急慢性特發(fā)性血小板減少性紫癜患兒的差異表達(dá)基因特征及交互作用網(wǎng)絡(luò)分析

任曉梅，劉啟玲，辛 寶，張榮強(qiáng)

陜西中醫(yī)藥大學(xué) 公共衛(wèi)生學(xué)院，陜西咸陽 712046

ActaAcadMedSin，2018,40(2)：225-232

特發(fā)性血小板減少性紫癜(idiopathic thrombocytopenic purpura，ITP)，又稱原發(fā)性血小板減少性紫癜，是一種原因不明的、器官特異性自身免疫性出血性疾病，是由于人體產(chǎn)生抗血小板自身抗體導(dǎo)致單核巨噬系統(tǒng)破壞血小板過多造成血小板減少。患者表現(xiàn)為皮膚散在出血點(diǎn)及其他出血癥狀，如鼻衄、牙齦出血等。紫癜及淤斑可出現(xiàn)在任何部位的皮膚或黏膜，常見于下肢及上肢遠(yuǎn)端。ITP在兒童中年發(fā)病率5/10萬～10/10萬，成人年發(fā)病率2/10萬[1]。發(fā)病率育齡期女性高于男性，其他年齡階段男女比例無差別。根據(jù)持續(xù)時(shí)間可以將ITP分為新診斷、持續(xù)性(持續(xù)時(shí)間在3～12個(gè)月)及慢性(持續(xù)時(shí)間≥12個(gè)月)，新診斷的ITP即急性ITP[2]。本病除極少數(shù)因血小板極低發(fā)生危及生命的出血外，一般預(yù)后良好。作為兒童期常見的出血性疾病，急性ITP通常發(fā)生在病毒感染后，大多患者可自行恢復(fù)，10%～20%患者病程持續(xù)時(shí)間較長，轉(zhuǎn)變?yōu)槁訧TP[3]。慢性型患者反復(fù)發(fā)作，病程較長，目前尚無有效的治療藥物。ITP的發(fā)生機(jī)制目前尚不清楚，有學(xué)者提出持續(xù)及慢性ITP患者的發(fā)病機(jī)制不同于急性者[2，4]，除了體液免疫外，細(xì)胞免疫在ITP尤其是慢性ITP的發(fā)病中發(fā)揮關(guān)鍵的作用[5- 6]，目前T淋巴細(xì)胞異常及相關(guān)細(xì)胞因子被認(rèn)為是ITP發(fā)病機(jī)制的核心[7]。研究表明在ITP患者中，T細(xì)胞活化信號(hào)通路相關(guān)分子Cbl-b基因水平顯著降低，F(xiàn)as相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白凋亡通路中部分上、下游分子存在異常表達(dá)[8- 9]。然而單個(gè)基因的研究無法反映ITP患者T細(xì)胞基因表達(dá)譜改變的全貌，本研究以患者T細(xì)胞為研究對(duì)象，通過生物信息學(xué)方法分析急性和慢性ITP患者T細(xì)胞基因表達(dá)差異情況，旨在為慢性ITP的早期發(fā)現(xiàn)和治療提供依據(jù)。

材料和方法

數(shù)據(jù)來源以“Idiopathic Thrombocytopenic Purpura”為關(guān)鍵詞在美國國立生物技術(shù)信息中心(NCBI)的GEO公共數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行檢索，獲得Margareta Jernas等學(xué)者于2013年5月提交并于2017年2月更新的GSE46922基因芯片數(shù)據(jù)(https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/query/acc.cgi?acc=GSE46922)?；蛐酒瑪?shù)據(jù)來源于13例患者(急性ITP患者7例、慢性ITP患者6例)的T細(xì)胞RNA標(biāo)本。GSE數(shù)據(jù)集總共包含54 675個(gè)基因的表達(dá)資料，本研究重點(diǎn)分析其生物信息學(xué)特征。

差異表達(dá)基因分析QOE3.0(http：//www.qlucore.com)是由瑞典隆德大學(xué)研制的新型生物學(xué)分析軟件，本研究用QOE對(duì)芯片數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。將GSE46922導(dǎo)入到QOE和R語言軟件中，對(duì)數(shù)據(jù)集中的基因芯片數(shù)據(jù)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)化處理(μ=0，σ=1)，盡可能降低誤差的影響；通過過濾后行兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，篩選出急性與慢性ITP兩組的差異表達(dá)基因。差異基因的篩選標(biāo)準(zhǔn)為：P<0.05，q<0.05，差異倍數(shù)>2。q值是差異基因假陽性的概率，q值越低，代表該基因出現(xiàn)假陽性的概率越低，可驗(yàn)證性越高。同時(shí)對(duì)數(shù)據(jù)集GSE46922中的基因芯片數(shù)據(jù)行主成分分析、聚類分析等。

