減少超排供體羊無精卵的技術(shù)措施

董正德 佟桂芝 宋斌

摘要：針對我國肉羊良種化程度低、生產(chǎn)水平和繁殖技術(shù)水平低的現(xiàn)狀，從提高肉羊超數(shù)排卵的卵子人工授精率、優(yōu)質(zhì)胚胎采集率等方面入手提高肉羊胚胎移植效果。選擇提高了優(yōu)質(zhì)公（母）羊繁殖率，建立體內(nèi)胚胎高效生產(chǎn)：即從供（受）飼養(yǎng)管理、體超數(shù)排卵、人工授精率，并對內(nèi)羊產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)進行指導(dǎo)，解決我國肉羊生產(chǎn)率和良種化率低的問題，推進舍飼進程，同時緩解草畜矛盾，保持生態(tài)平衡。

關(guān)鍵詞：肉羊；超數(shù)排卵；無精卵；胚胎移植

中圖分類號：S826.3

文獻標識碼：A

文章編號：2095-9737（2018）05-0003-02

1 種公羊的選擇

對于有種公羊的養(yǎng)羊場，超數(shù)排卵時，種公羊的配種繁重。在質(zhì)量上要求品種優(yōu)良，系譜清楚，外貌特征符合品種要求，膘情中上等，健康，精液質(zhì)量好，性欲旺盛；在確定參配種公羊數(shù)量時，要根據(jù)所需配母羊的數(shù)量、血緣。即每一個血系中至少要有兩只以上主配公羊，并且公羊配種后要適當休息。

2 種公羊的保健

專人分群飼養(yǎng)，并保持穩(wěn)定。羊舍要干燥、清潔、有充足的光線。每天運動時間6h以上，距離為6～9 km。略快自然放牧均勻驅(qū)趕速度為宜。飲水、食鹽自由采食。供體羊超排時，公羊保證性欲旺盛、精液品質(zhì)優(yōu)良，供體母羊才能夠采集到優(yōu)質(zhì)受胎。性欲差的公羊，可以用睪酮或者類似物處理。在供體超排時，公羊比平時提高20%～30%營養(yǎng)標準，超排前2月開始。有優(yōu)質(zhì)牧場，自由采食和飲水，補飼全價精料、多汁飼料以及胡蘿卜。沒有放牧場，飼草料要全價、適口性好，易消化。最理想的飼草料是用全價料和優(yōu)質(zhì)牧草、青貯飼料等混合搭配飼喂。

3 供體母羊的選擇

健康，無生殖疾病，膘情適中，年老，身體過肥或過瘦的母羊超排時出現(xiàn)發(fā)情，但不排卵或排出的卵質(zhì)量差，人T授精后也只能是無精卵。供體母羊系譜清楚，健康，年齡2. 5—6歲，體格健壯，無空懷史。對所選擇的供體母羊提前進行傳染病檢疫，進行預(yù)防注射和體內(nèi)外寄生蟲的驅(qū)蟲。要注意檢出已經(jīng)妊娠母羊，產(chǎn)羔母羊必需產(chǎn)羔40天以后才能作為供體。

4 供體羊的飼養(yǎng)管理

在準備期的飼養(yǎng)管理包括飼喂、飲水、補鹽、運動、試情等內(nèi)容。對供體羊最好采取放牧與舍飼相結(jié)合的飼養(yǎng)管理方式，以利于供體羊均衡攝入所需營養(yǎng)物質(zhì)。有牧場的地區(qū)，采取放牧后補飼的辦法，補飼的精料分早、晚2次喂給。早晨補飼略少些。晚上略多些：全舍飼的羊，被動驅(qū)趕運動所需時間較短，在補飼精料量超過0. 75 kg時，一般早、中、晚三次補飼，但注意飼喂后1～2 h反芻時間里羊群要保持安靜。

5 試情公羊的選擇

要求性欲、身體健康狀況良好的本地公羊。試情羊與供體母羊數(shù)量比為1： 30。

6 用于超數(shù)排卵的激素選擇

國產(chǎn)激素類：FSH（促卵泡素）、LH（促黃體生成素）、PG（前列腺素）、CIDR（含孕激素陰道栓塞）。

進口激素類：可使用國外生產(chǎn)的同類優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。7激素劑量（注射總量/只）

FSH（國產(chǎn)）劑量：90～200 U。LH（國產(chǎn)）劑量：根據(jù)FSH的注射劑量，肌注80～120 U。

注：進口藥品參照其產(chǎn)品說明書確定劑量。

在母羊放入CIDR之日作為第o天，在放人CIDR的9—13天開始超排，在第6針注射FSH時取出CIDR。撤栓后13 h，用試情公羊，每12 h試情1次，發(fā)情供體羊發(fā)情12 h必須及時配種。采用本交或本交加人工授精相結(jié)合方法，連續(xù)配種2～3次，每次間隔12 h。采用人工授精技術(shù)進行配種時，保證供體羊撤栓后18～48 h內(nèi)輸精3次。可進行腹腔內(nèi)窺鏡子宮深部輸精，或?qū)Πl(fā)情超排母羊自然交配或常規(guī)人工輸精。

