• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    藍(lán)塘豬和長(zhǎng)白豬骨骼肌差異表達(dá)cis-NATs基因鑒定

    2018-05-14 10:25:35許月園齊曉龍候曄趙云霞欒宇周煥煥趙書紅李新云
    關(guān)鍵詞:長(zhǎng)白豬肌纖維骨骼肌

    許月園,齊曉龍,候曄,趙云霞,欒宇,周煥煥,趙書紅,2,李新云,2,3

    ?

    藍(lán)塘豬和長(zhǎng)白豬骨骼肌差異表達(dá)-NATs基因鑒定

    許月園1,齊曉龍1,候曄1,趙云霞1,欒宇1,周煥煥1,趙書紅1,2,李新云1,2,3

    (1華中農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)動(dòng)物遺傳育種與繁殖教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,武漢 430070;2生豬健康養(yǎng)殖協(xié)同創(chuàng)新中心,武漢 430070;3農(nóng)業(yè)部豬健康養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣西揚(yáng)翔股份有限公司,廣西貴港 537100)

    【目的】通過(guò)分析藍(lán)塘豬和長(zhǎng)白豬生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中品種間骨骼肌組織差異表達(dá)基因及順式天然反義轉(zhuǎn)錄本(-natural antisense transcripts,-NATs),并以此為基礎(chǔ)進(jìn)行整合分析,探索-NATs調(diào)控豬骨骼肌生長(zhǎng)發(fā)育的分子機(jī)理?!痉椒ā渴褂貌町惐磉_(dá)分析鑒定藍(lán)塘豬和長(zhǎng)白豬胚胎期35 d至出生后180 d共10個(gè)時(shí)間點(diǎn)品種間差異表達(dá)基因及-NATs(|log2FC|≥1且 FDR<0.01);然后通過(guò)功能富集分析注釋出差異表達(dá)基因及-NATs對(duì)應(yīng)的正義基因主要參與的GO生物學(xué)過(guò)程(<0.01)及KEGG通路(<0.05);再根據(jù)與-NATs相關(guān)表達(dá)的基因數(shù)目篩選出-NATs主要參與的GO生物學(xué)過(guò)程和KEGG通路,并根據(jù)通路間的相同基因數(shù)目對(duì)所有KEGG通路進(jìn)行整合;最后基于通路內(nèi)-NATs及其正義基因在品種間的差異表達(dá)倍數(shù)進(jìn)行通路可視化分析。【結(jié)果】在藍(lán)塘和長(zhǎng)白豬骨骼肌發(fā)育的10個(gè)時(shí)間點(diǎn)共鑒定出5 350個(gè)品種間差異表達(dá)基因和738個(gè)差異表達(dá)-NATs;GO分析結(jié)果顯示品種間骨骼肌組織差異表達(dá)-NATs主要與肌肉發(fā)育及能量代謝等GO生物學(xué)過(guò)程中的基因相關(guān)表達(dá);KEGG通路整合分析發(fā)現(xiàn)能量代謝通路之間關(guān)聯(lián)性最強(qiáng);其中線粒體三羧酸循環(huán)通路中基因及其相關(guān)表達(dá)的-NATs在仔豬出生后早期表達(dá)量較高;通路可視化分析發(fā)現(xiàn)在肌纖維生長(zhǎng)的兩個(gè)關(guān)鍵時(shí)間點(diǎn)即胚胎期49 d和77 d,藍(lán)塘豬能量代謝相關(guān)通路中基因及其相關(guān)表達(dá)的-NATs顯著高表達(dá)于長(zhǎng)白豬,而出生后品種間表達(dá)模式的變化則主要集中在出生后2—90 d的出生后早期階段?!窘Y(jié)論】在藍(lán)塘豬和長(zhǎng)白豬骨骼肌發(fā)育的10個(gè)時(shí)間點(diǎn),共鑒定出738個(gè)品種間差異表達(dá)的NATs,功能注釋結(jié)果表明這些-NATs主要通過(guò)與能量代謝通路中的基因相關(guān)表達(dá)從而參與影響藍(lán)塘豬和長(zhǎng)白豬品種間骨骼肌纖維發(fā)育差異。

    藍(lán)塘豬;長(zhǎng)白豬;順勢(shì)天然反義轉(zhuǎn)錄本;差異表達(dá);能量代謝

    0 引言

    【研究意義】天然反義轉(zhuǎn)錄本(natural antisense transcripts,NATs)是一類內(nèi)源性轉(zhuǎn)錄的可以與其他RNA轉(zhuǎn)錄本互補(bǔ)配對(duì)的RNA[1],它既可以是編碼蛋白的RNA,也可以是非編碼的RNA。NATs根據(jù)其轉(zhuǎn)錄來(lái)源可以分為順式NATs(-NATs)和反式NATs(trans-NATs)[2]。-NATs轉(zhuǎn)錄自基因的互補(bǔ)鏈而trans-NATs從基因組其他位置轉(zhuǎn)錄。研究表明NATs在人、鼠、豬、酵母和擬南芥等真核生物組織中均廣泛存在[3-4]。由此可見-NATs是基因表達(dá)調(diào)控的重要因素,本研究的意義在于通過(guò)對(duì)不同品種豬背最長(zhǎng)肌組織中-NATs的研究進(jìn)一步解析豬骨骼肌生長(zhǎng)發(fā)育的分子機(jī)理?!厩叭搜芯窟M(jìn)展】骨骼肌占哺乳動(dòng)物總體重的50%左右[5]。研究發(fā)現(xiàn)骨骼肌發(fā)育過(guò)程中的多個(gè)關(guān)鍵基因都存在-NATs。Braunschweig等研究指出與其-NATs在豬的肌肉組織中協(xié)同表達(dá)[6]。Sun等在豬的肌肉和肝臟等多個(gè)組織中均檢測(cè)到了的天然反義轉(zhuǎn)錄基因,在肌纖維的生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中兩者呈相反表達(dá)[7]。Pandorf等發(fā)現(xiàn)大鼠MHC基因簇的-NATs分別與1和2協(xié)同表達(dá)和相反表達(dá)[8],從而影響骨骼肌的肌纖維類型。Chen等在全基因組水平上對(duì)豬的-NATs進(jìn)行了研究,該研究表明豬骨骼肌中約30%的轉(zhuǎn)錄本具有-NATs[4]。NATs主要參與其正義基因轉(zhuǎn)錄水平和轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)控,目前已報(bào)道的調(diào)控機(jī)制主要包括:轉(zhuǎn)錄干擾[9]、RNA封閉[10]、RNA編輯[11]、RNA干擾[12]、染色質(zhì)重塑[13-14]和兼并異染色質(zhì)機(jī)制[15]?!颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】豬骨骼肌的生長(zhǎng)發(fā)育與其生長(zhǎng)速度和瘦肉率息息相關(guān),直接關(guān)系著生豬養(yǎng)殖的生產(chǎn)效益。中外豬種在生長(zhǎng)速度和瘦肉率性狀上具有明顯的遺傳差異,長(zhǎng)白豬作為高度選育的瘦肉型外國(guó)豬種,具有生長(zhǎng)快,瘦肉率高等特點(diǎn),而中國(guó)地方豬種藍(lán)塘豬的胴體瘦肉率相對(duì)較低,生長(zhǎng)速度也相對(duì)較慢[16]。因此,以藍(lán)塘豬和長(zhǎng)白豬作為試驗(yàn)對(duì)象來(lái)探索-NATs與不同豬品種骨骼肌發(fā)育差異的關(guān)系,有助于進(jìn)一步了解瘦肉型豬和肥胖型豬之間骨骼肌生長(zhǎng)發(fā)育遺傳差異的分子機(jī)制。雖然多項(xiàng)研究成果表明-NATs廣泛存在于豬的骨骼肌中,但是-NATs在中外豬種骨骼肌生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中是否存在差異以及其所參與的生物學(xué)過(guò)程和代謝通路仍有待于研究?!緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】運(yùn)用生物信息學(xué)分析手段,系統(tǒng)比較多個(gè)時(shí)間點(diǎn)藍(lán)塘豬和長(zhǎng)白豬骨骼肌組織中差異表達(dá)-NATs,并以此為基礎(chǔ)利用- NATs與相關(guān)表達(dá)的正義基因進(jìn)行功能聚類分析,探索-NATs參與藍(lán)塘豬和長(zhǎng)白豬生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中品種間骨骼肌發(fā)育差異的分子機(jī)理。

