血清QSOX-1、GSN、AFP聯(lián)合檢測(cè)對(duì)原發(fā)性肝癌的診斷價(jià)值

宋曉婷，國(guó)嬌，譚順順，黃天壬，何雨，張春燕

(1 廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院，南寧530021；2 柳州市人民醫(yī)院；3 廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院)

目前臨床對(duì)原發(fā)性肝癌的早期篩查主要通過檢測(cè)血清腫瘤標(biāo)志物。甲胎蛋白(AFP)是最經(jīng)典的血清腫瘤標(biāo)志物之一，但其診斷原發(fā)性肝癌的敏感性為60%左右，且特異性有限[1]。因此，尋找敏感、特異的原發(fā)性肝癌血清腫瘤標(biāo)志物一直是近年研究熱點(diǎn)。本課題組前期應(yīng)用同位素標(biāo)記相對(duì)和絕對(duì)定量、液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜等蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，對(duì)廣西壯族自治區(qū)原發(fā)性肝癌高發(fā)地區(qū)的高危人群進(jìn)行動(dòng)態(tài)定量差異蛋白質(zhì)組學(xué)分析，篩選出了兩種差異性蛋白，即巰基氧化酶1(QSOX-1)、凝溶膠蛋白(GSN)[2]。后續(xù)研究在蛋白水平上對(duì)QSOX-1、GSN作為診斷原發(fā)性肝癌的分子生物標(biāo)志物進(jìn)行驗(yàn)證，初步認(rèn)定QSOX-1、GSN對(duì)原發(fā)性肝癌的診斷具有潛在價(jià)值[3]。本研究探討血清QSOX-1、GSN、AFP聯(lián)合檢測(cè)對(duì)原發(fā)性肝癌的診斷價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2015年10月～2016年1月廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院收治的原發(fā)性肝癌患者60例(肝癌組)，均符合《原發(fā)性肝癌診療規(guī)范》(2011年版)中的診斷標(biāo)準(zhǔn)，入院前未行任何抗腫瘤治療，并排除活動(dòng)性肝病、妊娠、生殖系胚胎源性腫瘤及轉(zhuǎn)移性肝癌。其中，男41例、女19例，年齡31～74(51.23±10.00)歲。同期選擇廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院收治的乙肝、肝硬化、肝膿腫等其他肝病患者60例(肝病組)，均根據(jù)臨床表現(xiàn)及實(shí)驗(yàn)室檢查、影像學(xué)檢查等明確診斷，并排除肝臟惡性腫瘤。其中，男43例、女17例，年齡33～77(48.60±9.42)歲，疾病類型：乙肝20例、肝硬化20例、肝膿腫10例、肝吸蟲病10例。同期另選在廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院體檢的健康志愿者60例(對(duì)照組)，男36例、女24例，年齡30～75(48.40±12.14)歲。三組性別、年齡具有可比性。本研究經(jīng)廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者或其家屬知情同意。

1.2 血清QSOX-1、GSN、AFP檢測(cè) 所有研究對(duì)象入組次日采集清晨空腹外周靜脈血5 mL，靜置2 h，1 000×g離心15 min，留取血清，-80 ℃冰箱保存。采用Multiskan MK3型酶標(biāo)儀、ELISA法檢測(cè)血清QSOX-1、GSN，采用羅氏Cobas e601型全自動(dòng)免疫分析儀、電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)血清AFP。所有操作嚴(yán)格按照試劑盒說明進(jìn)行。

