王曉丹,羅小葉,邱樹毅*
(1.貴州大學(xué) 貴州省發(fā)酵工程與生物制藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,貴州 貴陽 550025;2.貴州大學(xué)釀酒與食品工程學(xué)院,貴州 貴陽 550025)
茅臺大曲是一種高溫大曲,是通過傳統(tǒng)固態(tài)發(fā)酵的方法,在65℃條件下,用小麥加母曲經(jīng)過60 d的發(fā)酵自然形成的一個(gè)含有多種微生物體系的發(fā)酵制品[1-3]。由于多種微生物富集在大曲里且在制曲過程中自然生長起來,因此,整個(gè)大曲微生物復(fù)雜而多樣。目前,本課題組前期已經(jīng)采用純培養(yǎng)技術(shù)及分子生物學(xué)手段對茅臺大曲中的細(xì)菌、霉菌及酵母菌進(jìn)行了深入的研究,證實(shí)了茅臺大曲中細(xì)菌的生香動力、霉菌的糖化主力及酵母的酒醅發(fā)酵原動力的作用,詮釋了茅臺大曲中微生物在大曲酒的品質(zhì)及風(fēng)味呈現(xiàn)方面的重要作用[4-6]。
放線菌是大曲“菌系”中的一類具有較高鳥嘌呤(G)和胞嘧啶(C)含量的革蘭氏陽性細(xì)菌,其能產(chǎn)生豐富的活性次生代謝產(chǎn)物,是一種重要的微生物類群。在傳統(tǒng)白酒生產(chǎn)領(lǐng)域有關(guān)放線菌的研究主要集中在白酒發(fā)酵過程中酒醅、大曲、窖泥、發(fā)酵池、曲房和窖房空氣中放線菌的分離及鑒定[7-9],并對其釀造相關(guān)的放線菌揮發(fā)性物質(zhì)及代謝酶活性進(jìn)行了研究[10-11]。同時(shí),放線菌作為抗生素的主要生產(chǎn)菌株,在其他領(lǐng)域的研究較為深入;但作為白酒釀造的四大菌類之一,其某些獨(dú)特的代謝產(chǎn)物具有土味等特征,在白酒釀造過程中影響著酒體的風(fēng)味及風(fēng)格;然而,相對于其他三大類微生物,放線菌在白酒釀造過程中的作用還沒被引起足夠的重視[12]。目前,研究人員僅對茅臺大曲生產(chǎn)過程中周圍土壤及糟醅中的放線菌進(jìn)行了研究[13],對茅臺大曲中放線菌的種類及功能鮮有研究報(bào)道。
本研究建立了一種有效的高溫放線菌分離篩選方法,通過形態(tài)學(xué)、生理生化及26SrDNA分子生物學(xué)對篩選的高溫放線菌進(jìn)行了鑒定,并采用大曲酶系酶活力測定方法對其酶活性質(zhì)及通過固態(tài)微萃取與氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(gaschromatography-massspectrometer,GC-MS)技術(shù)對發(fā)酵代謝產(chǎn)物成分進(jìn)行了分析,為了解放線菌在茅臺大曲中的作用奠定了基礎(chǔ)。
1.1.1 材料
茅臺大曲來源于貴州茅臺酒股份有限公司的茅臺酒車間生產(chǎn)用高溫大曲,產(chǎn)地位于黔北遵義地區(qū)赤水河畔的茅臺鎮(zhèn)(東經(jīng)106°22′、北緯27°51′、海拔423m)。大曲樣品為已經(jīng)在車間貯存半年且準(zhǔn)備用于生產(chǎn)的已經(jīng)粉碎成20目的曲粉,在混合好的曲粉袋中按上、中、下層分別隨機(jī)取20個(gè)樣品,再經(jīng)過充分混合后,迅速放入無菌保鮮袋中,于4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>
1.1.2 化學(xué)試劑
細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒:美國BIOMIGA公司;萘啶酮酸、制霉菌素:上海源葉生物科技有限公司;新生霉素:北京索萊寶科技有限公司;其他試劑均國產(chǎn)分析純。
1.1.3 培養(yǎng)基
分離培養(yǎng)基采用高氏一號培養(yǎng)基(M1)、ISP2培養(yǎng)基(M2)、ISP3培養(yǎng)基(M3)、ISP4培養(yǎng)基(M4)、ISP5培養(yǎng)基(M5)、R2A培養(yǎng)基(M6)、淀粉-甘油培養(yǎng)基(M7)、GYM培養(yǎng)基(M8)、GTY培養(yǎng)基(M9)、HV培養(yǎng)基(M10):實(shí)驗(yàn)室自制。
