鼠血管紋解剖結(jié)果類似，都是出生后才發(fā)育成熟。

3.2 血管紋邊緣細(xì)胞和基底細(xì)胞特點(diǎn)

邊緣細(xì)胞與中階內(nèi)淋巴液直接接觸，本研究觀察到邊緣細(xì)胞（除近螺旋凸處細(xì)胞移行區(qū)外）細(xì)胞呈近圓形的多邊形，細(xì)胞間排列緊密，由緊密連接蛋白相互結(jié)合，膜表面其結(jié)構(gòu)類似城墻，而這種圓球形的表面的排列方式被認(rèn)為可在一定面積下容納最大的細(xì)胞數(shù)量[6]，使得內(nèi)淋巴液與血管紋內(nèi)液體、血液分隔開來。邊緣細(xì)胞可將紋內(nèi)間隙的K+轉(zhuǎn)移至胞漿內(nèi)，K+再通過鉀離子通道（KCNQ1,KCNE1)進(jìn)入內(nèi)淋巴，以此維持內(nèi)淋巴液中高K+濃度（平均145-157mM）。

基底細(xì)胞層位于血管紋最外側(cè)，緊鄰螺旋韌帶，與螺旋韌帶間無基底膜相隔，該層細(xì)胞呈扁平型，連成一片，細(xì)胞間連接以緊密連接蛋白，其作用主要是構(gòu)成血管紋與螺旋韌帶間的屏障。有研究表明，緊密連接蛋白Claudin-11是基底細(xì)胞上構(gòu)成屏障結(jié)構(gòu)的重要成分，Claudin-11缺陷小鼠具有先天性聽力缺失[7]。

3.3 血管紋中間細(xì)胞及血-迷路屏障特點(diǎn)

內(nèi)耳的穩(wěn)態(tài)對于維持內(nèi)耳功能和正常的聽功能十分重要。內(nèi)耳液體穩(wěn)態(tài)的維持依賴于穩(wěn)定的血液供應(yīng)、離子轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)和完整的血-迷路屏障[8]。血管紋的毛細(xì)血管網(wǎng)平行于邊緣細(xì)胞和基底細(xì)胞，穿行于中間細(xì)胞的間隙，毛細(xì)血管被邊緣細(xì)胞和基底細(xì)胞的突起所包圍，緊密連接，在血液循環(huán)和血管紋內(nèi)空間之間存在一個嚴(yán)格的、不允許擴(kuò)散活動發(fā)生的屏障，類似于血-腦屏障，故稱血-迷路屏障。傳統(tǒng)的觀點(diǎn)認(rèn)為血-迷路屏障由內(nèi)皮細(xì)胞和其周圍的基底膜組成，內(nèi)皮細(xì)胞之間通過緊密連接彼此相連，形成了一個濾過屏障，該屏障能夠選擇性地阻止大部分血源性物質(zhì)進(jìn)入耳內(nèi)，保護(hù)聽覺器官免受系統(tǒng)性影響。而在近期的研究中發(fā)現(xiàn)，血管紋中間細(xì)胞層還含有大量的周細(xì)胞（PC）和血管周圍巨噬細(xì)胞（PVMs），它們和內(nèi)皮細(xì)胞（EC）相互靠近并互相作用，共同構(gòu)成了血-迷路屏障。血管紋毛細(xì)血管由內(nèi)皮細(xì)胞和基膜組成，自外輻射動脈分支后相互吻合、形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)走行于血管紋中部，被中間細(xì)胞及周細(xì)胞包圍（圖7,8,9），最終匯合流入后螺旋靜脈。由血管內(nèi)皮細(xì)胞、基底膜、周細(xì)胞、PVM/Ms（胞漿突起）等構(gòu)成血-迷路屏障（blood-labyrinth barrier,BLB)[9]，多種聽功能障礙性疾病與該屏障的破壞有關(guān)，如老年性聾，噪聲性聾[2,10]，自身免疫性聾等。

PVMs是一種兼具巨噬細(xì)胞和黑色素細(xì)胞性質(zhì)的細(xì)胞，存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)及視網(wǎng)膜等多種組織中，我們發(fā)現(xiàn)耳蝸血管紋中間層也存在這種細(xì)胞，顯微鏡明場可觀察到細(xì)胞內(nèi)黑色素顆粒存在，而白化的動物該細(xì)胞內(nèi)不含黑色素顆粒[6]。因此，PVM/Ms既表達(dá)巨噬細(xì)胞的表面標(biāo)志如F4/80、CD68、CD11b、CD45等，又可表達(dá)Kir4.1、GST等黑素細(xì)胞的表面標(biāo)志[9]。而內(nèi)耳其他部位，如螺旋韌帶、基底膜，并未觀察到這種兼性細(xì)胞，僅存在單純的巨噬細(xì)胞。PVM/Ms形態(tài)上類似星形膠質(zhì)細(xì)胞和視網(wǎng)膜神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，其足突含有豐富的線粒體和囊泡，與內(nèi)皮細(xì)胞、周細(xì)胞交織在一起，并與毛細(xì)血管壁相接觸（圖7,8,9），提示其應(yīng)有類似星形膠質(zhì)細(xì)胞之于血-腦屏障（blood-brain barrier，BBB）、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞之于血-視網(wǎng)膜屏障的作用，PVM/Ms缺失后導(dǎo)致緊密連接破壞、屏障發(fā)生滲漏，引起組織水腫[9]。研究認(rèn)為中間細(xì)胞層承擔(dān)維持EP和分泌K+的主要作用，哺乳動物正常耳蝸內(nèi)電位80-100mV，由內(nèi)淋巴中K+產(chǎn)生，是感受器電流最主要的驅(qū)動力[11]。mitf基因缺陷動物由于血管紋中間細(xì)胞缺失，EP可降至0-18mV,并引起繼發(fā)的毛細(xì)胞損傷和缺失[12]，此時內(nèi)淋巴液中K+濃度從145mV降低至5mV[13]；反之，毛細(xì)胞的損傷或死亡則不會引起血管紋結(jié)構(gòu)和功能的破壞。

