C-met蛋白在食管癌組織中的表達(dá)及其與臨床特征的關(guān)系

陳焱，宋小平，湯小虎，葉博

1北京新里程腫瘤醫(yī)院有限公司外科，北京 100169

2清華大學(xué)第一附屬醫(yī)院胸外科，北京 100081

食管癌是消化系統(tǒng)高發(fā)腫瘤之一，全世界每年約有30萬人死于本病。中國是食管癌高發(fā)區(qū)，年均死亡例數(shù)約10萬，并且男性患者多于女性，年齡集中于40歲以下[1]。臨床尚未明確食管癌發(fā)病機(jī)制，但已有研究證實(shí)，癌基因的活化、表達(dá)與本病密切相關(guān)[2]。肝細(xì)胞生長因子受體（C-met）蛋白是一種具有自主磷酸化活性的蛋白，是由一個(gè)α亞基和一個(gè)β亞基組成的異二聚體[3]。研究顯示，正常細(xì)胞的C-met表達(dá)情況與腫瘤細(xì)胞的C-met表達(dá)情況存在顯著差異，提示C-met可能參與了腫瘤的發(fā)生發(fā)展[4-5]。為探究C-met蛋白在食管癌組織中的表達(dá)及其與臨床特征的關(guān)系，本研究選取80例食管癌組織標(biāo)本及其癌旁組織標(biāo)本進(jìn)行了如下研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年1月至2017年3月北京新里程腫瘤醫(yī)院手術(shù)后獲取的80例食管癌組織標(biāo)本及其癌旁組織標(biāo)本。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)病理學(xué)診斷確診為食管癌；②符合第7版食管癌TNM分期標(biāo)準(zhǔn)[6]；③患者年齡﹤80歲；④在北京新里程腫瘤醫(yī)院實(shí)施外科手術(shù)治療，術(shù)中成功獲取食管癌組織標(biāo)本及癌旁組織標(biāo)本。排除標(biāo)準(zhǔn)：①手術(shù)前已經(jīng)實(shí)施放化療；②合并其他部位惡性腫瘤；③患者各項(xiàng)臨床、病理學(xué)資料不詳。80例患者中，男47例，女33例；年齡38～77歲，平均（55.7±10.0）歲；病灶直徑﹥3 cm 50例，≤3 cm 30例；大體分型：浸潤型11例，潰瘍型33例，髓質(zhì)型26例，蕈傘型10例；病變部位：食管上段14例，食管中段46例，食管下段20例；分化程度：高分化18例，中分化22例，低分化40例；TNM分期：Ⅰ期18例，Ⅱ期31例，Ⅲ期22例，Ⅳ期9例；發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移53例，未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移27例。

1.2 免疫組化檢測方法

將樣本連續(xù)切片后，進(jìn)行免疫組化檢測。將切片脫蠟至水，10 ml 3%過氧化氫封閉，8 ml檸檬酸緩沖液進(jìn)行抗原修復(fù)操作，反應(yīng)5 min，選用10%羊血清封閉10 min，加入一抗，4℃孵育過夜，取出后復(fù)溫30 min，加入二抗，反應(yīng)30 min，磷酸鹽緩沖液洗滌，脫水封片，鏡檢。

1.3 判定標(biāo)準(zhǔn)

免疫組化結(jié)果判定：C-met蛋白的陽性表達(dá)著色于細(xì)胞質(zhì)，呈黃色、棕黃色、褐色。①根據(jù)著色強(qiáng)度：無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，褐色、黑色為3分；②根據(jù)陽性細(xì)胞比例：陽性細(xì)胞所占比例≤10%為1分，陽性細(xì)胞所占比例11%～50%為2分，陽性細(xì)胞所占比例51%～75%為3分，陽性細(xì)胞所占比例＞75%為4分。兩種評(píng)分相乘總分﹤3分為“－”，3～5分為“+”，6～9分為“++”，﹥9分為“+++”；﹤3分為陰性，≥3分為陽性[6]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)及率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；以P﹤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 C-met蛋白陽性表達(dá)率的比較

食管癌組織中C-met蛋白陽性表達(dá)率為80.00%（64/80），高于癌旁組織的6.25%（5/80），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=88.702，P﹤0.05）。（表1、圖1）

表1 兩種組織標(biāo)本中C-met蛋白的表達(dá)情況

圖1 食管癌組織及癌旁組織中C-met蛋白陽性表達(dá)（免疫組化染色，×200）

2.2 食管癌組織中C-met蛋白陽性表達(dá)與患者臨床特征的關(guān)系

TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期、浸潤深度為T3～4期、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的食管癌患者的C-met蛋白陽性表達(dá)率高于TNM分期為Ⅰ+Ⅱ期、浸潤深度為T1～2期、未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的食管癌患者（P﹤0.05）；不同年齡、性別、腫瘤部位、分化程度、病灶直徑的食管癌患者C-met蛋白陽性表達(dá)率比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹥0.05）。（表2）