    1 材料與方法

    試驗(yàn)于2017年5—8月在華中農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)動(dòng)物遺傳育種與繁殖教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室、生豬健康養(yǎng)殖協(xié)同創(chuàng)新中心進(jìn)行。

    1.1 試驗(yàn)材料

    本試驗(yàn)中表達(dá)譜及-NATs數(shù)據(jù)[17-18]來(lái)自于筆者已發(fā)表的長(zhǎng)白豬和藍(lán)塘豬的背最長(zhǎng)肌組織基因表達(dá)譜及-NATs表達(dá)譜數(shù)據(jù)。該套數(shù)據(jù)共有10個(gè)發(fā)育時(shí)期,分別為胚胎期35 d、胚胎期49 d、胚胎期63 d、胚胎期77 d、胚胎期91 d、生后期2 d、生后期28 d、生后期90 d、生后期120 d及生后期180 d。本研究基于本實(shí)驗(yàn)室前期已發(fā)表的已注釋基因表達(dá)、-NATs表達(dá)及相關(guān)數(shù)據(jù),進(jìn)一步探索了品種間基因表達(dá)及-NATs差異及相關(guān)功能。

    1.2 試驗(yàn)方法

    1.2.1 差異表達(dá)分析 本研究使用edger R語(yǔ)言包[19]鑒定藍(lán)塘豬和長(zhǎng)白豬兩品種間差異表達(dá)的-NATs及基因,差異表達(dá)的閾值為|log2FC|≥1且FDR<0.01。

    1.2.2 功能注釋分析 為了解析兩品種間差異表達(dá)-NATs的生物學(xué)功能,我們首先運(yùn)用DAVID[20]對(duì)兩品種的差異表達(dá)基因及差異表達(dá)-NATs對(duì)應(yīng)的正義基因進(jìn)行了GO分析和KEGG分析。篩選GO生物學(xué)過(guò)程和KEGG通路的閾值分別為<0.01和<0.05。然后,利用-NATs與其對(duì)應(yīng)的正義基因表達(dá)相關(guān)(|R|>0.70且FDR<0.05)進(jìn)一步篩選-NATs顯著富集(-NATs個(gè)數(shù)大于10個(gè))的GO生物學(xué)過(guò)程。同時(shí),運(yùn)用Cytoscape[21]對(duì)顯著富集的KEGG通路(<0.05)進(jìn)行整合分析,根據(jù)每個(gè)通路所包含的有相關(guān)表達(dá)的-NATs的基因數(shù)目填充節(jié)點(diǎn)顏色,以通路間共有的基因數(shù)目填充線的寬度,最后結(jié)合節(jié)點(diǎn)的顏色和線的寬度將代謝通路進(jìn)行歸類。

    1.2.3 通路可視化分析 根據(jù) KEGG通路整合分析對(duì)聯(lián)系最緊密的模塊進(jìn)行了通路可視化分析,并用Cystoscape軟件進(jìn)行了繪圖。首先,過(guò)濾掉通路中沒(méi)有表達(dá)量的基因節(jié)點(diǎn);然后根據(jù)各通路間的連接節(jié)點(diǎn)合并通路;進(jìn)一步根據(jù)表達(dá)相關(guān)添加-NATs節(jié)點(diǎn);用表達(dá)差異倍數(shù)填充節(jié)點(diǎn)顏色。

    2 結(jié)果

    2.1 豬骨骼肌生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中共有5 350個(gè)基因和738個(gè)cis-NATs在藍(lán)塘豬與長(zhǎng)白豬兩品種間差異表達(dá)

    根據(jù)10個(gè)時(shí)間點(diǎn)豬骨骼肌組織基因和-NATs表達(dá)譜,在藍(lán)塘豬與長(zhǎng)白豬兩品種間進(jìn)行差異表達(dá)分析,共鑒定出5 350個(gè)差異表達(dá)基因和738個(gè)差異表達(dá)-NATs(| log2FC |≥1,F(xiàn)DR<0.01)。各個(gè)時(shí)間點(diǎn)差異表達(dá)基因及-NATs數(shù)目如表1所示;出生后早期2—90 d,藍(lán)塘豬和長(zhǎng)白豬之間的差異表達(dá)基因及-NATs數(shù)目相對(duì)出生前明顯下降(表1);MAplot顯示品種間-NATs差異表達(dá)倍數(shù)分布類似于正義基因的差異表達(dá)倍數(shù)分布(圖1)。各時(shí)間點(diǎn)差異倍數(shù)前十(5個(gè)藍(lán)塘豬上調(diào)表達(dá)和5個(gè)藍(lán)塘豬下調(diào)表達(dá))的差異表達(dá)基因及-NATs如表2所示。

    圖1 藍(lán)塘豬和長(zhǎng)白豬差異表達(dá)基因及差異表達(dá)cis-NATs MAplot圖

    2.2 品種間骨骼肌組織差異表達(dá)cis-NATs主要富集在骨骼肌發(fā)育及能量代謝的GO生物學(xué)過(guò)程中

    利用DAVID功能注釋平臺(tái)對(duì)差異表達(dá)-NATs及相關(guān)正義基因進(jìn)行功能注釋分析,結(jié)合表達(dá)相關(guān)性分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)包含10個(gè)以上差異表達(dá)-NATs的正義基因的GO生物學(xué)過(guò)程有兩類,第一類是肌肉發(fā)育,包含肌肉收縮(muscle contraction)、肌肉器官發(fā)育(muscle organ development)、骨骼肌細(xì)胞分化(skeletal muscle cell differentiation)和橫紋肌收縮(striated muscle contraction)等11個(gè)GO生物學(xué)過(guò)程;第二類是能量代謝,主要包括糖酵解過(guò)程(glycolytic process)、糖異生(gluconeogenesis)、氫離子跨膜運(yùn)輸(hydrogen ion transmembrane transport)和ATP生物合成過(guò)程(ATP biosynthetic process)等6個(gè)GO生物學(xué)過(guò)程(表3)。

    表1 藍(lán)塘豬和長(zhǎng)白豬差異表達(dá)基因及差異表達(dá)cis-NATs數(shù)目統(tǒng)計(jì)

