小白菊注射液對大鼠的亞慢性毒性試驗研究

高晶晶，陳成勛，郭永軍，朱國霞，李 源，董惠峰，王立紅，張鳳洪，劉鼎闊,4*

(1. 天津國際生物醫(yī)藥聯(lián)合研究院 天津300450；2. 天津市水產(chǎn)生態(tài)及養(yǎng)殖重點實驗室，天津農(nóng)學(xué)院水產(chǎn)學(xué)院 天津300384；3. 天津市飼用微生物制劑企業(yè)重點實驗室，鼎正動物藥業(yè)(天津)有限公司 天津300383；4.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院 北京100094)

小白菊注射液是以中藥材小白菊經(jīng)提取加工制成的注射液，具有清熱解毒消炎的作用。主要成分為小白菊內(nèi)酯，小白菊內(nèi)酯是小白菊花蕾中的提取物，具有抗炎、抗腫瘤、止痛等功效[1]。目前國內(nèi)外對于小白菊內(nèi)酯的研究，主要集中在其對于乳腺癌、膽管癌、胰腺癌、膀胱癌、前列腺癌、白血病、黑色素瘤和神經(jīng)元等疾病的抗腫瘤作用[2]，對于小白菊內(nèi)酯藥物毒性的研究尚未見報道，本試驗旨在考察小白菊注射液長期大劑量用藥后可能出現(xiàn)的癥狀和嚴重程度，毒副反應(yīng)的靶器官及其恢復(fù)和發(fā)展情況，以便為臨床較長期大劑量應(yīng)用提供安全性依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 受試藥物

小白菊注射液藥物，批號：20170601，由鼎正動物藥業(yè)(天津)有限公司提供。規(guī)格 10,mL/支(每毫升含小白菊提取物以小白菊內(nèi)酯計為20.0,mg)。

1.2 實驗動物

4周齡清潔級SD大鼠80只，雌雄各半，體重在130～150,g之間，由天津市實驗動物中心提供，動物合格證號為：SC2017-0325。

1.3 給藥劑量的選擇及分組

試驗設(shè) 3個給藥劑量組，腹腔注射給藥。本試驗高劑量組大鼠給藥劑量為1.5,mL/100,g體重，腹腔注射。并按等比系數(shù) 1：2，依次設(shè)定中劑量組0.75,mL/100,g體重，低劑量組按 0.325,mL/100,g體重，并設(shè)一個生理鹽水對照組，0.75,mL/100,g體重，均腹腔注射。每組動物20只，雌雄各半。試驗開始時動物體重的差異應(yīng)不超過平均體重的±20%,。每天腹腔注射給藥一次，連續(xù)給藥35,d(即共5周)。

1.4 試驗期間臨床觀察

每天觀察大鼠的健康狀況、采食、飲水、體重等變化。分別于第 1、2、3、4、5周稱量體重，給藥結(jié)束后計算平均攝食量和飼料利用率(動物每食入 100,g飼料所增長的體重克數(shù))。將給藥劑量組與對照組進行比較和統(tǒng)計學(xué)處理，及時記錄和分析大鼠的中毒癥狀及出現(xiàn)各癥狀的先后次序、時間。

1.5 血液學(xué)和血液生化檢測

于第4周周末，稱重并采血進行血液學(xué)和血液生化指標的檢測。

血液學(xué)檢測包括：血紅蛋白(Hg)、紅細胞計數(shù)(Ec)、白細胞計數(shù)(Lc)、嗜中性(NL)、嗜酸性(AL)、嗜堿性(BL)、淋巴(LM)、單核(ML)。

血液生化檢測包括：丙氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶(ALT)、天門冬氨酸轉(zhuǎn)換酶(AST)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、血糖(GLU)、白蛋白(ALB)、總蛋白(TP)、總膽固醇(CHO)、甘油三酯(TG)。

1.6 病理檢查

1.6.1 大體剖檢

給藥結(jié)束后，各組取 10只大鼠(雌雄各半)進行剖檢(結(jié)合采血進行)。做好記錄，并將重要器官和組織固定保存。

1.6.2 臟器稱重

剖檢試驗大鼠的同時，稱取大鼠體重及各主要臟器(包括心、肝、脾、胃、腸、肺、腎、睪丸及卵巢)重量，做好記錄。計算各臟器相對重量(臟器重/體重)，即臟器系數(shù)。

