洋蔥醇提物對(duì)離體蟾蜍心臟功能的影響*

呂云瑤 ，王興娜 ，張夢(mèng)蕓 ，夏粉芳 ，鄭嶺楠 ，楊春艷 ，周春陽(yáng) ，張建武 △

1川北醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)院，四川 南充 637007；2川北醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院/藥物研究所

洋蔥(Allium cepaL.)，別名玉蔥、圓蔥、蔥頭，為百合科(Liliaceae)蔥屬(Allium)多年生草本植物[1]。洋蔥中主要活性成分有含硫化合物、甾體皂甙、類(lèi)黃酮化合物以及多糖等，具有降血壓、降血糖、降血脂、利尿、抗衰老、抗癌、殺菌、祛痰、健胃潤(rùn)腸等多種藥理及保健功能[2-5]。本研究通過(guò)離體蟾蜍心臟灌流實(shí)驗(yàn)，觀察洋蔥醇提物對(duì)蟾蜍心率和心肌張力的影響，初步探討其機(jī)制，為洋蔥的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供合理的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 蟾蜍60只，雌、雄兼?zhèn)洌w質(zhì)量110～130 g，精神狀態(tài)良好，購(gòu)自川北醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)：SYXK(川)2013-076。

1.2 藥品及藥材 洋蔥采集于甘肅省天水市，由川北醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院藥用植物學(xué)楊蘭老師鑒定為洋蔥；任氏液由川北醫(yī)學(xué)院機(jī)能實(shí)驗(yàn)中心配制。

1.3 儀器 蛙類(lèi)通用實(shí)驗(yàn)器械，肌張力換能器(四川成都泰盟公司)；電子天平(上海醫(yī)用激光儀器廠)；BL-420生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)(四川成都泰盟公司)；加樣槍(芬蘭biohit)。

1.4 方法

1.4.1 洋蔥醇提物的制備 新鮮洋蔥2 kg，鼓風(fēng)干燥箱45℃干燥，粉碎。稱(chēng)取100.90 g洋蔥粉，70%乙醇回流提取3次(料液比為1∶10)，得浸膏76.55 g。取浸膏75.72 g，溫水混懸。先用二氯甲烷萃取，40℃減壓濃縮得二氯甲烷部位1.43 g；然后采用水飽和的正丁醇進(jìn)行萃取，減壓濃縮后于65℃水浴蒸干，得正丁醇部位6.26 g。稱(chēng)取正丁醇部位244.6 mg，加仁氏液30 mL超聲溶解后4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4.2 離體蟾蜍標(biāo)本制備[6-7]采用斯氏法蛙心插管，取一只蟾蜍，破壞腦和脊髓，背位固定于蛙板上暴露心臟，在左右主動(dòng)脈下穿一線，將心臟翻至頭端，在背面結(jié)扎前后腔靜脈，在左主動(dòng)脈下穿一線，距動(dòng)脈圓錐2～3 mm處結(jié)扎，再?gòu)淖笥抑鲃?dòng)脈下方穿一線打活結(jié)留作固定插管用。持眼科剪在動(dòng)脈圓錐前端處向心臟剪一斜口，將盛有任氏液的蛙心插管由此口插入心室腔內(nèi)，連同近旁血管一起結(jié)扎固定，將心臟離體，任氏液反復(fù)沖洗心室內(nèi)余血，至插管內(nèi)灌流液完全澄清無(wú)色，然后保持插管內(nèi)的灌流液1 mL，劃線作標(biāo)記。

1.4.3 離體蟾蜍心活動(dòng)記錄 蟾蜍心經(jīng)蛙心夾和絲線與張力換能器相連，通過(guò)BL-420生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)記錄心搏曲線。

1.5 分組及給藥方法

1.5.1 空白對(duì)照組 先在蟾蜍心套管中加入1 mL任氏液和100 μL任氏液，觀察離體蟾蜍心在正常情況下的自主收縮活動(dòng)2分鐘，描記一段曲線。以此作為空白對(duì)照組。

1.5.2 洋蔥醇提物不同劑量組 加入1 mL任氏液和100 μL的洋蔥醇提物使其終濃度為0.8、1.6、2.4 mg/mL，描記5分鐘，以此作為洋蔥醇提物組。

1.5.3 維拉帕米組 加入1 mL任氏液和100 μL維拉帕米使其終濃度為0.000 5 mg/mL，描記5分鐘，以此作為陽(yáng)性對(duì)照組。

測(cè)定每次加藥后5分鐘內(nèi)蟾蜍心肌的收縮力及收縮頻率的變化情況，以此分析不同濃度洋蔥醇提物對(duì)正常離體蟾蜍心臟的影響，每組10只。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料以(±s)表示，進(jìn)行t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同濃度洋蔥醇提物對(duì)離體蟾蜍心臟心率的影響 加入0.8、1.6、2.4 mg/mL濃度洋蔥醇提物后離體蟾蜍心率變化不大或略減慢，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，加入0.0005 mg/mL維拉帕米5分鐘后心率明顯下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表 1。