純化及菌種保藏培養(yǎng)基采用ISP2培養(yǎng)基:分別稱取酵母提取物4 g,麥芽提取物1 g,葡萄糖4 g及瓊脂15 g,用1 L蒸餾水溶解,然后用5mol/LNaOH溶液調(diào)pH值為7.3,121℃滅菌20 min。
液體發(fā)酵培養(yǎng)基:葡萄糖10 g、酵母膏4 g、蛋白胨4 g、酵母浸粉4 g、K2HPO44 g、KH2PO42 g、MgSO4·7H2O 0.5 g,用1L蒸餾水溶解,然后用5mol/LNaOH溶液調(diào)pH值為7.2~7.4,然后121℃滅菌20 min。
酶活力測定培養(yǎng)基采用麩皮培養(yǎng)基:稱取麩皮15 g,用15 mL蒸餾水?dāng)嚢杈鶆?然后121℃滅菌20 min。
固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)香培養(yǎng)基:將粉碎的高粱與未粉碎的高粱按質(zhì)量比為3∶1進(jìn)行混合,然后將混合的高粱與粉碎的小麥按質(zhì)量比為1∶1進(jìn)行混合,加入40%的水混合均勻,潤糧24 h后用瓶進(jìn)行分裝(50 g/瓶),用8層紗布進(jìn)行封口,121℃滅菌20 min。
庫爾特BECKMAN離心機(jī):美國貝克曼庫爾特中國有限公司;Flex cycler多功能聚合酶鏈反應(yīng)(polymerasechain reaction,PCR)儀:德國耶拿分析儀器股份公司;DYCP44P電泳儀:北京欣惠澤奧科技有限公司;ZF25凝膠成像儀:上海方畦儀器有限公司;S3400N掃描電鏡:日本日立有限公司;FD-1C-80冷凍干燥機(jī):上海喬躍電子有限公司;HP6890/5975C氣質(zhì)聯(lián)用儀:美國安捷倫公司。
1.3.1 篩選方法
(1)樣品預(yù)處理
干熱處理(A1):用滅菌的燒杯稱取10g茅臺大曲樣品,然后將燒杯封口并置于100℃烘箱中加熱1 h;最后將大曲樣品放入含有90mL無菌稀釋液并帶有玻璃珠的三角瓶中,然后50℃、200 r/min振蕩培養(yǎng)30 min備用;濕熱處理(A2):稱取10 g茅臺大曲樣品放入含有90 mL無菌稀釋液并帶有玻璃珠的三角燒瓶中,將三角燒瓶置于50℃、200 r/min的恒溫水浴鍋中振蕩培養(yǎng)30min;先干熱后濕熱處理(A3):經(jīng)干熱處理的茅臺大曲樣品懸浮液在50℃恒溫水浴鍋中熱處理10 min;CaCO3富集培養(yǎng)(A4):按照大曲樣品與CaCO3質(zhì)量比為10∶1的比例在無菌燒杯中混合,添加適量無菌水,在濕度為30%、溫度為28℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7 d,然后放入含有90 mL無菌水并帶有玻璃珠的三角燒瓶中,將三角燒杯置于50℃、200 r/min的恒溫水浴鍋中振蕩培養(yǎng)30 min后備用;先CaCO3富集培養(yǎng)后再進(jìn)行濕熱處理(A5)。
(2)分離培養(yǎng)基的選擇
在45~60℃溫度下,比較5種預(yù)處理方法的樣品在10種分離培養(yǎng)基上的生長狀況。
(3)篩選溫度的設(shè)置
分離篩選溫度分別設(shè)置為45℃、50℃、55℃及60℃。
(4)稀釋液的篩選
分別選擇無菌生理鹽水(質(zhì)量濃度為9 g/L)及羧甲基纖維素鈉(carboxyl methyl cellulose-Na,CMC-Na)水溶液(質(zhì)量濃度為2.5 g/L)作為稀釋液[15]。
(5)抑制劑的添加
用0.1 mol/L NaOH溶液將萘啶酮酸配制成質(zhì)量濃度為50 mg/L(A1)、100 mg/L(A2)及150 mg/L(A3)的溶液;用二甲基亞砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)溶液將制霉菌素配制成質(zhì)量濃度為20mg/L(B1)、40mg/L(B2)及60mg/L(B3)的溶液;用無菌水將新生霉素配制成質(zhì)量濃度為30mg/L(C1)、40 mg/L(C2)及50 mg/L(C3)的溶液;用無菌水將重鉻酸鉀配制成質(zhì)量濃度為25 mg/L(D1)、50 mg/L(D2)及75 mg/L(D3)的溶液。同時(shí),抑制劑均用0.22μm的無菌濾膜過濾,然后加入到滅菌培養(yǎng)基中混勻,倒入培養(yǎng)皿中[16]。其中,抑制劑的添加組合如表1所示。