1.3 血清QSOX-1、GSN、AFP單獨(dú)或聯(lián)合檢測(cè)診斷原發(fā)性肝癌的效能分析 分別繪制血清QSOX-1、GSN、AFP單獨(dú)檢測(cè)診斷原發(fā)性肝癌的受試者工作特征(ROC)曲線，確定血清QSOX-1、GSN、AFP單獨(dú)檢測(cè)診斷原發(fā)性肝癌的臨界值；血清QSOX-1、GSN、AFP聯(lián)合檢測(cè)診斷采用Binary Logistic回歸分析，產(chǎn)生各個(gè)體預(yù)測(cè)概率的新變量，得出ROC曲線，采用ROC曲線下面積(AUC)評(píng)價(jià)血清QSOX-1、GSN、AFP單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)對(duì)原發(fā)性肝癌的診斷效能。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以M(P25，P75)表示，多組比較采用Kruskal-WallisH檢驗(yàn)，組間兩兩比較采用Mann-Whitney秩和檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組血清QSOX-1、GSN、AFP水平比較 見表1。

表1 各組血清QSOX-1、GSN、AFP水平比較[M(P25，P75)]

注：與對(duì)照組比較，*P<0.01；與肝病組比較，#P<0.01。

2.2 血清QSOX-1、GSN、AFP單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)對(duì)原發(fā)性肝癌的診斷效能分析 ROC曲線分析顯示，血清QSOX-1、GSN、AFP單獨(dú)檢測(cè)診斷原發(fā)性肝癌的AUC分別為0.891、0.801、0.802，95%CI分別為0.846～0.935、0.736～0.867、0.729～0.874，P均<0.01。血清QSOX-1、GSN、AFP單獨(dú)檢測(cè)診斷原發(fā)性肝癌的最佳臨界值分別為26.192 pg/mL、100.567 ng/mL、9.500 ng/mL，此時(shí)三者診斷原發(fā)性肝癌的Youden指數(shù)分別為58.3%、53.3%、55.0%，敏感性分別為88.3%、70.0%、73.3%，特異性分別為70.0%、83.3%、81.7%。AFP+QSOX-1、AFP+GSN、QSOX-1+GSN、AFP+QSOX-1+GSN診斷原發(fā)性肝癌的AUC分別為0.911、0.848、0.895、0.918，95%CI分別為0.871～0.950、0.790～0.907、0.850～0.939、0.879～0.956，P均<0.01。此時(shí)，其診斷原發(fā)性肝癌的Youden指數(shù)分別為64.2%、59.2%、63.3%、65.8%，敏感性分別為88.3%、80.0%、85.0%、90.0%，特異性分別為75.8%、79.2%、78.3%、75.8%。

3 討論

影像學(xué)檢查及血清腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)是目前臨床早期篩查原發(fā)性肝癌的主要手段[4]。超聲檢查雖能發(fā)現(xiàn)病灶，但其檢出率過于依賴檢測(cè)儀器的敏感性，并要求影像科醫(yī)師具有豐富的經(jīng)驗(yàn)[5]。血清腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)具有取材簡(jiǎn)單、操作便捷、檢測(cè)費(fèi)用低等優(yōu)點(diǎn)，但由于受多種因素影響，其敏感性和特異性均不令人滿意。因此，探索更佳的血清腫瘤標(biāo)志物早期篩查原發(fā)性肝癌一直是臨床研究熱點(diǎn)。

蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)是現(xiàn)代生命科學(xué)研究的方法之一，如同位素標(biāo)記的相對(duì)和絕對(duì)定量技術(shù)、液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)，可較全面、整體地分析相關(guān)蛋白的組成、表達(dá)、修飾狀態(tài)，揭示蛋白功能與生命活動(dòng)規(guī)律。因此，通過蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)探尋敏感的腫瘤標(biāo)志物，可能是腫瘤發(fā)病機(jī)制研究的新路徑[6，7]。