表2 食管癌組織中C-met蛋白陽性表達(dá)與患者臨床特征的關(guān)系[n（%）]

3 討論

C-met是原癌基因編碼的肝細(xì)胞生長因子（hepatocyte growth factor，HGF）受體，具有編碼酪氨酸激酶活性，主要表達(dá)于各種上皮細(xì)胞內(nèi)，可調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞侵襲性[7]。C-met與HGF可直接作用內(nèi)皮細(xì)胞，促使其增殖、遷移，還可通過增強(qiáng)血管生成因子的表達(dá)來增加血管生成[8]。相關(guān)研究已經(jīng)證實(shí)，腫瘤細(xì)胞可通過釋放白細(xì)胞介素-1（interleukin-1，IL-1）、成纖維細(xì)胞生長因子（fibroblast growth factor，F(xiàn)GF）以及血源性單核細(xì)胞分泌生長因子等來刺激鄰近成纖維細(xì)胞，促進(jìn)HGF、C-met表達(dá)并形成正反饋，導(dǎo)致腫瘤的生長、侵襲[9]。突變型C-met轉(zhuǎn)染NIH3T3細(xì)胞后，NIH3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化率大幅增高，提示C-met基因可通過促進(jìn)NIH3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化來促進(jìn)腫瘤形成[10]。C-met除與HGF相互結(jié)合形成生物效應(yīng)外，還可借助非HGF途徑激活，尤其是met過度表達(dá)的腫瘤細(xì)胞內(nèi)，C-met基因擴(kuò)增可促進(jìn)酪氨酸激酶激活，并促進(jìn)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化。部分已有的研究探討了C-met蛋白在食管癌組織中的異常表達(dá)，認(rèn)為高表達(dá)的C-met蛋白是促進(jìn)食管癌病情進(jìn)展的重要因素。

本研究中，食管癌組織中的C-met蛋白陽性表達(dá)率為80.00%，高于癌旁組織的6.25%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示C-met蛋白是食管癌的重要參與因子。已有研究表明，通過激活的RET及RAS基因轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞，可促使C-met過度表達(dá)，并增強(qiáng)HGF依賴性的腫瘤侵襲能力[11]。還有研究發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)染C-met基因可增強(qiáng)癌細(xì)胞的增殖速度，并提高C-met水平，促進(jìn)癌細(xì)胞的HGF敏感性，同時(shí)增強(qiáng)癌細(xì)胞侵襲性[12]。本研究中，TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期、浸潤深度為T3～4期、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的食管癌患者的C-met蛋白陽性表達(dá)率高于TNM分期為Ⅰ+Ⅱ期、浸潤深度為T1～2期、未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的食管癌患者，這表明C-met與食管癌的侵襲性密切相關(guān)，佐證了前述結(jié)論，提示C-met或可成為食管癌分期、浸潤以及轉(zhuǎn)移與否的檢測標(biāo)志物。C-met蛋白作用于食管癌發(fā)生發(fā)展的機(jī)制臨床尚未明確，但可能與以下幾點(diǎn)有關(guān)：①侵襲細(xì)胞C-met激活后，細(xì)胞外基質(zhì)將隨之降解，細(xì)胞外基質(zhì)蛋白水解相關(guān)分子及受體表達(dá)水平升高，腫瘤細(xì)胞侵襲能力增強(qiáng)[13]。②C-met與HGF結(jié)合后將激活結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因MACC1，而MACC1可與C-met啟動(dòng)子SPI位點(diǎn)結(jié)合，并促使其轉(zhuǎn)錄。MACC1還具有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞外基質(zhì)降解，調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)等能力[14]。有研究發(fā)現(xiàn)，C-met表達(dá)與食管癌患者預(yù)后有關(guān)，提示C-met可進(jìn)一步增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的惡性潛能，提高其活性及侵襲性[15]。本研究還發(fā)現(xiàn)，不同年齡、性別、腫瘤部位、分化程度、病灶直徑的食管癌患者C-met蛋白陽性表達(dá)率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明C-met蛋白水平與年齡、性別等因素?zé)o關(guān)。

本研究對(duì)80例食管癌組織標(biāo)本及其癌旁組織標(biāo)本內(nèi)的C-met蛋白陽性表達(dá)情況進(jìn)行了檢測，發(fā)現(xiàn)食管癌組織中的C-met蛋白陽性表達(dá)率升高，并且與腫瘤臨床分期、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，提示C-met或可作為食管癌分期、浸潤以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否的檢測指標(biāo)。

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