表1 抑制劑的添加組合Table 1 Adding combination of inhibitors
(6)分離涂布的方法
稱取10g茅臺大曲樣品加入到含有90mL無菌稀釋液并帶有玻璃珠的三角燒瓶中,將三角燒杯置于28℃、200r/min的恒溫水浴鍋中振蕩培養(yǎng)30 min。然后取1 mL上述樣品懸浮液進(jìn)行10倍梯度稀釋,分別取0.2 mL各稀釋度菌懸液涂布于分離培養(yǎng)基上,將培養(yǎng)基置于45℃、50℃、55℃及60℃培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng),并進(jìn)行分離純化,分離得到的菌株用ISP2培養(yǎng)基斜面培養(yǎng),并在4℃冰箱中保藏備用。
1.3.2 菌種的鑒定
(1)形態(tài)培養(yǎng)特征觀察
菌株的培養(yǎng)特征觀察參照國際鏈霉菌計(jì)劃(international streptomyces project,ISP)中有關(guān)放線菌的培養(yǎng)特征進(jìn)行觀察[17]。
(2)掃描電鏡觀察
用液體培養(yǎng)基發(fā)酵培養(yǎng)48 h后,離心后棄上清,加入1.5 mL 0.2 mol/L磷酸鹽緩沖液(phosphatebuffer solution,PBS)(分別稱取2.6g NaH2PO4·H2O及29 g Na2HPO4·12H2O,用500 mL蒸餾水溶解)洗滌菌體3次;向菌體沉淀中加入2.5%戊二醛固定液1.5 mL,4℃固定過夜;用30%、50%、70%、90%的叔丁醇/乙醇混合液進(jìn)行脫水,每次5 min,再用100%叔丁醇脫水2次,每次5 min;然后冷凍干燥4 h,干燥后的粉末樣品鍍金膜,用掃描電鏡進(jìn)行觀察[18-19]。
(3)生理生化特征鑒定
對放線菌進(jìn)行明膠液化實(shí)驗(yàn)、淀粉水解實(shí)驗(yàn)、碳源利用實(shí)驗(yàn)、纖維素分解實(shí)驗(yàn)、硝酸鹽實(shí)驗(yàn)及牛奶凝固與胨化實(shí)驗(yàn),并參照《鏈霉菌鑒定手冊》推薦的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基和常用生理生化方法培養(yǎng)、觀察和記錄[14]。
(4)分子生物學(xué)鑒定
采用細(xì)菌基因組脫氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid,DNA)提取試劑盒進(jìn)行DNA提取,以F(5‘-CCTACGGGAGGCAGCAG-3‘)及R(5‘-CCGTCAATTCMTTTRAGT-3‘)為引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,PCR擴(kuò)增程序?yàn)?4℃預(yù)變性5min,然后94℃變性1min,56℃退火1min,72℃延伸1.5min,共30個(gè)循環(huán),最后72℃延伸9 min;取2μL PCR產(chǎn)物用1%瓊脂糖凝膠檢測DNA提取效果;PCR產(chǎn)物在上海立菲生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司進(jìn)行測序;將測序數(shù)據(jù)在美國國家生物技術(shù)信息中心(national center of biotechnology information,NCBI)數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行同源序列搜索,用MEGA 5.05軟件進(jìn)行多序列比對,然后用鄰接法(neighbor-joining,NJ)構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。
1.3.3 放線菌粗酶液的制備及酶活力的測定
(1)粗酶液的制備
用接菌環(huán)取兩環(huán)活化的菌株接種到液體發(fā)酵培養(yǎng)基中,45℃培養(yǎng)2 d,然后以10%的接種量接種到麩皮培養(yǎng)基中,再45 ℃培養(yǎng)5 d,所得培養(yǎng)物與水按照1∶10(g∶mL)的比例混合攪勻,40℃水浴1 h,每隔15 min攪拌1次,最后進(jìn)行過濾,所得濾液為粗酶液。