1.6.3 組織病理學(xué)檢查

對高劑量組及對照組大鼠的主要臟器進行組織病理學(xué)檢查，發(fā)現(xiàn)病變后再對較低劑量組大鼠的相應(yīng)器官及組織進行檢查。組織病理學(xué)檢測項目包括：脾、肺、肝、腎、胃、腸、睪丸(♂)及子宮(♀)。

1.7 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果

2.1 臨床表現(xiàn)

各組大鼠腹腔注射給藥期間各組均無死亡，臨床表現(xiàn)正常。給藥期間，各劑量組大鼠體重增重、進食情況及臟器系數(shù)與對照組相比均無顯著差異(P＞0.05)(見表 1、表 2和表 3)。母鼠的體重、耗料及飼料利用率較公鼠少，可解釋為性別差異所造成。

表1 小白菊注射液對大鼠體重增重的影響(g)Tab.1 The effects of Parthenolide Injection on weight gain of rats

表2 小白菊注射液對大鼠進食情況的影響Tab.2 The effects of Parthenolide Injection on food intake of rats

2.2 血液學(xué)及血液生化參數(shù)

給藥結(jié)束后，各組大鼠進行血液學(xué)和血液生化參數(shù)測定結(jié)果分別見表 4和表 5。統(tǒng)計學(xué)分析顯示，與對照組相比小白菊注射液各劑量組的血液學(xué)和血液生化參數(shù)之間差異不顯著(P＞0.05)。

表3 小白菊注射液對大鼠臟器系數(shù)的影響(%)Tab.3 The effects of Parthenolide Injection on organ coefficient of rats

表4 小白菊注射液給藥結(jié)束后大鼠血液學(xué)檢測指標Tab.4 The effects of Parthenolide Injection on hematology of rats

表5 小白菊注射液給藥結(jié)束后的大鼠血液生化學(xué)檢測指標Tab.5 The effects of Parthenolide Injection on blood biochemistry of rats

3 討 論

本實驗室根據(jù)《新獸藥一般毒性試驗技術(shù)要求》[3]進行了小白菊注射液 35,d亞慢性毒性試驗。本試驗中，小白菊注射液連續(xù)注射35,d后，各劑量組的大鼠生長發(fā)育良好，無一死亡，大鼠增重、攝食、血常規(guī)及血液生化指標與對照組相比均未發(fā)生顯著性變化(P＞0.05)，且均在正常范圍之內(nèi)。該藥物注射35,d亞慢性毒性試驗對大鼠各項觀察指標未產(chǎn)生明顯影響，對大鼠不顯示亞慢性毒性，35,d重復(fù)給藥亦無毒性反應(yīng)。因此，綜上所述小白菊注射液對靶動物的臨床安全性在可接受范圍內(nèi)。

小白菊內(nèi)酯可以通過其生物活性位點 ɑ-甲基-γ-內(nèi)酯環(huán)這一特殊結(jié)構(gòu)，與細胞中的多種功能性蛋白產(chǎn)生特異性結(jié)合，從而對信號通路中下游的蛋白表達進行調(diào)控[4]。有研究表明，小白菊內(nèi)酯對細胞生長的抑制作用是由于其對細胞轉(zhuǎn)錄因子 NF-κB、STATs、JNK 的表達的抑制，誘發(fā) ROS反應(yīng)[5]。此外，小白菊內(nèi)酯還具有潛在的抗炎、抗氧化等生物活性，它可通過影響COX-2、PGE2和iNOS的表達，起到抗炎作用[6]。

[1]韓琨景，丁楊，楊萬山. 小白菊提取物的藥理作用[J]. 醫(yī)學(xué)綜述，2012，18(11)：1735-1737.

[2]徐惠君，佟仲生，賈勇圣，等. 小白菊內(nèi)酯抗腫瘤作用機制研究進展[J]. 中成藥，2013，35(9)：1985-1988.

[3]中華人民共和國農(nóng)業(yè)部. 新獸藥一般毒性試驗技術(shù)要求[S]. 1991.

[4]Kim I H，Kim S W，Kim S H，et al. Parthenolide induced apoptosis of hepatic stellate cells an anti-fibrotic effects in an in vivo rat model [J]. Experim Molec Med，2012，44(7)：448.

[5]劉玉輝，歐瑜. 小白菊內(nèi)酯結(jié)構(gòu)及藥理特性的研究進展[J]. 藥物生物技術(shù)，2013(6)：586-589.

[6]張輝，陶建峰，王愛軍，等. 小白菊內(nèi)酯對帕金森病MPTP模型小鼠抗炎作用的研究[J]. 中風(fēng)與神經(jīng)疾病，2015，32(2)：158-160.