差異表達(dá)基因的蛋白互作用網(wǎng)絡(luò)將兩組患者差異表達(dá)的前250個(gè)基因相應(yīng)的蛋白名稱上傳至Networkanalyst在線分析系統(tǒng)(http：//www.networkanalyst.ca/faces/home.xhtml)，繪制兩組差異表達(dá)基因的蛋白-蛋白相互作用圖譜。根據(jù)網(wǎng)絡(luò)中每個(gè)節(jié)點(diǎn)的連通度值的大小判斷每個(gè)節(jié)點(diǎn)在網(wǎng)絡(luò)中的重要性，連通度值越大，表明該節(jié)點(diǎn)在網(wǎng)絡(luò)中的作用越重要。

差異表達(dá)基因的基因本體功能富集分析GenCliP 2.0(http：//www.genclip.com/)是一個(gè)能夠?qū)Σ町惐磉_(dá)基因進(jìn)行特定功能聚類的文獻(xiàn)挖掘軟件[10]。將差異最明顯的20個(gè)基因列表上傳至人類基因功能和網(wǎng)絡(luò)分析軟件GenCliP，根據(jù)需要調(diào)節(jié)各類分析的主要參數(shù)，分析兩組患者差異表達(dá)基因的基因本體(gene ontology，GO)功能富集狀況。

基因雷達(dá)調(diào)控網(wǎng)絡(luò)分析在上述蛋白-蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)和GO功能富集分析的基礎(chǔ)上，采用GCBI基因雷達(dá)分析關(guān)鍵基因的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。GCBI基因雷達(dá)可通過獲得多個(gè)數(shù)據(jù)庫的支撐以分析每個(gè)基因的具體信息。目前，GCBI基因雷達(dá)通過分析每個(gè)數(shù)據(jù)庫被注釋次數(shù)反映5萬多個(gè)基因不同層面的信息。

差異基因的疾病預(yù)測(cè)能力評(píng)價(jià)受試者工作特征(receiver operating characteristic，ROC)曲線是一種全面、準(zhǔn)確評(píng)價(jià)診斷試驗(yàn)的有效方法，ROC曲線下面積(area under curve，AUC)>0.5的情況下，AUC越接近于1，說明診斷效果越好。本研究ROC 曲線用于主要差異表達(dá)基因?qū)β訧TP的預(yù)測(cè)能力評(píng)價(jià)。

結(jié) 果

數(shù)據(jù)的預(yù)處理原始芯片數(shù)據(jù)集進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化(μ=0，σ=1)處理后的相對(duì)Log表達(dá)值分布情況顯示，均數(shù)、中位數(shù)基本位于一條直線，提示數(shù)據(jù)穩(wěn)定可以確保后續(xù)分析結(jié)果的穩(wěn)定性(圖1)。

急性與慢性ITP基因表達(dá)譜分析根據(jù)R軟件分析結(jié)果，急性與慢性ITP患者的基因表達(dá)譜有明顯差異。所檢測(cè)的54 675個(gè)基因中，急性與慢性ITP之間共有457個(gè)(0.84%)差異表達(dá)基因。與急性ITP相比，慢性ITP表達(dá)下調(diào)的基因有159個(gè)基因(34.79%)，表達(dá)上調(diào)的基因有298個(gè)(65.21%)(圖2、表1)。

圖 1 標(biāo)準(zhǔn)化后的相對(duì)Log表達(dá)值分布情況Fig 1 The distribution of relative Log expression after standardization

差異表達(dá)基因涉及的GO功能富集分析采用GenClip在線軟件分析兩組患者前20個(gè)差異表達(dá)基因的GO功能富集狀況，提示差異表達(dá)基因與JUN激酶活性等功能相關(guān)(圖3)。相似生物學(xué)功能聚類熱圖顯示，ITCH基因和誘導(dǎo)T細(xì)胞的免疫耐受有關(guān)，同時(shí)能夠起到促進(jìn)T細(xì)胞活化和促進(jìn)細(xì)胞間黏附的作用(圖4)。

蛋白-蛋白互作用網(wǎng)絡(luò)根據(jù)各個(gè)節(jié)點(diǎn)的連通度判斷，差異表達(dá)基因的蛋白-蛋白互作用網(wǎng)絡(luò)的核心蛋白分別是下調(diào)的JUN蛋白和上調(diào)的ITCH蛋白，提示JUN和ITCH在慢性ITP的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮關(guān)鍵作用(圖5)。

ITP：特發(fā)性血小板減少性紫癜ITP：idiopathic thrombocytopenic purpuraA. 火山圖；B. 聚類熱圖A. volcano plot；B. clustering heat maps圖 2 急性和慢性ITP患者基因表達(dá)譜的比較Fig 2 Gene expression profiles between acute and chronic ITP patients