(2)酶活力的測定
糖化型淀粉酶與纖維素酶活力的測定采用3,5-二硝基水楊酸(dinitrosalicylic acid,DNS)法;酸性蛋白酶活力的測定根據(jù)商業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SB/T 10317—1999《蛋白酶活力測定法》中的方法進(jìn)行測定;脂肪酶活力的測定根據(jù)國標(biāo)GB/T 23535—2009《脂肪酶制劑》中的動態(tài)滴定法進(jìn)行測定;果膠酶活力的測定根據(jù)輕工業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)QB 1502—1992《食品添加劑——果膠酶制劑》中的方法進(jìn)行測定。
糖化型淀粉酶酶活定義:在40℃、pH4.6條件下,1h水解淀粉產(chǎn)生1 mg葡萄糖作為一個(gè)酶活力單位。纖維素酶酶活定義:50℃條件下,1 min催化纖維素水解成1μmol葡萄糖的酶量為一個(gè)酶活力單位(U/g)。蛋白酶酶活定義:在40℃條件下1 min水解酪蛋白產(chǎn)生lμg酪氨酸,定義為1個(gè)蛋白酶活力單位(U/g)。脂肪酶酶活定義:1mL酶液在40℃,pH7.5條件下,1 min水解底物生成1μmol可滴定的脂肪酸為一個(gè)酶活力單位(U/g)。果膠酶酶活定義:1 mL酶液在50℃、pH3.5的條件下,1 h分解果膠產(chǎn)生l mg半乳糖醛酸為一個(gè)酶活單位(U/g)。
1.3.4 放線菌固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物的香氣成分測定
放線菌固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物的香氣成分測定采用氣質(zhì)聯(lián)用法。用接菌環(huán)取兩環(huán)活化的菌株接種到液體發(fā)酵培養(yǎng)基中,45℃培養(yǎng)2 d,以10%的接種量接入高粱與小麥固體發(fā)酵培養(yǎng)基中,再45℃培養(yǎng)7 d。均勻取樣品約10 g,置于50 mL固相微萃取儀采樣瓶中,插入手動進(jìn)樣器,在50℃左右萃取40min后取出,快速移出萃取頭并立即插入氣相色譜儀進(jìn)樣口(溫度250℃)中,熱解吸3 min后進(jìn)樣。氣相色譜條件:色譜柱為Zebron ZB-5MSI彈性石英毛細(xì)管柱(30cm×0.25mm×0.25μm),柱溫為40℃,保留時(shí)間為2 min,以5℃/min升溫至270℃,運(yùn)行時(shí)間為48 min,汽化室溫度為250℃,載氣為高純He(99.999%),柱前壓為7.62 psi,載氣流量為1 mL/min,不分流進(jìn)樣,溶劑延遲時(shí)間為1 min。質(zhì)譜條件離子源為電子電離(electronic ionization,EI)源,離子源溫度為230℃,四極桿溫度為150℃,電子能量為70eV,發(fā)射電流為34.6μA,倍增器電壓為1 294 V;接口溫度為280℃,質(zhì)量范圍為20~450 amu。對總離子流圖中的各峰經(jīng)質(zhì)譜計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)系統(tǒng)檢索及核對NIST2005和Wiley275標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖,確定揮發(fā)性化學(xué)成分,用峰面積歸一化法測定各化學(xué)成分的相對含量。
在45~60℃條件下比較了5種預(yù)處理方法處理的樣品在10種分離培養(yǎng)基上的生長狀況,結(jié)果見表2。由表2可知,使用ISP2培養(yǎng)基(M2)、R2A培養(yǎng)基(M6)、GYM培養(yǎng)基(M8)及GTY培養(yǎng)基(M9)為分離培養(yǎng)基,樣品用A5預(yù)處理方法,羧甲基纖維素鈉(carboxyl methyl cellulose-Na,CMC-Na)作為稀釋劑,B1C1組合為抑制劑,在45℃及50℃溫度下,均能生長出具有細(xì)菌或放線菌形態(tài)特征的菌落。說明Ca2+對穩(wěn)定酶的結(jié)構(gòu)和耐高溫都有重要作用,且濕熱處理能夠有效促進(jìn)嗜熱放線菌孢子的萌發(fā)[20];同時(shí),由于羧甲基纖維素鈉水溶液具有較好的懸浮作用,并且其穩(wěn)定性好、無毒,在食品領(lǐng)域常被作為分散劑使用[21],因此,在分離放線菌時(shí)羧甲基纖維素鈉是一種有效的稀釋劑。同時(shí),B1C1抑制劑組合的分離效果優(yōu)于萘啶酮酸和制霉菌素組合的分離效果。