表1 洋蔥醇提物對(duì)離體蟾蜍心臟心率的影響(±s)

表1 洋蔥醇提物對(duì)離體蟾蜍心臟心率的影響(±s)

注：＊表示與給藥前空白對(duì)照組比較，P＜0.05

組別 只數(shù) 濃度/(m g·m L-1) 心率/(次·m i n-1)給藥前 給藥后1 m i n 給藥后5 m i n空白對(duì)照組 1 0 - 3 4.4±4.5 3 4.4±4.5 3 4.4±4.5 0.8 3 0.4±3.8 2 9.6±3.7 2 9.3±3.7洋蔥醇提物組 1 0 1.6 3 1.4±3.4 3 1.1±4.1 3 0.8±4.3 2.4 3 2.8±4.5 3 1.2±4.0 3 0.3±3.6維拉帕米組 1 0 0.0 0 0 5 3 5.5±4.1 3 3.0±4.6 3 0.9±4.8＊

2.2 不同濃度洋蔥醇提物對(duì)離體蟾蜍心臟平均收縮力的影響 加入0.8、1.6、2.4 mg/mL濃度的洋蔥醇提物后蟾蜍心肌平均收縮力逐漸下降，在1分鐘左右達(dá)到谷值，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，然后逐漸上升，在5分鐘左右達(dá)到峰值，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，蟾蜍心臟收縮力呈現(xiàn)出典型的先下降后升高的表現(xiàn)，見(jiàn)表2、圖1。

2.3 不同濃度洋蔥醇提物對(duì)離體蛙心心力峰峰值的影響 加入0.8、1.6、2.4 mg/mL洋蔥醇提物后，離體蛙心力峰峰值逐漸下降，在1分鐘左右達(dá)到谷值，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，然后心力峰峰值逐漸上升，在5分鐘左右達(dá)到峰值，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，蛙心收縮力呈現(xiàn)出典型的先下降后升高的表現(xiàn)，見(jiàn)表3、圖1。

表2 洋蔥醇提物對(duì)離體蟾蜍心臟平均收縮力的影響(±s)

表2 洋蔥醇提物對(duì)離體蟾蜍心臟平均收縮力的影響(±s)

注：與給藥前空白對(duì)照組比較，＊表示P＜0.05，＊＊表示P＜0.01

組別 只數(shù) 濃度/(m g·m L-1) 平均收縮力/g給藥前 給藥后1 m i n 給藥后5 m i n空白對(duì)照組 1 0 - 2.8 7±0.3 1 2.8 3±0.2 1 2.8 9±0.2 2 1 0 0.8 3.6 1±0.2 5 3.3 1±0.2 6＊ 3.8 6±0.2 2＊洋蔥醇提物組 1 0 1.6 3.1 1±0.3 3 2.7 4±0.2 5＊＊ 3.6 7±0.3 9＊＊1 0 2.4 2.9 9±0.5 2 2.1 9±0.4 6＊＊ 3.9 8±0.8 1＊＊維拉帕米組 1 0 0.0 0 0 5 3.0 2±0.2 7 2.6 5±0.3 6＊＊ 2.2 8±0.3 1＊＊

表3 洋蔥醇提物對(duì)離體蟾蜍心臟心力峰峰值的影響(±s)

表3 洋蔥醇提物對(duì)離體蟾蜍心臟心力峰峰值的影響(±s)

注：與給藥前空白對(duì)照組比較，＊表示P＜0.05，＊＊表示P＜0.01

組別 只數(shù) 質(zhì)量濃度/(m g·m L-1) 心力峰峰值/g給藥前 給藥后1 m i n 給藥后5 m i n空白對(duì)照組 1 0 - 3.8 8±0.4 1 3.5 3±0.4 9 3.5 9±0.4 2 1 0 0.8 3.9 1±0.3 7 3.1 2±0.1 9＊＊ 4.9 1±0.6 2＊＊洋蔥醇提物組 1 0 1.6 4.2 3±0.3 5 3.3 1±0.2 5＊＊ 4.7 7±0.2 5＊＊1 0 2.4 4.0 8±0.3 3 2.5 2±0.4 5＊＊ 4.9 6±0.5 7＊＊維拉帕米組 1 0 0.0 0 0 5 4.3 5±0.2 9 3.2 7±0.4 6＊＊ 2.3 5±0.4 1＊＊

圖1 洋蔥醇提物對(duì)離體蟾蜍心肌收縮力和心率的影響

3 討論

本研究中加入0.8、1.6、2.4 mg/mL濃度洋蔥醇提物后，離體蟾蜍心臟心率變化不大或略減慢。然而無(wú)論是離體蟾蜍心臟的平均收縮力還是心力峰峰值均先逐漸下降，在1分鐘左右達(dá)到谷值，然后逐漸上升，在5分鐘左右達(dá)到峰值，蟾蜍心臟收縮力呈現(xiàn)典型的先下降后升高的表現(xiàn)。