    表2 骨骼肌發(fā)育過(guò)程中藍(lán)塘豬與長(zhǎng)白豬排在前10的差異表達(dá)基因及cis-NATs

    2.3 KEGG通路整合分析發(fā)現(xiàn)能量代謝通路之間關(guān)聯(lián)性最強(qiáng)

    利用Cytoscape軟件根據(jù)KEGG通路間相同基因的數(shù)目進(jìn)行歸類,最終將通路分為三大類:能量代謝相關(guān)通路、肌肉生長(zhǎng)發(fā)育相關(guān)通路及其他。其中能量代謝相關(guān)通路包括糖酵解/糖異生、三羧酸循環(huán)及氧化磷酸化等,肌肉生長(zhǎng)發(fā)育相關(guān)的通路則有心肌收縮、肥厚性心肌病及擴(kuò)張型心肌病等(圖2)。進(jìn)一步分析顯示能量代謝相關(guān)的通路之間相同數(shù)目基因較多,關(guān)系更緊密。

    2.4 線粒體中三羧酸循環(huán)通路的cis-NATs及基因在仔豬出生后早期表達(dá)量更高

    根據(jù)通路整合結(jié)果篩選出線粒體中三羧酸循環(huán)代謝通路的差異表達(dá)基因及其相關(guān)表達(dá)的-NATs,利用perl語(yǔ)言提取這些基因在長(zhǎng)白豬和藍(lán)塘豬10個(gè)時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)量,使用R語(yǔ)言pheatmap包繪制熱圖(圖3)。在胚胎期,藍(lán)塘豬的線粒體中三羧酸循環(huán)通路的基因及-NATs表達(dá)量整體稍高于長(zhǎng)白豬。仔豬出生后,基因及-NATs的表達(dá)量顯著上升。在出生后2 d,長(zhǎng)白豬的表達(dá)量普遍高于藍(lán)塘豬。到第28天時(shí)大部分基因及-NATs表達(dá)量出現(xiàn)反轉(zhuǎn),藍(lán)塘豬的表達(dá)量更高。在第90天時(shí),藍(lán)塘豬和長(zhǎng)白豬的表達(dá)量都有所下降。第120天和180天兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)的差別不大,整體上都是藍(lán)塘豬稍高于長(zhǎng)白豬。

    表3 包含10個(gè)以上差異表達(dá)cis-NATs的GO生物學(xué)過(guò)程

    F代表胚胎期,P代表生后期 F means fetal stage, and P indicates postnatal stage

    節(jié)點(diǎn)顏色的深淺代表通路中包含有相關(guān)表達(dá)的cis-NATs的基因數(shù)目;線的寬度代表節(jié)點(diǎn)間所含相同基因的數(shù)目;有相關(guān)表達(dá)的cis-NATs的基因數(shù)目小于3的通路用“”表示;其余則用“”表示

    LD代表長(zhǎng)白豬;LT代表藍(lán)塘豬 LD means Landrace and LT means Lantang

    2.5 通路可視化分析發(fā)現(xiàn)cis-NATs在品種間的差異表達(dá)具有時(shí)效性

    根據(jù)不同KEGG通路之間的節(jié)點(diǎn)基因合并能量代謝相關(guān)通路,結(jié)合通路中的基因和-NATs的表達(dá)量以及兩者在中外豬種間的差異表達(dá)倍數(shù),繪制出生后不同時(shí)期的能量代謝通路。在胚胎期第49天和胚胎期第77天藍(lán)塘豬的基因及-NATs的表達(dá)量顯著高于長(zhǎng)白豬,其中,胚胎期第49天藍(lán)塘豬和長(zhǎng)白豬能量代謝通路中相關(guān)基因及其-NATs的差異表達(dá)情況如圖4-A所示。仔豬出生后第2天,藍(lán)塘豬與能量代謝相關(guān)的通路中基因及-NATs的表達(dá)量顯著低于長(zhǎng)白豬(圖4-B)。生后期28 d,藍(lán)塘豬的表達(dá)量明顯上升,大部分基因及-NATs的表達(dá)量高于長(zhǎng)白豬(圖5-A),而生后期90 d,藍(lán)塘豬糖酵解通路及氧化磷酸化通路中基因及-NATs的表達(dá)量相對(duì)于長(zhǎng)白豬顯著下調(diào)(圖5-B)。圖4和圖5說(shuō)明-NATs在品種間的差異表達(dá)具有時(shí)效性,不同時(shí)間點(diǎn)上藍(lán)塘豬和長(zhǎng)白豬的差異表達(dá)情況有所不同。

    3 討論

    3.1 cis-NATs差異表達(dá)分析

    目前關(guān)于骨骼肌中-NATs的研究主要集中于鑒定、發(fā)育過(guò)程中表達(dá)模式及與其正義基因間表達(dá)關(guān)系等方面,不同豬種-NATs表達(dá)模式的比較卻鮮有研究。因此品種間-NATs的差異表達(dá)模式是否影響豬骨骼肌生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程仍有待于研究。長(zhǎng)白豬和藍(lán)塘豬在肌肉生長(zhǎng)發(fā)育方面存在較大差異,前人研究發(fā)現(xiàn)兩品種間肌纖維數(shù)目及橫截面積都存在差異[17, 22],中外豬種肌纖維類型也有較大差異[23]。本研究通過(guò)對(duì)胚胎期至成年共10個(gè)時(shí)間點(diǎn)的長(zhǎng)白豬和藍(lán)塘豬骨骼肌組織中差異表達(dá)的-NATs進(jìn)行分析,總共鑒定出738個(gè)差異表達(dá)-NATs。為了研究這些-NATs的生物學(xué)功能,本研究首先對(duì)差異表達(dá)的基因及-NATs對(duì)應(yīng)的基因進(jìn)行了功能聚類分析,并在此基礎(chǔ)上篩選出包含有顯著相關(guān)表達(dá)的-NATs的正義基因顯著富集的GO生物學(xué)過(guò)程和KEGG通路,以此來(lái)推斷豬骨骼肌生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中藍(lán)塘豬和長(zhǎng)白豬間差異表達(dá)-NATs參與的主要通路,解析-NATs調(diào)控品種間骨骼肌發(fā)育差異的分子機(jī)理。

    3.2 功能注釋及通路可視化

    GO分析結(jié)果顯示,藍(lán)塘豬和長(zhǎng)白豬的差異表達(dá)基因及其相關(guān)表達(dá)的-NATs富集在與肌肉生長(zhǎng)發(fā)育及能量代謝相關(guān)的生物學(xué)過(guò)程中。由于能量代謝相關(guān)KEGG通路之間的關(guān)聯(lián)性更為緊密(圖2),因此本研究對(duì)藍(lán)塘豬和長(zhǎng)白豬之間能量代謝相關(guān)通路進(jìn)行了進(jìn)一步的比較及可視化分析。能量代謝通路可視化分析結(jié)果顯示:胚胎期49 d和77 d時(shí)藍(lán)塘豬的-NATs的表達(dá)量顯著高于長(zhǎng)白豬(圖4-A)。已有研究顯示豬在出生前肌纖維數(shù)量已經(jīng)基本確定[24],胚胎期第49和77天分別處于豬初級(jí)肌管和次級(jí)肌管增殖的高峰期內(nèi),初級(jí)肌管和次級(jí)肌管分別發(fā)育成為初級(jí)肌纖維和次級(jí)肌纖維,研究表明長(zhǎng)白豬的次級(jí)肌纖維數(shù)目多于藍(lán)塘豬,長(zhǎng)白豬在胚胎期生肌速度更快[17],這暗示-NATs可能參與豬胚胎期肌纖維的生長(zhǎng)調(diào)控。此外,本研究統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示:與能量代謝相關(guān)的生物學(xué)過(guò)程中差異表達(dá)的-NATs主要富集在生后期而胚胎期較少(表3),且三羧酸循環(huán)通路中的基因及-NATs在藍(lán)塘豬和長(zhǎng)白豬的生后期表達(dá)量也都顯著高于胚胎期(圖3),這可能與仔豬在出生后能量代謝較為旺盛有關(guān)。