周細(xì)胞（PC）廣泛分布于微血管，是一類環(huán)繞在內(nèi)皮細(xì)胞表面的可收縮細(xì)胞，電鏡觀察發(fā)現(xiàn)周細(xì)胞鑲嵌于血管基底膜上，周細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞由基底膜共同包被，一起構(gòu)成了微血管和組織間隙的屏障，是維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的重要因素[14]。周細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞在微血管的基底膜上相互靠近，通過一系列的信號通路互相作用，進(jìn)行信號整合，促進(jìn)細(xì)胞的增殖、分化、成熟，缺乏周細(xì)胞可導(dǎo)致毛細(xì)血管管徑異常增大、通透性增加[14]。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的研究中發(fā)現(xiàn)周細(xì)胞是神經(jīng)血管單元（NVUs）的重要細(xì)胞成分，具有多種功能，在腦-血流屏障的發(fā)育成熟和維持方面具有重要作用[15]。Bell等[16]報道周細(xì)胞隨年齡增長進(jìn)行性丟失，損害腦灌注，干擾血管活動，導(dǎo)致病理性血腦屏障滲漏增加，引起神經(jīng)元損害、學(xué)習(xí)障礙、神經(jīng)系統(tǒng)退化和神經(jīng)炎。我們發(fā)現(xiàn)耳蝸外側(cè)壁毛細(xì)血管網(wǎng)含有數(shù)量眾多的周細(xì)胞（圖6,9），與血管紋毛細(xì)血管緊密接觸，伴隨著血管全程走行。透射電鏡顯示在中間細(xì)胞層基底膜缺如的區(qū)域，周細(xì)胞和通過縫隙連接與內(nèi)皮細(xì)胞相接觸[6]。目前的研究發(fā)現(xiàn)在血管紋和螺旋韌帶微血管網(wǎng)中的周細(xì)胞存在形態(tài)學(xué)差異，螺旋韌帶上的周細(xì)胞表達(dá)相關(guān)蛋白標(biāo)志物包括α-SMA、結(jié)蛋白Desmin、原肌球蛋白等，而血管紋上的周細(xì)胞中只顯示結(jié)蛋白Desmin陽性，不含有收縮性蛋白α-SMA和原肌球蛋白[17]，研究者認(rèn)為周細(xì)胞在螺旋韌帶的微血管中可能有控制局部血流的作用，而血管紋處的周細(xì)胞對維持血-迷路屏障的結(jié)構(gòu)和功能具有重要作用。但由于周細(xì)胞具有形態(tài)、生化和生理上的異質(zhì)性，對于耳蝸外側(cè)壁上周細(xì)胞的大部分生理功能及其在耳蝸損傷中的作用都有待進(jìn)一步研究。

血管內(nèi)皮細(xì)胞之間，邊緣細(xì)胞之間和基底細(xì)胞之間均為緊密連接(tight junction，TJs)。TJs中最重要的是跨膜蛋白Occludin與胞質(zhì)附著蛋白ZO家族(zonula Occludens protein)及細(xì)胞內(nèi)與其相連的細(xì)胞骨架蛋白。occludin及ZO-1相互連接共同調(diào)節(jié)細(xì)胞間通透性[18]，其表達(dá)和分布上調(diào)可使血管通透性降低，ZO-1、Occludin是檢測細(xì)胞及血管屏障結(jié)構(gòu)和功能的良好指標(biāo)[19,20]。有研究表明，噪聲暴露后內(nèi)耳中基質(zhì)金屬蛋白酶升高，破壞細(xì)胞間緊密連接蛋白，ZO-1、Occludin表達(dá)下調(diào)使得毛細(xì)血管通透性增加、血-迷路屏障破壞，是聲損傷引起聽力下降的重要機(jī)制之一[1,21,22]。

研究表明，BLB的通透性要低于BBB，靜脈注射示蹤劑TMPA 90分鐘后，在腦脊液中測得藥物濃度為14.3%，而在前庭階和鼓階的外淋巴中測得其濃度分別是6.3%和3.7%[23]。但慶大霉素等藥物可穿過BLB卻不能穿過BBB[24]，因此可見，血-迷路屏障對液體通透的限制比血-腦屏障更大，因為血管紋內(nèi)的飲液小泡的密度要低一些，并且血-迷路屏障對Na+、Cl-和Ca2+的通透性較其他組織屏障更低[25]。同血腦屏障一樣，BLB的存在對于維持內(nèi)耳正常功能方面起到重要作用，同時，也為藥物治療內(nèi)耳疾病帶來了障礙。耳蝸局部的給藥，如圓窗膜藥物注射、耳蝸中階藥物注射等，還均處于動物模型研究階段，也由于其操作難度大、操作本身會造成聽力損傷等，目前很難應(yīng)用于臨床。而靜脈藥物注射，如若能夠研究出突破血-迷路屏障、靶向?qū)⒋蠓肿铀幬镞f送到內(nèi)耳的技術(shù)，將大大提高目前治療內(nèi)耳疾病的效果。

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