表2 預(yù)處理方法的選擇Table 2 Selection of pretreatment methods
從茅臺大曲中分離純化出1株具有放線菌菌落形態(tài)特征菌株,本實(shí)驗(yàn)室保藏編號為FBKL4.004。該菌的篩選方法:預(yù)處理方法為A5,稀釋劑為CMC-Na,分離培養(yǎng)基為GTY培養(yǎng)基,抑制劑為B1C1,培養(yǎng)溫度為45℃及50℃。對菌株FBKL4.004進(jìn)行形態(tài)學(xué)特征、生理生化實(shí)驗(yàn)及分子生物學(xué)鑒定。
(1)形態(tài)學(xué)特征
菌株FBKL4.004菌落形態(tài)及掃描電鏡結(jié)果見圖1。由圖1a可知,菌株FBKL4.004單菌落形狀為圓形,基內(nèi)菌絲為棕黃色,氣生菌絲為灰白色,菌落平坦、干燥致密,且無可溶性色素產(chǎn)生。由圖1b可知,通過掃描電鏡觀察FBKL4.004的特征,菌株FBKL4.004菌絲細(xì)長,有直鏈狀的孢子,孢子未分散,菌絲表面有附著物。
圖1 菌株FBKL4.004菌落形態(tài)(a)及掃描電鏡圖(b)Fig.1 Colonial morphology(a)and scanning electron microscope(b)of strain FBKL4.004
(2)生理生化特征
菌株FBKL4.004的生理生化試驗(yàn)包括明膠液化、淀粉水解、碳源利用、牛奶凝固與胨化、纖維素分解等,結(jié)果見表3。
表3 菌株FBKL4.004生理生化特征Table 3 Physiological and biochemical properties of strain FBKL4.004
由表3可知,菌株FBKL4.004能利用碳源范圍較廣,葡萄糖、蔗糖、甘露醇、麥芽糖、棉子糖等均能利用,能使淀粉水解和纖維素分解,明膠液化實(shí)驗(yàn)中使明膠凝固,使牛奶酶凝產(chǎn)酸。
(3)分子生物學(xué)鑒定
圖2 菌株FBKL4.004 16S rDNA PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖Fig.2 Electrophoretogram of 16S rDNA PCR amplification products of strain FBKL4.004
圖3 菌株FBKL4.004的16S rDNA基因序列系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.3 Phylogenetic tree of strain FBKL4.004 based on 16S rDNA gene sequence
以放線菌株FBKL4.004基因組DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增,其PCR產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果見圖2。由圖2可知,菌株FBKL4.004PCR擴(kuò)增結(jié)果在400bp處出現(xiàn)明顯條帶?;蛐蛄袦y定后,測序結(jié)果在GenBank數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行同源序列搜索(BLAST),用MEGA5.05軟件進(jìn)行多序列比對,鄰接(NJ)法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹,結(jié)果見圖3。