    豬在出生后骨骼肌發(fā)育主要是肌纖維類型的轉(zhuǎn)變,肌纖維根據(jù)收縮功能和所含酶系及活性可以劃分為四種類型:慢收縮氧化型(I型)、快收縮氧化型(IIa型)、中間型(IIx型)和快收縮酵解型(IIb型)[25]。I型肌纖維富含線粒體,有氧代謝的酶系活性很高,主要通過(guò)有氧代謝供能,纖維細(xì)小、收縮慢而持久;IIb型肌纖維含少量線粒體,糖酵解酶系和ATP酶活性較高,主要進(jìn)行厭氧代謝,纖維粗大、收縮快但不持久;IIa型和IIx型肌纖維的特征介于I 型和IIb型之間[26]。剛出生的仔豬肌纖維類型是氧化型,有氧代謝占主導(dǎo)[27]。豬骨骼肌肌纖維類型的分化主要發(fā)生在出生后早期,從出生開始部分氧化型(I型)肌纖維逐漸轉(zhuǎn)化成酵解型(II型)肌纖維,即I型肌纖維數(shù)目開始下降,II型肌纖維開始出現(xiàn)并逐漸增加[28]。在出生后早期這一轉(zhuǎn)化就會(huì)完成,且肌纖維類型比例基本確定[29-31]。本研究發(fā)現(xiàn)在出生后早期,藍(lán)塘豬和長(zhǎng)白豬的差異表達(dá)模式在28 d和90 d發(fā)生了兩次轉(zhuǎn)變:在生后期2 d,藍(lán)塘豬與能量代謝相關(guān)的通路中基因及其相關(guān)表達(dá)的-NATs的表達(dá)量顯著低于長(zhǎng)白豬(圖4-B),到生后期28 d發(fā)生轉(zhuǎn)變(圖5-A)。而生后期90 d時(shí)再次發(fā)生反轉(zhuǎn),與生后期2 d類似,藍(lán)塘豬的能量代謝相關(guān)通路中基因及其相關(guān)表達(dá)的-NATs相對(duì)于長(zhǎng)白豬顯著下調(diào)(圖5-B)。研究表明長(zhǎng)白豬較中國(guó)地方豬種擁有更多的酵解型肌纖維[23]。與本研究相對(duì)應(yīng)的發(fā)育時(shí)間點(diǎn)的研究表明,長(zhǎng)白豬能量代謝相關(guān)通路中的基因及其相關(guān)表達(dá)的-NATs在生后期2 d到28 d間發(fā)生劇烈下調(diào)并一直持續(xù)到90 d,而藍(lán)塘豬類似的下調(diào)則晚于長(zhǎng)白豬[18]。這表明長(zhǎng)白豬的肌纖維類型轉(zhuǎn)化可能早于藍(lán)塘豬,并且這種差異與品種間差異表達(dá)的-NATs相關(guān)。因此推測(cè)藍(lán)塘豬和長(zhǎng)白豬出生后NATs的差異表達(dá)與兩品種豬肌纖維類型的轉(zhuǎn)變調(diào)控相關(guān)。

    A. 胚胎期49 d時(shí)藍(lán)塘豬長(zhǎng)白豬的對(duì)比Fetal 49 day LT vs. LD;B. 生后期2 d時(shí)藍(lán)塘豬與長(zhǎng)白豬的對(duì)比Postnatal 2 day LT vs. LD

    A.生后期28 d時(shí)藍(lán)塘豬與長(zhǎng)白豬的對(duì)比Postnatal 28 day LT vs. LD;B.生后期90 d時(shí)藍(lán)塘豬與長(zhǎng)白豬的對(duì)比Postnatal 90 day LT vs. LD

    4 結(jié)論

    在藍(lán)塘豬和長(zhǎng)白豬兩品種背最長(zhǎng)肌中總共篩選了5 350個(gè)差異表達(dá)基因和738個(gè)差異表達(dá)-NATs。功能分析結(jié)果表明品種間差異表達(dá)基因及-NATs主要富集到與肌肉生長(zhǎng)發(fā)育和能量代謝相關(guān)的通路中。通過(guò)可視化分析結(jié)果顯示-NATs參與豬骨骼肌組織中能量代謝相關(guān)基因的表達(dá)調(diào)控,這可能是導(dǎo)致品種間骨骼肌纖維數(shù)目及類型差異的原因之一。

    [1] OSATO N, SUZUKI Y, IKEO K, GOJOBORI T. Transcriptional interferences in cis natural antisense transcripts of humans and mice., 2007, 176(2): 1299-1306. DOI: 10.1534/genetics.106. 069484.

    [2] CHEN J, SUN M, KENT W J, HUANG X, XIE H, WANG W, ZHOU G, SHI R Z, ROWLEY J D. Over 20% of human transcripts might form sense-antisense pairs., 2004, 32(16): 4812-4820. DOI: 10.1093/nar/gkh818.

    [3] VANHéE-BROSSOLLET C, VAQUERO C. Do natural antisense transcripts make sense in eukaryotes., 1998, 211(1): 1-9.

    [4] CHEN C, WEI R, QIAO R, REN J, YANG H, LIU C, HUANG L. A genome-wide investigation of expression characteristics of natural antisense transcripts in liver and muscle samples of pigs., 2012, 7(12): e52433. DOI: 10.1371/journal.pone.0052433.

    [5] ZHANG J, ZHOU C, MA J, CHEN L, JIANG A, ZHU L, SHUAI S, WANG J, LI M, LI X. Breed, sex and anatomical location-specific gene expression profiling of the porcine skeletal muscles., 2013, 14:53. DOI: 10.1186/1471-2156-14-53.

    [6] BRAUNSCHWEIG M H, VAN LAERE A S, BUYS N, ANDERSSON L, ANDERSSON G. IGF2 antisense transcript expression in porcine postnatal muscle is affected by a quantitative trait nucleotide in intron 3., 2004, 84(6): 1021-1029.

    [7] SUN L, YU S, WANG H, FAN B, LIU B. NUDT6, the FGF-2's antisense gene, showed associations with fat deposition related traits in pigs., 2012, 39(4): 4119-4126. DOI: 10.1007/s11033-011-1194-3.

    [8] PANDORF C E, HADDAD F, ROY R R, QIN A X, EDGERTON V R, BALDWIN K M. Dynamics of myosin heavy chain gene regulation in slow skeletal muscle: role of natural antisense RNA.2006, 281(50): 38330-42. DOI: 10.1074/jbc. M607249200.

    [9] PRESCOTT E M, PROUDFOOT N J. Transcriptional collision between convergent genes in budding yeast., 2002, 99(13): 8796-8801. DOI: 10.1073/pnas.132270899.