8 配種

8.1 供體羊發(fā)情鑒定

在第6次注射FSH時即對超排供體羊觀察發(fā)情。觀察時間：早晚各1次，每次不少于o.5h。觀察方法：系好試情布的試情公羊，放入超排供體母羊群中，每1只試情公羊可檢測30—40只供體母羊，母羊站立、并接受試情公羊爬跨，可以確定該供體母羊已發(fā)情，準確記錄供體母羊的發(fā)情時間。

8.2 適時輸精

進行第一次輸精的時間：自然發(fā)情的母羊在發(fā)情后24 h，誘導(dǎo)發(fā)情的母羊應(yīng)該在撤檢后54 h，發(fā)情母羊子宮內(nèi)輸精范圍在發(fā)情結(jié)束前2～3 h，即排卵前2～3 h，之后每隔12 h輸精1次。鮮精液活力在70%以上，每次人工輸精有效精子數(shù)不少于3×10 7，冷凍精液活力在35%以上，輸精次數(shù)2～3次。

8.3 人工授精技術(shù)

8. 3.1 人工授精前準備

在輸精前1 h，對公羊進行采精，要求采精地點安靜。檢查精液品質(zhì)，然后根據(jù)精子密度、活力稀釋，分裝到0.5 mL的吸管，有效精子數(shù)要求為7 000萬個。每側(cè)子宮內(nèi)輸精量0.25 mL。采精前對種公羊外生殖器清洗消毒。采精、精液稀釋、輸精用的器具嚴格滅菌、消毒。子宮頸輸精：母羊外陰部必須經(jīng)過清洗消毒。稀釋后的精液溫度要保持在25℃左右。用開膣器打開陰道找到子宮頸外口，將輸精器插入子宮頸外口不少于1 cm，注入定量精液。

8.3.2 腹腔內(nèi)窺鏡子宮內(nèi)輸精時間

在肉羊撤栓后48 h，利用腹腔鏡子宮內(nèi)輸精，能提高胚胎受精率、降低胚胎的退化率，能獲得高的受精率。對于超排羊來說，明顯好于常規(guī)子宮頸口人工授精和自然交配；在超排羊中自然交配或?qū)m頸輸精時常出現(xiàn)不受精的現(xiàn)象。肉羊?qū)m頸的卷繞結(jié)構(gòu)使精液很難精確到位，另外，同期發(fā)情和超數(shù)排卵處理本身對精子通過宮頸運輸有一定干擾作用，這對受精率和可移植胚胎的數(shù)量有一定影響。腹腔內(nèi)窺鏡技術(shù)的關(guān)鍵是適時輸精。LH峰出現(xiàn)的時間大約在去栓后26 h，排卵大約發(fā)生在CIDR取出后48～50 h，在未做超排處理和放入CIDR并做超排處理的肉羊中，從LH峰出現(xiàn)到排卵的時間大約是24 h。這說明在超排肉羊中腹腔內(nèi)窺鏡子宮內(nèi)輸精的最適時間受超排方案的影響。

8.3.3 子宮內(nèi)輸精部位

對子宮角前端、子宮角中端、子宮角末端和子宮角基部進行輸精操作時，存在以下技術(shù)差異：對于比較粗的子宮角末端及子宮角基部子宮內(nèi)輸精時，手術(shù)的切口相對較大，造成黏連的幾率也就增大，且傷口易受到感染；而手術(shù)切口較小的子宮角中部輸精，借助腹腔鏡可清晰地觀察到子宮角中部，且子宮鉗很方便將其牽拉輸精部位，對卵巢等損傷較小，傷口愈合快。研究證明，子宮角中部輸精，并且采用直接對雙側(cè)子宮角進行輸精。這樣就可以省去單側(cè)輸精時必須仔細觀察母羊兩側(cè)卵巢狀況，并且準確判斷是否有卵泡排卵等。

8.3.4 有效精子數(shù)

研究證明有效精子數(shù)輸入劑量在1×l07—4×107個之間時，胚胎受精率隨著輸精劑量增加而增加，在4×l07個時，胚胎的受精率最高。

8.3.5 冷凍后的注意事項

冷凍精液解凍后，在室溫條件下，停留時間越短越好，做到隨時解凍，隨時輸精。在進行子宮內(nèi)輸精操作時，解凍后的精液在室溫停留的時間最好不要超過30 min。

8.3.6 改變傳統(tǒng)輸精方法，采用腹腔內(nèi)窺鏡輸精

通過改進羊凍精稀釋液配方和凍精冷凍程序，利用腹腔內(nèi)窺鏡進行羊冷凍精液輸精，改變了傳統(tǒng)的子宮頸口輸精方法。突破了凍精配種的技術(shù)難題，使羊凍精配種情期受胎率由原來的（子宮頸輸精）33.5%，提高到73. 3%（腹腔鏡輸精），提高了39. 8%。

8.3.7 供體羊補加硒VE的處理

對供體羊開始超排時，注射硒 VE，直至配種結(jié)束，劑量為每天3 mL/只，方法是每天上午一次性分點肌肉注射。在飼養(yǎng)管理和激素處理相同的條件下，進行補加亞硒酸鈉VE和相同輸精方式試驗，對供體母羊排卵和受精率的影響。肌注亞硒酸鈉VE的受體母羊，每只平均沖胚11.5枚，顯著高于對照組（8.9枚）（P<0.01），且組內(nèi)各重復(fù)間差異不顯著（ P>O.05），可見，在配種前給母羊補充硒 VE對其排卵有明顯的影響。