QSOX-1是由TRX和ERV1融合而成的多結(jié)構(gòu)域蛋白，廣泛存在于消化系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)等高二硫鍵蛋白分泌組織，可催化蛋白硫醇氧化成二硫化物，參與細(xì)胞內(nèi)蛋白折疊過程。研究發(fā)現(xiàn)，敲除QSOX-1表達(dá)可抑制腎癌細(xì)胞增殖，提示QSOX-1可能具有癌基因作用[8]。有研究發(fā)現(xiàn)，QSOX-1高表達(dá)與胰腺癌、乳腺癌等惡性腫瘤的侵襲性有關(guān)，說明QSOX-1是與腫瘤侵襲性有關(guān)的蛋白分子[9～11]。Yano等[12]應(yīng)用吉非替尼治療胰腺癌時(shí)發(fā)現(xiàn)，血清QSOX-1表達(dá)升高，并認(rèn)為QSOX-1可能是治療胰腺癌潛在靶點(diǎn)之一。另有研究發(fā)現(xiàn)，QSOX-1高表達(dá)與腫瘤患者預(yù)后不良有關(guān)[13]。本課題組前期基于蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)研究發(fā)現(xiàn)，QSOX-1、GSN有可能是診斷原發(fā)性肝癌潛在的分子生物標(biāo)志物[2]。

GSN是一種鈣調(diào)節(jié)蛋白，屬于凝溶膠蛋白超家族，可參與肌動(dòng)蛋白絲的剪切、聚合、解聚，影響細(xì)胞骨架重排，同時(shí)與細(xì)胞凋亡、免疫、炎癥等有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，GSN具有參與腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)功能，其作用機(jī)制可能與PI3K、c-erb-2/EGFR、Ras-PI3K-Rac等信號(hào)通路有關(guān)[14]。王紹清等[15]通過抑制鼠源肝癌細(xì)胞Hca-F中GSN表達(dá)發(fā)現(xiàn)，GSN表達(dá)下調(diào)可降低鼠源肝癌細(xì)胞Hca-F的侵襲能力，提示GSN可能與肝癌發(fā)展有關(guān)。Deng等[16]研究發(fā)現(xiàn)，在肝癌組織中GSN高表達(dá)，其高表達(dá)與肝癌細(xì)胞增殖和侵襲相關(guān)。上述研究提示，GSN亦可能為診斷原發(fā)性肝癌潛在的分子生物標(biāo)志物。

本研究結(jié)果顯示，肝癌組、肝病組、對(duì)照組血清QSOX-1、GSN、AFP水平依次遞減，說明血清QSOX-1、GSN、AFP均與肝癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。本研究以ROC曲線的AUC及Youden指數(shù)作為診斷原發(fā)性肝癌效能的評(píng)價(jià)指標(biāo)，結(jié)果顯示，在單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)中，血清QSOX-1+GSN+AFP聯(lián)合檢測(cè)的AUC、Youden指數(shù)最佳，分別為0.918、65.8%；兩兩指標(biāo)(AFP+QSOX-1、AFP+GSN、QSOX-1+GSN)聯(lián)合檢測(cè)的AUC分別為0.911、0.848、0.895，Youden指數(shù)分別為64.2%、59.2%、63.3%；單獨(dú)(QSOX-1、GSN、AFP)檢測(cè)的AUC分別為0.891、0.801、0.802，Youden指數(shù)分別為58.3%、53.3%、55.0%。說明QSOX-1+GSN+AFP聯(lián)合檢測(cè)診斷原發(fā)性肝癌的效能優(yōu)于兩兩指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)及單獨(dú)檢測(cè)。敏感性和特異性分析發(fā)現(xiàn)，QSOX-1+GSN+AFP聯(lián)合檢測(cè)診斷原發(fā)性肝癌的敏感性最佳，其特異性達(dá)到75.8%。說明QSOX-1+GSN+AFP聯(lián)合檢測(cè)可降低原發(fā)性肝癌的漏診率及誤診率，提高診斷準(zhǔn)確性。

綜上所述，血清QSOX-1、GSN、AFP聯(lián)合檢測(cè)可提高對(duì)原發(fā)性肝癌的診斷敏感性，優(yōu)化診斷效能，對(duì)原發(fā)性肝癌的早期篩查具有一定參考價(jià)值。

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