    [10] BELTRAN M, PUIG I, PENA C, GARCIA J M, ALVAREZ A B, PENA R, BONILLA F, DE HERREROS A G. A natural antisense transcript regulates Zeb2/Sip1 gene expression during Snail1-induced epithelial-mesenchymal transition., 2008, 22(6): 756-769. DOI: 10.1101/gad.455708.

    [11] BASS B L. RNA editing by adenosine deaminases that act on RNA.2002, 71:817-846. DOI: 10.1146/ annurev.biochem.71.110601.135501.

    [12] ROBB G B, CARSON A R, TAI S C, FISH J E, SINGH S, YAMADA T, SCHERER S W, NAKABAYASHI K, MARSDEN P A. Post-transcriptional regulation of endothelial nitric-oxide synthase by an overlapping antisense mRNA transcript., 2004, 279(36): 37982-37996. DOI: 10.1074/jbc.M400271200.

    [13] SCHEELE C, PETROVIC N, FAGHIHI M A, LASSMANN T, FREDRIKSSON K, ROOYACKERS O, WAHLESTEDT C, GOOD L, TIMMONS J A. The human PINK1 locus is regulatedby a non-coding natural antisense RNA during modulation of mitochondrial function., 2007, 8:74. DOI:10.1186/1471-2164-8-74.

    [14] OHHATA T, HOKI Y, SASAKI H, SADO T. Crucial role of antisense transcription across the Xist promoter in Tsix-mediated Xist chromatin modification., 2008, 135(2): 227-235. DOI:10.1242/dev. 008490.

    [15] Li N, Joska T M, Ruesch C E, Coster S J, Belden W J.The frequency natural antisense transcript first promotes, then represses, frequency gene expression via facultative heterochromatin., 2015, 112(14): 4357-62. DOI: 10.1073/pnas.1406130112.

    [16] 李加琪, 張豪, 劉小紅, 高萍, 王翀, 吳秋豪, 張細(xì)權(quán), 陳瑤生. 長(zhǎng)白-藍(lán)塘豬資源群第6號(hào)染色體的QTL檢測(cè). 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué), 2004, 37(1):130-135.

    LI J Q, ZHANG H, LIU X H, GAO P, WANG C, WU Q H. QTL detection on chromosome 6 in Landrace-Lantang Pig resource population.2004, 37(1):130-135, (in Chinses)

    [17] ZHAO X, MO D, LI A, GONG W, XIAO S, ZHANG Y, QIN L, NIU Y, GUO Y, LIU X, CONG P, HE Z, WANG C, LI J, CHEN Y. Comparative analyses by sequencing of transcriptomes during skeletal muscle development between pig breeds differing in muscle growth rate and fatness., 2011, 6(5): e19774. DOI: 10.1371/ journal.pone.0019774.

    [18] ZHAO Y, HOU Y, ZHAO C, LIU F, LUAN Y, JING L, LI X, ZHU M, ZHAO S. Cis-natural antisense transcripts are mainly Co-expressed with their sense transcripts and primarily related to energy metabolic pathways during muscle development.2016, 12(8): 1010-1021. DOI: 10.7150/ijbs.14825.

    [19] Robinson M D, McCarthy D J, Smyth G K.edgeR: a Bioconductor package for differential expression analysis of digital gene expression data., 2010, 26(1): 139-140. DOI: 10.1093/bioinformatics/ btp616.

    [20] HUANG DA W, SHERMAN B T, LEMPICKI R A. Systematic and integrative analysis of large gene lists using DAVID bioinformatics resources.2009, 4(1): 44-57. DOI: 10.1038/nprot. 2008.211.

    [21] SHANNON P, MARKIEL A, OZIER O, BALIGA N S, WANG J T, RAMAGE D, AMIN N, SCHWIKOWSKI B, IDEKER T. Cytoscape: a software environment for integrated models of biomolecular interaction networks., 2003, 13(11): 2498-504. DOI: 10.1101/gr.1239303.

    [22] WANG X Q, YANG W J, YANG Z, SHU G, WANG S B, JIANG Q Y, YUAN L, WU T S. The differential proliferative ability of satellite cells in Lantang and Landrace pigs., 2012, 7(3): e32537. DOI: 10.1371/journal.pone.0032537.

    [23] GUO J, SHAN T, WU T, ZHU L N, REN Y, AN S, WANG Y. Comparisons of different muscle metabolic enzymes and muscle fiber types in Jinhua and Landrace pigs., 2011, 89(1): 185-191. DOI: 10.2527/jas.2010-2983.

    [24] TE PAS M F, DE WIT A A, PRIEM J, CAGNAZZO M, DAVOLI R, RUSSO V, POOL M H. Transcriptome expression profiles in prenatal pigs in relation to myogenesis.2005, 26(2-3): 157-165. DOI: 10.1007/s10974-005-7004-6.

    [25] 李伯江, 李平華, 吳望軍, 李齊發(fā), 黃瑞華, 劉紅林. 骨骼肌肌纖維形成機(jī)制的研究進(jìn)展. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué), 2014, 47(6): 1200-1207.

    LI B J, LI P H, WU W J, LI Q F, HUANG R H, LIU H L. Progresses in research of the mechanisms of skeletal muscle fiber formation.2014, 47(6):1200-1207. (in Chinses)

    [26] BERCHTOLD M W, BRINKMEIER H, MUNTENER M. Calcium ion in skeletal muscle: its crucial role for muscle function, plasticity, and disease., 2000, 80(3): 1215-1265. DOI: 10.1152/physrev.2000.80.3.1215.

    [27] Lefaucheur L, Ecolan P, Lossec G, Gabillard J C, Butler-Browne G S, Herpin P. Influence of early postnatal cold exposure on myofiber maturation in pig skeletal muscle., 2001, 22(5): 439-452. DOI: 10.1023/A:1014591818870 .

    [28] 趙曉, 莫德林, 張悅, 龔雯, 李安寧, 陳瑤生. 豬的骨骼肌生長(zhǎng)發(fā)育研究進(jìn)展.生命科學(xué), 2011, 23(1): 37-44.

    ZHAO X, MO D L, ZHANG Y, GONG W, LI A N, CHEN Y S. Progress in research on skeletal muscle growth and development in swine.2011, 23(1): 37-44. (in Chinses)

    [29] PETTE D, STARON R S. Myosin isoforms, muscle fiber types, and transitions.2000, 50(6): 500-509. DOI:10.1002/1097-0029(20000915)50:6<500::AID-JEMT7>3.0.CO; 2-7.

    [30] PICARD B, LEFAUCHEUR L, BERRI C, DUCLOS M J. Muscle fibre ontogenesis in farm animal species.2002, 42(5): 415-431. DOI: 10.1051/rnd: 2002035.

    [31] WANK V, FISCHER M S, WALTER B, BAUER R. Muscle growth and fiber type composition in hind limb muscles during postnatal development in pigs., 2006, 182(3/4): 171-181. DOI: 10.1159/000093966.

