蒙醫(yī)小兒石蔻散中羥基紅花黃色素A的含量測定

袁新敏 青 松 金 小 包金蓮

(1.內(nèi)蒙古自治區(qū)食品藥品檢驗所,內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020； 2.烏蘭浩特中蒙制藥有限公司,內(nèi)蒙古 烏蘭浩特 137400)

小兒石蔻散是由石榴、縮陽、萹蓄、紅花、龍骨(煅)、大蒜(炭)、黑冰片(炭)、肉桂、蓽茇、五靈脂(炭)、豆蔻、益智、寒水石(制)等13味藥組成的復方蒙藥制劑，用于治療輕、中型小兒輪狀病毒性腸炎，蒙醫(yī)辨證為巴達干協(xié)日者，為烏蘭浩特中蒙制藥有限公司獨家生產(chǎn)的蒙藥制劑品種?，F(xiàn)行質(zhì)量標準只規(guī)定了石榴與蓽茇的含量測定項。紅花作為處方中起活血通經(jīng)、散瘀止痛、抗炎的主味藥，并未收載含量測定項。據(jù)文獻記載[1]紅花中含有紅花苷、紅花黃色素、多種酚類及揮發(fā)性活性成分，紅花黃色素具有抗凝血、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、抗缺氧、抗炎等作用?！吨袊幍洹穂2]收載的紅花含量測定項下為測定羥基紅花黃色素A。因此本文對制劑中紅花所含羥基紅花黃色素A進行了HPLC含量測定方法研究。經(jīng)方法學考察及陰性對照試驗，表明此法專屬性強，重現(xiàn)性好，可作為小兒石蔻散中紅花的含量測定方法。

1 材料

1.1 樣品來源 樣品由烏蘭浩特中蒙制藥有限公司提供(批號151111、151112、151113)。

1.2 儀器 戴安UltiMate 3000型高效液相色譜儀，DAD檢測器，變色龍色譜工作站。

1.3 試劑與試藥 羥基紅花黃色素A對照品(批號：111637-200905)購自中國食品藥品檢定研究院；甲醇為分析純和色譜純，乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 分析方法驗證

2.1 色譜條件 色譜柱：采用以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的反相色譜柱，填料粒徑5μm，本實驗研究采用Alltima C18柱(250mm×4.6mm,5μ)色譜柱；流動相：甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液(26：2：72)；流速：1.0mL/min；柱溫：30℃；檢測波長為403nm；理論板數(shù)按羥基紅花黃色素A峰計應(yīng)不低于3000。

2.2 供試品溶液的制備 取本品約4.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入25%甲醇50mL，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率50Hz)40min，放冷，再稱定重量，用25%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3 對照品溶液的制備 精密稱取羥基紅花黃色素A對照品適量，加25%甲醇制成每1mL約含60μg的溶液，即得。

3.4 陰性對照試驗 取按處方量并以相同工藝制備的陰性對照樣品(缺紅花)4g，按上述色譜條件及制備方法操作，進樣量10μL。測得結(jié)果為：陰性對照色譜圖中在羥基紅花黃色素A對照品色譜峰相對應(yīng)的保留時間處無色譜峰出現(xiàn)。表明其它藥味對羥基紅花黃色素A的測定無干擾。見圖1、2、3。

圖1 陰性對照色譜

圖2 對照品色譜

圖3 供試品色譜

2.5 線性關(guān)系考察 精密稱取羥基紅花黃色素A對照品6.811mg，置25mL量瓶中，加25%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(濃度為0.2724mg/mL)。分別精密吸取2μL、5μL、10μL、20μL、30μL，按上述色譜條件進樣，測定，以峰面積積分值對進樣量進行回歸分析，結(jié)果羥基紅花黃色素A在272.4ng～8173ng范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。回歸方程為Y=6.6676X+0.2445，r=0.99999。

2.6 穩(wěn)定性試驗 取同一份供試品溶液，分別放置0h、2h、4h、8h、12h、24h后進樣測定，結(jié)果羥基紅花黃色素A在24h內(nèi)的峰面積積分值基本穩(wěn)定不變。RSD為0.3%，具有較好的穩(wěn)定性。

2.7 重復性試驗 取同一批號(批號151111)供試品6份，各取約4.0g，分別按上述色譜條件及制備方法操作，測定每份含量，結(jié)果平均含量為0.6863mg/g,RSD為0.9%，重復性良好。

2.8 加樣回收試驗 取供試品(批號151111)，含量0.6863mg/g)6份，各約2.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別依次精密加入羥基紅花黃色素A對照品1.4mg，再精密加入25%甲醇50mL，搖勻，稱定重量，分別按上述供試品溶液制備方法和色譜條件測定每份含量,計算回收率，結(jié)果見表1。

表1 羥基紅花黃色素A加樣回收試驗結(jié)果

3 樣品含量測定

取本品按上述色譜條件及制備方法操作并測定，3批樣品的測定結(jié)果見表2。

表2 樣品中羥基紅花黃色素A含量測定結(jié)果

4 討論

4.1 提取效率考察 取6份樣品分別超聲處理(功率為250w,頻率為50KHZ)10min、20min、30min、40min、50min，60min,其余操作按上述色譜條件及制備方法測定，結(jié)果超聲處理40min后，羥基紅花黃色素A的含量基本不再增加，故確定超聲時間為40min。

4.2 檢測波長的選擇 取羥基紅花黃色素A對照品適量，加甲醇制成每1mL含60μg的溶液，通過二極管陣列檢測器，自190nm～700nm進行光譜掃描，結(jié)果羥基紅花黃色素A在403nm處有最大吸收并無干擾。結(jié)合《中國藥典》2015年版一部紅花藥材項下含量測定方法，采用403nm作為檢測波長。

4.3 色譜條件耐用性考察 采用Alltima C18柱(250mm×4.6mm,5μ)和Shim-pack C18柱(250 mm × 4.6mm,5μ)兩種品牌色譜柱,按確定的色譜條件進行測定，結(jié)果分離效果好，測定結(jié)果一致。

4.4 運用HPLC法測定小兒石蔻散中羥基紅花黃色素A的含量，方法簡便、分離良好、結(jié)果準確，為全面客觀地建立小兒石蔻散質(zhì)量標準提供了依據(jù)。

[1]常全新,丁麗霞.中藥活性成分分子手冊[M].下冊.學苑出版社,2002:1997.

[2]國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.中國中醫(yī)藥科技出版社，2015：151.