本研究檢測(cè)各濃度洋蔥醇提物溶液的pH值為5～6，呈酸性，而酸性溶液可降低肌肉收縮的效果，可能是心肌收縮力先下降的原因之一，這與黃鳳玲等[8]報(bào)道的灌流大劑量洋蔥液后心臟中的環(huán)境呈酸性，從而迅速抑制心肌收縮的結(jié)果基本一致。但是本研究發(fā)現(xiàn)隨著洋蔥醇提物濃度的增高，心臟抑制作用明顯增強(qiáng)，并有一定濃度依賴(lài)性，這可能是洋蔥中含有的抑制心臟功能的類(lèi)黃酮化合物槲皮素作用的結(jié)果，與楊春嵐等[9]報(bào)道槲皮素可以使離體蟾蜍心臟的心肌收縮力明顯下降大致相同。

現(xiàn)代研究[10]表明洋蔥中除了含有類(lèi)黃酮化合物外，同時(shí)每100 g洋蔥中含有鈣40 mg，硒236 mg等。而鈣離子是興奮收縮偶聯(lián)的關(guān)鍵物質(zhì)，心肌細(xì)胞外鈣離子濃度增高，鈣離子內(nèi)流增多可使心肌收縮力增強(qiáng)[11]，硒具有較強(qiáng)的抗氧化、清除自由基和逆轉(zhuǎn)冠心病及心衰的作用[12]，同時(shí)可以增強(qiáng)心肌收縮力，化偉[13]的研究顯示硒有增強(qiáng)心肌收縮力的作用，李貴明等[14]的研究也提示適量的硒能增加心肌收縮力。本研究結(jié)果表明，離體蟾蜍心肌收縮力迅速下降后逐漸上升，在5分鐘左右達(dá)到峰值，因此推斷其上升作用可能與洋蔥中含有鈣和硒元素有關(guān)。

但是，洋蔥中含有的其他化合物也可能引起心肌收縮力的降低或者增高，具體原因需對(duì)洋蔥醇提物純化后進(jìn)一步研究。

[1]劉良科，趙麗娟.洋蔥生物活性物質(zhì)的研究進(jìn)展[J].懷化學(xué)院學(xué)報(bào)，2009，28(5)：55-58.

[2]靳瓊，弓志青，楊建剛，等.洋蔥的價(jià)值及其加工產(chǎn)品[J].中國(guó)食物與營(yíng)養(yǎng)，2013，19(12):29-31.

[3]李旻，趙磊，王金鵬，等.洋蔥的研究[J].長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，26(4):603-604.

[4]王文亮，王世清，李曉玲，等.洋蔥的活性成分藥理功效及產(chǎn)品開(kāi)發(fā)綜述[J].中國(guó)食物與營(yíng)養(yǎng)，2013，19(11)：37-39.

[5]劉金娟，楊成流，孫勇，等.洋蔥提取物誘導(dǎo)人肝癌HepG2細(xì)胞凋亡及其分子機(jī)制研究[J].中國(guó)藥學(xué)雜志，2014，49(11)：967-970.

[6]鄭倩，曹弟勇，劉紅，等.醫(yī)學(xué)機(jī)能學(xué)實(shí)驗(yàn)[M].北京：科學(xué)出版社，2009：127-131.

[7]王小君，孫娜.蛙心灌流實(shí)驗(yàn)中插管方法的改進(jìn)[J].華北煤炭醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，12(4):457-458.

[8]黃鳳玲，劉建輝，梁芳，等.洋蔥液對(duì)離體蛙心心肌收縮力的影響[J].湘潭師范學(xué)院學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2014，26(1)：92-94.

[9]楊春嵐，封峰，井發(fā)強(qiáng)，等.槲皮素對(duì)離體蟾蜍心功能影響的實(shí)驗(yàn)研究[J].軍民兩用技術(shù)與產(chǎn)品，2014(11)：244.

[10]江成英，郭宏文，張文學(xué)，等.洋蔥的營(yíng)養(yǎng)成分及其保健功效研究進(jìn)展[J].食品與機(jī)械，2014，30(5)：305-309.

[11]胡志安，王莎莉.生理學(xué)[M].北京:科學(xué)出版社，2014:67.

[12]劉仲偉，牛小麟，高登峰.硒與心臟疾病[J].心臟雜志，2013，25(1):96-99.

[13]化偉.硒對(duì)牛蛙心功能的影響[J].咸寧醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2012，26(4)：283-285.

[14]李貴民，石鐵躍，辛裕梅，等.硒對(duì)離體蛙心肌生理機(jī)能實(shí)驗(yàn)觀察[J].中國(guó)地方病防治雜志，1999，14(4)：237-238.