    (責(zé)任編輯 林鑒非)

    Comparison Study of Differential Expression Genesand-NATs of Skeletal Muscle Between Lantang and Landrace Pig

    XU Yueyuan1, QI Xiaolong1, HOU Ye1, ZHAO Yunxia1, LUAN Yu1, ZHOU Huanhuan1, ZHAO Shuhong1,2, LI Xinyun1,2,3

    (1Key Laboratory of Agricultural Animal Genetics, Breeding and Reproduction (Huazhong Agricultural University), Ministry of Education, Wuhan 430070;2The Cooperative Innovation Center for Sustainable Pig Production,Wuhan 430070;3Key Laboratory of Pig Healthy Breeding, Ministry of Agriculture, Guangxi Yangxiang Co Ltd, Guigang 537100, Guangxi)

    【Objective】 This study was designed to analyze the molecular mechanism of pig skeletal muscle development regulated by-natural antisense transcripts (-NATs) by comparing the differential expression genes and-NATs between Lantang and Landrace pig during their skeletal muscle development. 【Method】In this study, the following steps were adopted: (i) The differential expression genes (DEGs) and-NATs comparing Lantang (LT) and Landrace (LR) pig breeds at 10 time-points distributed from 35 days-post-coitus (dpc) to 180 days-post-natum (dpn) were identified (|log2FC|>1 and FDR<0.01). (ii) The significant biological process Gene Ontology (GO) terms (<0.01) and Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) pathways (<0.05) of the DEGs and the sense gene of differential expression-NATs were enriched via function enrichment analysis. (iii) Then the significant biological process GO terms and KEGG pathways that-NATS participated were filtered by the number of related genes of-NATs, and KEGG pathways were integrated by the number of same genes between pathways. Finally, visual analyses was conducted based on fold change of differential expression-NATs and their sense gene between breeds within pathways.【Result】A total of 5 350 DEGs and 738 differential expression-NATs were identified between LT and LR at 10 time points in this study. GO analysis showed that the expression of differential expression-NATs between LT and LR in skeletal muscle was primarily concerned with genes in biological process, including muscle development and energy metabolism. The integrated analysis of KEGG pathways found that energy metabolism pathways were strongly related by DE genes and their correlated-NATs. Moreover the expression of genes and their correlated-NATs were higher in pig mitochondrial citrate cycle pathway during early stages of birth than adulthood. The visual analyses of KEGG pathways showed that the expression level of energy metabolism pathway involved genes and their correlated-NATs were higher in LT than LR at 49 dpc and 77 dpc, which were two critical points for muscle fibers growth. The differences of expression patterns between LT and LR primarily appear at the early postnatal stages of 2 dpn-90 dpn. 【Conclusion】In this study, 738 differential expression-NATs were identified by comparing between LT and LR at 10 time points of skeletal muscle development. Function enrichment analysis showed that-NATs played a role in developmental differences of skeletal muscle fibers between LT and LR by interacting with genes expressed in energy metabolism related pathways.

    Lantang; Landrace; cis-natural antisense transcripts; differential expression; energy metabolism

    10.3864/j.issn.0578-1752.2018.09.016

    2017-09-01;

    2018-02-02

    國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31672391,31601920)、國(guó)家“863”項(xiàng)目(2013AA102502)