根據(jù)《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊》、《鏈霉菌鑒定手冊》,結(jié)合菌株FBKL4.004形態(tài)、生理生化特征及分子生物學(xué)比對分析,菌株FBKL4.004與Streptomyces bangladeshensis(NR043164)聚為一類,其同源性為98%,因此將菌株FBKL4.004鑒定為Streptomyces bangladeshensis。該菌于2005年首次從孟加拉國納托爾的土壤中分離到,被歸類到鏈霉菌屬的一個(gè)新物種,其16SrRNA比對分析與嗜熱鏈霉菌(Streptomycesthermoviolaceus)有較高的同源性[22],對革蘭氏陽性菌及某些致病真菌有抗菌活性[23-24],具有生物降解聚(β-羥基丁酸酯)的作用[25]。
醬香大曲的酶系主要有液化型淀粉酶、糖化型淀粉酶、酸性蛋白酶、脂肪酶、纖維素酶、半纖維素酶、單寧酶、果膠酶、酯化酶及漆酶等酶類。本研究對嗜熱放線菌(Streptomycesbangladeshensis)FBKL4.004在釀造過程中產(chǎn)生的酸性蛋白酶、中性蛋白酶、脂肪酶、果膠酶、糖化酶及纖維素酶的活性進(jìn)行了研究,結(jié)果見表4。由表4可知,各種酶的酶活力差異較大,其中酸性蛋白酶和纖維素酶的酶活比較低,分別為3.34 U/g、2.07 U/g,產(chǎn)糖化酶及果膠酶活力最高,分別為345.03 U/g及318.57 U/g。
表4 菌株FBKL4.004酶活力測定結(jié)果Table 4 Determination results of enzyme activity from strain FBKL4.004
圖4 菌株FBKL4.004固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物揮發(fā)性成分總離子流色譜圖Fig.4 Total ions chromatogram of volatile compounds of strain FBKL4.004 solid-state fermentation
對從茅臺大曲中分離得到的嗜熱放線菌株FBKL4.004進(jìn)行了固態(tài)發(fā)酵,并通過固態(tài)微萃取與氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對其揮發(fā)性成分組成及風(fēng)味成分進(jìn)行了測定,總離子流色譜圖結(jié)果見圖4,各香氣成分鑒定結(jié)果見表5。
表5 菌株FBKL4.004固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物揮發(fā)性成分組成分析結(jié)果Table 5 Analysis results of volatile components in strain FBKL4.004 solid-state fermentation products
由表5可知,嗜熱放線菌FBKL4.004固態(tài)發(fā)酵代謝產(chǎn)物種類豐富,主要以酯類物質(zhì)為主(34.57%),包括肉豆蔻酸甲酯、十二酸甲酯及14-甲基-十五烷酸甲酯等,其次是萜烯類物質(zhì)(18.51%)及吡嗪類(17.63%)。
本研究建立了一種有效的分離放線菌的方法,并從茅臺大曲中分離篩選出了1株嗜熱放線菌(Streptomyces bangladeshensis)FBKL4.004。通過對其酶活和固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物揮發(fā)性成分進(jìn)行探討,發(fā)現(xiàn)該菌株產(chǎn)糖化酶和果膠酶的能力較為突出,分別為345.03 U/g及318.57 U/g;同時(shí),通過對其固態(tài)發(fā)酵揮發(fā)性成分進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)酯類物質(zhì)含量最高(34.57%),其次為萜烯類物質(zhì)(18.51%)及吡嗪類物質(zhì)(17.63%)。本研究為發(fā)現(xiàn)固態(tài)發(fā)酵中更多的微生物資源及其在白酒發(fā)酵生產(chǎn)中的作用及應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。
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