雙氫青蒿素聯(lián)合紫杉醇對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖的抑制作用研究

黃導(dǎo) 李凌晨 納鑫（通訊作者）

（1龍川縣婦幼保健院 廣東 河源 517300）

（2昆明醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院暨云南省天然藥物藥理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 云南 昆明 650500）

我國(guó)的乳腺癌發(fā)病率呈逐年上升的趨勢(shì)[1]。紫杉醇（taxinol，TAX）具有顯著的抗腫瘤活性，由于紫杉醇會(huì)產(chǎn)生耐藥，降低了其對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖的抑制作用，地限制了其在臨床乳腺癌治療中的療效。青蒿素類(lèi)化合物對(duì)腫瘤抑制也有較好的效果,并且可增強(qiáng)某些化療藥物的敏感性，尤其以雙氫青蒿素（dihydroartemisinin,DHA）抗腫瘤活性最強(qiáng)，有研究發(fā)現(xiàn)雙氫青蒿素能顯著抑制人乳腺癌細(xì)胞MCF-7的增殖[2]。為提高紫杉醇對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖的抑制作用，增強(qiáng)化療藥物的抗腫瘤效果，本研究通過(guò)聯(lián)合用藥，將紫杉醇和雙氫青蒿素兩種藥物同時(shí)應(yīng)用于人乳腺癌細(xì)胞，對(duì)兩種藥物聯(lián)合使用是否可以起到更好的抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用進(jìn)行檢測(cè)。

1.材料與方法

1.1 主要藥品和試劑

藥品 雙氫青蒿素：昆明制藥廠；紫杉醇注射液（紫素）：北京協(xié)和藥廠，批號(hào)：141203；主要試劑二甲基亞砜：Amresco產(chǎn)品，批號(hào)：0718A01；二甲基四氮唑藍(lán)：Amresco公司生產(chǎn)，批號(hào)：0793。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

MTT對(duì)抑制率的檢測(cè),分為五個(gè)組：選用紫杉醇做陽(yáng)性對(duì)照藥物，分為空白組、溶媒對(duì)照組、單獨(dú)DHA組、單獨(dú)紫杉醇組、DHA+紫杉醇組。濃度梯度相同，5,10,20,40,80μmol/L，每組樣本設(shè)3個(gè)復(fù)孔，24小時(shí)、48小時(shí)后，每孔加入MTT溶液（5mg/ml）20μL,于37℃繼續(xù)孵育4h終止培養(yǎng)，記錄結(jié)果。抑制率=（溶媒組OD-實(shí)驗(yàn)組OD/溶媒組OD）×100%IC50值由IC50值計(jì)算軟件得出。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果

實(shí)驗(yàn)通過(guò)設(shè)置5種不同濃度的藥物作用于體外培養(yǎng)的人乳腺癌細(xì)胞MCF-7，分為空白組（沒(méi)有任何處理過(guò)的MCF-7細(xì)胞）、溶媒對(duì)照組、單獨(dú)DHA組、單獨(dú)紫杉醇組、DHA+TAX組。作用時(shí)間設(shè)置為兩組(24小時(shí)，48小時(shí))采用四甲基偶氮唑鹽比色法檢測(cè)細(xì)胞增殖抑制率。結(jié)果顯示DHA對(duì)人乳腺癌細(xì)胞MCF-7有抑制作用，其中抑制率隨濃度和作用時(shí)間的增加而增加。紫杉醇對(duì)人乳腺癌細(xì)胞MCF-7的抑制作用較為明顯，作用24小時(shí),48小時(shí)后，藥物的抑制作用隨著作用時(shí)間和給藥濃度的增加而增強(qiáng)。雙氫青蒿素、紫杉醇以及二者聯(lián)合用藥對(duì)MCF-7細(xì)胞的抑制率見(jiàn)圖1與圖2。

通過(guò)計(jì)算IC50值發(fā)現(xiàn)藥物作用24h或48h后，DHA+TAX聯(lián)合用藥組的IC50值比DHA組單獨(dú)給藥的IC50值分別要低35%，24小時(shí)DHA IC50為84.20mg/L DHA+PTX為54.40mg/L。

4.討論

紫杉醇是臨床治療乳腺癌的一線藥物。但腫瘤細(xì)胞耐藥性導(dǎo)致紫杉醇的臨床療效不斷降低依舊是一個(gè)有待解決的問(wèn)題[3]。青蒿素是目前最有效且不易產(chǎn)生抗藥性的一線抗瘧藥，現(xiàn)發(fā)現(xiàn)其作用廣泛，對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用亦是近年來(lái)研究的新熱點(diǎn)之一[4]。為提高紫杉醇對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用，增強(qiáng)化療藥物的抗腫瘤效果，將雙氫青蒿素與紫杉醇同時(shí)作用于人乳腺癌細(xì)胞MCF-7，計(jì)算IC50值發(fā)現(xiàn)藥物作用24h或48h后，DHA+TAX聯(lián)合用藥組的IC50值比DHA組單獨(dú)給藥的IC50值分別要低35%，并且雙氫青蒿素和紫杉醇聯(lián)合用藥對(duì)人乳腺癌細(xì)胞MCF-7的抑制率要明顯高于兩藥單獨(dú)作用，且藥物抑制作用隨著作用時(shí)間和給藥濃度的增加而增強(qiáng)。

圖1 雙氫青蒿素、紫杉醇聯(lián)合用藥24h對(duì)MCF-7細(xì)胞的抑制率

圖2 雙氫青蒿素和紫杉醇聯(lián)合用藥48h對(duì)MCF-7細(xì)胞的抑制率

【參考文獻(xiàn)】

[1]林芳，錢(qián)之玉，薛紅衛(wèi)，等。青蒿素和青蒿琥酯對(duì)人體乳腺癌MCF-7細(xì)胞的體外抑制作用比較研究[J].中草藥，2003，34（4）：347-349.

[2]陳堯堯。二氫青蒿素的抗腫瘤活性研究進(jìn)展[J].廣西中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，3：72-74.

[3]LEE J P，HAHN H S，HWANG S J，et al.Selective cyclooxygenase inhibitors increase paclitaxel sensitivity in taxane-resistant ovarian cancer by suppressing P-glycoprotein expression [J].J Gynecol Oncol，2013，24(3)：273-279.

[4]劉玉翠，楊陽(yáng)，金嵩，等.雙氫青蒿素抗腫瘤機(jī)制的研究進(jìn)展[J].吉林醫(yī)藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2014，3：216-218.