    許月園,E-mail:yyxu@webmail.hzau.edu.cn。

    李新云,E-mail:xyli@mail.hzau.edu.cn

    猜你喜歡
    長(zhǎng)白豬肌纖維骨骼肌
    長(zhǎng)白豬21 日齡窩重的影響因素分析
    Advanced ocean wave energy harvesting: current progress and future trends
    乳腺炎性肌纖維母細(xì)胞瘤影像學(xué)表現(xiàn)1例
    嬰兒顱骨肌纖維瘤/肌纖維瘤病2例
    品種推介 長(zhǎng)白豬
    頂骨炎性肌纖維母細(xì)胞瘤一例
    microRNA-139對(duì)小鼠失神經(jīng)肌肉萎縮中肌纖維的影響
    8-羥鳥嘌呤可促進(jìn)小鼠骨骼肌成肌細(xì)胞的增殖和分化
    骨骼肌細(xì)胞自噬介導(dǎo)的耐力運(yùn)動(dòng)應(yīng)激與適應(yīng)
    藍(lán)塘豬與長(zhǎng)白豬正反交F1代胴體性狀和肉品質(zhì)的比較
    91久久精品国产一区二区三区| 成人毛片60女人毛片免费| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 国产成人av激情在线播放 | 免费高清在线观看视频在线观看| 视频在线观看一区二区三区| 精品国产露脸久久av麻豆| 日韩欧美一区视频在线观看| 国产精品蜜桃在线观看| 飞空精品影院首页| 蜜桃国产av成人99| 国产乱来视频区| 欧美精品亚洲一区二区| 日本欧美国产在线视频| 国产成人a∨麻豆精品| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 日日摸夜夜添夜夜爱| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 亚洲在久久综合| 精品久久国产蜜桃| 国产国语露脸激情在线看| 3wmmmm亚洲av在线观看| 亚洲av日韩在线播放| 最近中文字幕2019免费版| √禁漫天堂资源中文www| 亚洲精品乱久久久久久| 99热国产这里只有精品6| 久久99精品国语久久久| 成人毛片60女人毛片免费| 久久久久久久久久人人人人人人| 考比视频在线观看| 亚洲三级黄色毛片| 亚洲精品一区蜜桃| 午夜激情福利司机影院| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| av一本久久久久| √禁漫天堂资源中文www| 亚洲欧洲日产国产| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 日本与韩国留学比较| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 国产免费一级a男人的天堂| 91久久精品电影网| 欧美精品一区二区大全| 全区人妻精品视频| 欧美成人精品欧美一级黄| 妹子高潮喷水视频| 超碰97精品在线观看| 熟妇人妻不卡中文字幕| 亚洲欧美色中文字幕在线| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 秋霞在线观看毛片| 九色亚洲精品在线播放| 亚洲精品国产av成人精品| 最近中文字幕高清免费大全6| 免费大片18禁| 青春草亚洲视频在线观看| 欧美另类一区| 久久综合国产亚洲精品| 在线观看三级黄色| 亚洲av男天堂| 国产男女内射视频| 国产片内射在线| 成人影院久久| 91久久精品国产一区二区三区| 激情五月婷婷亚洲| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 免费av中文字幕在线| 激情五月婷婷亚洲| 欧美性感艳星| 亚洲情色 制服丝袜| 欧美少妇被猛烈插入视频| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 在现免费观看毛片| 简卡轻食公司| 亚洲成人一二三区av| 久久久国产欧美日韩av| 最新中文字幕久久久久| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 国产av国产精品国产| 国产综合精华液| 综合色丁香网| 99久久综合免费| 亚洲高清免费不卡视频| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 美女福利国产在线| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 91在线精品国自产拍蜜月| 一本久久精品| 精品卡一卡二卡四卡免费| av一本久久久久| 有码 亚洲区| av国产精品久久久久影院| 成人漫画全彩无遮挡| 久久ye,这里只有精品| 看十八女毛片水多多多| 亚洲中文av在线| 在线天堂最新版资源| 亚洲第一av免费看| 内地一区二区视频在线| 国产精品久久久久久久久免| 国产免费又黄又爽又色| 18+在线观看网站| 久久精品人人爽人人爽视色| 在线看a的网站| 欧美日韩在线观看h| 国产一区二区在线观看日韩| 日本av免费视频播放| 亚洲精品,欧美精品| 国产精品偷伦视频观看了| 我的老师免费观看完整版| 如日韩欧美国产精品一区二区三区 | 亚洲精品第二区| 欧美xxxx性猛交bbbb| 高清在线视频一区二区三区| 少妇的逼水好多| 在线精品无人区一区二区三| 最近中文字幕2019免费版| 亚洲精品亚洲一区二区| 国产一区二区在线观看av| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 国产精品久久久久久av不卡| av不卡在线播放| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 国产精品蜜桃在线观看| 欧美日韩av久久| 秋霞在线观看毛片| 久久国产精品大桥未久av| 国产精品人妻久久久影院| 亚洲av男天堂| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 久久热精品热| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 18在线观看网站| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 精品久久久久久电影网| 色婷婷av一区二区三区视频| 97在线视频观看| 久久97久久精品| 精品一区二区三区视频在线| 国产精品99久久99久久久不卡 | 热99国产精品久久久久久7| 久久久久国产精品人妻一区二区| 亚洲av综合色区一区| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 十八禁高潮呻吟视频| 一个人免费看片子| 久久鲁丝午夜福利片| 亚洲国产精品一区二区三区在线| av免费观看日本| 国产精品人妻久久久影院| 卡戴珊不雅视频在线播放| 久久人人爽人人片av| 纯流量卡能插随身wifi吗| 热99久久久久精品小说推荐| 国产精品一区二区在线观看99| 免费观看在线日韩| 国产精品 国内视频| 草草在线视频免费看| 国产亚洲欧美精品永久| 热re99久久国产66热| 曰老女人黄片| 成人二区视频| 国产精品国产av在线观看| 九草在线视频观看| 午夜福利网站1000一区二区三区| 欧美日韩成人在线一区二区| 精品久久久久久久久亚洲| 国产成人精品婷婷| 亚洲色图综合在线观看| 欧美xxxx性猛交bbbb| 精品亚洲成国产av| 97超碰精品成人国产| 国产在线视频一区二区| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 亚洲国产精品专区欧美| 中国国产av一级| 大香蕉97超碰在线| 久久婷婷青草| 精品少妇黑人巨大在线播放| 久久精品人人爽人人爽视色| 91国产中文字幕| 精品久久久久久久久av| 久久久久久久精品精品| 久久久久精品性色| 三上悠亚av全集在线观看| 精品亚洲成a人片在线观看| 亚洲精品一二三| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 日本av免费视频播放| 亚洲精品国产色婷婷电影| 大片免费播放器 马上看| 少妇 在线观看| 免费黄网站久久成人精品| 欧美一级a爱片免费观看看| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 人妻 亚洲 视频| 亚洲在久久综合| 国产精品成人在线| 看非洲黑人一级黄片| 搡老乐熟女国产| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 丁香六月天网| 国产精品一区二区在线观看99| a级毛片在线看网站| 中国三级夫妇交换| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 欧美 亚洲 国产 日韩一| videos熟女内射| 久久久国产精品麻豆| 午夜av观看不卡| 成人影院久久| 狂野欧美激情性bbbbbb| 夜夜爽夜夜爽视频| 国产av码专区亚洲av| 亚洲怡红院男人天堂| 久久97久久精品| 亚洲av综合色区一区| 99re6热这里在线精品视频| 一级,二级,三级黄色视频| 国产成人91sexporn| 视频中文字幕在线观看| 国产免费一区二区三区四区乱码| 亚洲精品456在线播放app| 人妻 亚洲 视频| 精品国产露脸久久av麻豆| 国产成人91sexporn| 免费观看无遮挡的男女| 亚洲精品456在线播放app| 色5月婷婷丁香| 亚洲精品亚洲一区二区| 亚洲内射少妇av| 一区二区三区乱码不卡18| 久久久久久人妻| av有码第一页| 国产熟女午夜一区二区三区 | 国产一级毛片在线| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 久久精品国产亚洲av涩爱| 午夜福利网站1000一区二区三区| 日本vs欧美在线观看视频| 午夜91福利影院| 亚洲精品456在线播放app| 熟女av电影| 亚洲精品自拍成人| 欧美另类一区| 九色亚洲精品在线播放| 赤兔流量卡办理| 伊人亚洲综合成人网| 九色成人免费人妻av| 曰老女人黄片| 久久狼人影院| 国产精品 国内视频| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 九色亚洲精品在线播放| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 成人亚洲欧美一区二区av| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 五月玫瑰六月丁香| 日韩 亚洲 欧美在线| 国产在线一区二区三区精| 少妇高潮的动态图| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 午夜91福利影院| 日本91视频免费播放| 亚洲精品自拍成人| 亚洲精品自拍成人| 爱豆传媒免费全集在线观看| 精品久久久精品久久久| 少妇精品久久久久久久| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 搡女人真爽免费视频火全软件| 综合色丁香网| 晚上一个人看的免费电影| 看免费成人av毛片| 亚洲欧洲国产日韩| 亚洲高清免费不卡视频| av在线app专区| 亚洲av日韩在线播放| 丰满乱子伦码专区| 秋霞在线观看毛片| 日韩成人伦理影院| 久久99精品国语久久久| 97在线视频观看| 在线免费观看不下载黄p国产| 国产精品99久久久久久久久| 超色免费av| 最近中文字幕高清免费大全6| 少妇人妻精品综合一区二区| 纯流量卡能插随身wifi吗| 国产欧美亚洲国产| 免费高清在线观看视频在线观看| 搡女人真爽免费视频火全软件| videossex国产| 在线观看人妻少妇| 亚洲欧美精品自产自拍| 亚洲精品色激情综合| 老司机影院成人| 日韩一区二区视频免费看| 免费观看的影片在线观看| 欧美+日韩+精品| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 大片电影免费在线观看免费| 婷婷色综合www| 在线观看免费视频网站a站| 人妻夜夜爽99麻豆av| 久久影院123| 日本黄色片子视频| 97超碰精品成人国产| 国产一区二区在线观看日韩| 街头女战士在线观看网站| 黄色毛片三级朝国网站| 九色亚洲精品在线播放| 久久久久久久国产电影| 黑丝袜美女国产一区| 一级毛片 在线播放| 99热全是精品| 少妇的逼水好多| 只有这里有精品99| 91aial.com中文字幕在线观看| 久久青草综合色| 如何舔出高潮| 久久女婷五月综合色啪小说| 最黄视频免费看| 国产亚洲欧美精品永久| 黄色视频在线播放观看不卡| 日韩一区二区视频免费看| 制服诱惑二区| 夫妻午夜视频| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 午夜免费男女啪啪视频观看| 母亲3免费完整高清在线观看 | 婷婷色麻豆天堂久久| 一区在线观看完整版| 久久久久久久精品精品| 亚洲av免费高清在线观看| 91精品一卡2卡3卡4卡| 久久99一区二区三区| 在线观看美女被高潮喷水网站| 国产一级毛片在线| 最近中文字幕2019免费版| 黑人高潮一二区| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 久久99蜜桃精品久久| 日韩视频在线欧美| 久久久久久久久久久久大奶| 国产成人精品婷婷| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 热99久久久久精品小说推荐| 日韩伦理黄色片| 免费观看的影片在线观看| 99久久精品一区二区三区| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 亚洲精品国产av蜜桃| 欧美日本中文国产一区发布| 久久久久精品久久久久真实原创| 高清欧美精品videossex| 日韩欧美一区视频在线观看| 在线观看三级黄色| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 中文字幕亚洲精品专区| 中文字幕人妻丝袜制服| 一级二级三级毛片免费看| 18禁动态无遮挡网站| 精品国产一区二区三区久久久樱花| av免费在线看不卡| 熟女人妻精品中文字幕| 午夜福利,免费看| 五月伊人婷婷丁香| 亚洲,一卡二卡三卡| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 一级a做视频免费观看| 国产精品久久久久久精品古装| 91精品三级在线观看| 日本vs欧美在线观看视频| 五月天丁香电影| 人妻 亚洲 视频| 国产国语露脸激情在线看| 国产免费一区二区三区四区乱码| 男女无遮挡免费网站观看| 亚洲精品日韩av片在线观看| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 国产日韩欧美亚洲二区| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 有码 亚洲区| 中文字幕制服av| videosex国产| 高清av免费在线| 三级国产精品片| 九九在线视频观看精品| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 成年人午夜在线观看视频| 日韩在线高清观看一区二区三区| 日韩中字成人| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 一本大道久久a久久精品| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 亚洲成人av在线免费| av一本久久久久| 纯流量卡能插随身wifi吗| 久久女婷五月综合色啪小说| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 中文字幕久久专区| 伊人亚洲综合成人网| 亚洲色图综合在线观看| 亚洲三级黄色毛片| 久久99蜜桃精品久久| 美女内射精品一级片tv| 少妇的逼水好多| 国产 一区精品| 91精品伊人久久大香线蕉| 日韩欧美一区视频在线观看| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| av国产久精品久网站免费入址| 免费黄频网站在线观看国产| 国产黄频视频在线观看| 一本大道久久a久久精品| 大香蕉久久网| 色哟哟·www| 九九爱精品视频在线观看| 国产精品欧美亚洲77777| 午夜激情福利司机影院| 少妇高潮的动态图| 国产精品人妻久久久影院| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 校园人妻丝袜中文字幕| 亚洲人成网站在线播| 永久免费av网站大全| 男女国产视频网站| 日日啪夜夜爽| 母亲3免费完整高清在线观看 | 亚洲国产欧美在线一区| 亚洲精品456在线播放app| 国产av精品麻豆| 久久精品久久精品一区二区三区| 久久久久久久国产电影| 2022亚洲国产成人精品| 午夜福利视频精品| 日韩视频在线欧美| 亚洲美女黄色视频免费看| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 97在线视频观看| 秋霞在线观看毛片| 欧美三级亚洲精品| 久久ye,这里只有精品| av在线老鸭窝| 久久99精品国语久久久| 成人国语在线视频| 久久久精品区二区三区| 边亲边吃奶的免费视频| 男男h啪啪无遮挡| 亚洲在久久综合| 婷婷色综合大香蕉| 另类精品久久| 精品一区二区免费观看| 国产乱来视频区| a级毛片在线看网站| 久久久久网色| 国产精品久久久久久久电影| 国产男人的电影天堂91| 九色亚洲精品在线播放| 18禁观看日本| 2022亚洲国产成人精品| 国产免费一区二区三区四区乱码| 久久久久久久久久成人| 色哟哟·www| 99热这里只有精品一区| 母亲3免费完整高清在线观看 | 97在线视频观看| 一级毛片aaaaaa免费看小| av福利片在线| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 亚洲精品aⅴ在线观看| 久久综合国产亚洲精品| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 亚洲第一区二区三区不卡| 亚洲国产最新在线播放| 亚洲经典国产精华液单| 男女边吃奶边做爰视频| 成年女人在线观看亚洲视频| 成人国语在线视频| 欧美成人午夜免费资源| 日本与韩国留学比较| 熟女人妻精品中文字幕| 黄色一级大片看看| 欧美少妇被猛烈插入视频| 国产乱人偷精品视频| 国产 一区精品| 免费看av在线观看网站| 天天操日日干夜夜撸| 一本久久精品| 免费av不卡在线播放| 欧美少妇被猛烈插入视频| 国产免费又黄又爽又色| 亚洲av男天堂| 久久久久久久大尺度免费视频| 中文天堂在线官网| 精品一区二区三区视频在线| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 国产探花极品一区二区| 国产精品免费大片| 18禁动态无遮挡网站| 国产精品国产三级专区第一集| 国产精品一区www在线观看| 国产精品久久久久久久电影| 日韩成人av中文字幕在线观看| 日韩欧美一区视频在线观看| 亚洲综合色网址| 久久狼人影院| 午夜激情久久久久久久| 十八禁高潮呻吟视频| 久久99蜜桃精品久久| 三级国产精品片| 亚洲精品亚洲一区二区| 一级毛片我不卡| 国产精品不卡视频一区二区| 国产高清国产精品国产三级| 另类亚洲欧美激情| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 国产一区二区三区av在线| 婷婷色av中文字幕| 如日韩欧美国产精品一区二区三区 | 日韩人妻高清精品专区| 日韩 亚洲 欧美在线| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 久久精品久久精品一区二区三区| 91精品一卡2卡3卡4卡| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 免费看不卡的av| 制服人妻中文乱码| 日韩电影二区| 中国三级夫妇交换| 亚洲第一av免费看| 国产亚洲欧美精品永久| 日韩电影二区| 在线观看一区二区三区激情| 日日啪夜夜爽| 国产成人免费观看mmmm| 欧美精品高潮呻吟av久久| 成人国语在线视频| 中文字幕亚洲精品专区| 26uuu在线亚洲综合色| 如何舔出高潮| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 免费大片18禁| 国产成人freesex在线| 亚洲情色 制服丝袜| 考比视频在线观看| 国国产精品蜜臀av免费| videos熟女内射| 777米奇影视久久| 精品一品国产午夜福利视频| 2018国产大陆天天弄谢| 老熟女久久久| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 少妇精品久久久久久久| 成人影院久久| 国产在线一区二区三区精| 99热网站在线观看| 极品少妇高潮喷水抽搐| 国产熟女午夜一区二区三区 | 亚洲国产精品一区二区三区在线| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 亚洲av二区三区四区| 校园人妻丝袜中文字幕| 精品视频人人做人人爽| 午夜福利,免费看| 青春草亚洲视频在线观看| 色5月婷婷丁香| 免费观看性生交大片5| 97超碰精品成人国产| 高清不卡的av网站| 成人亚洲欧美一区二区av| 亚洲欧美清纯卡通| 国产高清不卡午夜福利| 国内精品宾馆在线| 日韩一本色道免费dvd| 人妻系列 视频| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 最近中文字幕2019免费版| 国产精品久久久久成人av| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 国产精品99久久99久久久不卡 | 久久99精品国语久久久| 亚洲国产精品成人久久小说| 美女大奶头黄色视频| 三级国产精品片| av.在线天堂| 精品久久久精品久久久| 国产精品久久久久久久电影| 春色校园在线视频观看| 成人毛片a级毛片在线播放| 青春草国产在线视频| 少妇丰满av| 99热这里只有精品一区| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 久久久精品免费免费高清| 青青草视频在线视频观看| 久久久久久久久久成人| 日日爽夜夜爽网站| 99视频精品全部免费 在线| 女性被躁到高潮视频| 交换朋友夫妻互换小说| 韩国av在线不卡| 亚洲美女黄色视频免费看| 最近2019中文字幕mv第一页| 国产熟女午夜一区二区三区 | 日韩av在线免费看完整版不卡| 韩国av在线不卡|