序號(hào)No.縮寫Abbreviation基因名稱Genename差異倍數(shù)Foldchange序號(hào)No.縮寫Abbreviation基因名稱Genename差異倍數(shù)Foldchange1SF1剪接因子1Splicingfactor15.34820711ARRB1視紫紅質(zhì)抑制蛋白β1Visualpurplearrestin,beta1-3.348172CAMTA1鈣調(diào)蛋白結(jié)合轉(zhuǎn)錄激活子1Calmodulinbindingtranscriptionac-tivator14.65629312DTX1Deltex同源物1Deltexhomolog1-3.3620033MID2中線蛋白2Midlineprotein24.62383613LILRB2白細(xì)胞免疫球蛋白樣受體Leukocyteimmunoglobulin-likerecep-tor-3.3625354MBP髓鞘堿性蛋白Myelinbasicprotein3.80891614DOK3對(duì)接蛋白3Dockingprotein3-3.434165MBNL1肌肉盲樣剪接調(diào)節(jié)子1Muscleblind-likesplicingregulator13.67089415C16orf9516號(hào)染色體開放閱讀框95Chromosome16openreadingframe95-3.512886NFIA核因子I/ANuclearfactorI/A3.63351316JUNjun原癌基因junproto-oncogene-3.6319147CASK鈣調(diào)蛋白依賴性絲氨酸蛋白激酶Calmodulin-dependentserineproteinkinase3.59118917CHST2碳水化合物磺基轉(zhuǎn)移酶2Carbohydratesulfotransferase2-3.6811368GPM6B糖蛋白M6BGlycoproteinM6B3.56876518IGLJ2免疫球蛋白λ連接蛋白2Immunoglobulinlambdanexin2-4.0690989ITCHE3泛素蛋白連接酶E3ubiquitinproteinligase3.55122319CSTA半胱氨酸蛋白酶抑制劑ACystatinA-4.40528310GPR180G蛋白偶聯(lián)受體180Gprotein-coupledreceptor1803.45628320SERPINA1絲氨酸蛋白酶肽酶抑制劑Serpinpeptidaseinhibitor-6.328233

圖3差異表達(dá)基因的基因本體功能富集分析

Fig3Gene oncology function enrichment analysis of the biological functions of differentially expressed genes

基因-通路交互作用網(wǎng)絡(luò)基因-通路交互作用分析顯示，在ITP發(fā)生過程中可能被激活的通路包括TNF信號(hào)通路、直腸癌信號(hào)通路、可卡因成癮通路，其中TNF信號(hào)通路的激活受到JNU、ITCH等基因的作用(圖6)。

JUN和ITCH基因在T細(xì)胞中的表達(dá)水平對(duì)急性與慢性ITP患者T細(xì)胞關(guān)鍵基因表達(dá)水平行兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，與急性患者相比，慢性患者JUN基因表達(dá)明顯下降(t=2.394，P=0.0356)，ITCH表達(dá)明顯上升(t=2.519，P=0.0328)(圖7)。

JUN和ITCH基因?qū)β訧TP的預(yù)測(cè)能力采用ROC曲線評(píng)價(jià)JUN和ITCH診斷和預(yù)測(cè)慢性ITP的效果，結(jié)果顯示JUN基因?qū)β訧TP具有一定預(yù)測(cè)能力，(AUC=0.8333，P=0.0455；靈敏度=83.33%，特異度=100%)。ITCH基因預(yù)測(cè)慢性ITP的效果略佳(AUC=0.8667，P=0.0446；靈敏度=100%，特異度=83.33%)(圖8)。

圖4差異表達(dá)基因功能聚類分析

Fig4Clustering analysis of the biological functions of differentially expressed genes

圖5差異表達(dá)基因的蛋白互作網(wǎng)絡(luò)

Fig5Network of protein-protein interactions of differentially expressed genes

圖6差異表達(dá)基因的基因-通路互作用網(wǎng)絡(luò)

Fig6Network of gene-signaling pathway interactions of differentially expressed genes

圖7JUN(A)和ITCH(B)基因在急性與慢性ITP患者T細(xì)胞中的表達(dá)水平

Fig7Expression of JUN (A) and ITCH (B) in T cell of acute/chronic ITP

AUC：曲線下面積

AUC：area under curve

圖8JUN(A)和ITCH(B)基因診斷慢性ITP的受試者工作特征曲線

Fig8Receiver operating characteristic curves of JUN (A) and ITCH (B) for prediction of chronic ITP

討 論

近年來，兒童ITP的發(fā)病率居高不下，由于發(fā)病機(jī)制不明，迄今尚無有效治療方法。與急性ITP兒童相比，慢性ITP患兒出血癥狀不重，血小板減少程度較輕，但是其預(yù)后往往不如急性ITP[11]。李曉紅和盛光耀[12]通過研究發(fā)現(xiàn)，無論是急性ITP還是慢性ITP患者，隨著疾病治療好轉(zhuǎn)，血清中白細(xì)胞介素- 6、白細(xì)胞介素8、腫瘤壞死因子α等的水平明顯降低，且慢性患者的降低幅度大于急性患者，提示這些血清細(xì)胞因子水平可以反映ITP患者的嚴(yán)重程度與疾病轉(zhuǎn)歸。慢性ITP病程長，嚴(yán)重影響患兒生活質(zhì)量并造成嚴(yán)重的家庭負(fù)擔(dān)，本研究旨在從分子水平探索急慢性ITP之間的差異基因通路，為本病的診斷和治療提供依據(jù)。

本研究采用生物信息學(xué)分析技術(shù)對(duì)13例患者T細(xì)胞RNA樣本的基因芯片檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行進(jìn)一步細(xì)致挖掘和分析，以期找到可以預(yù)測(cè)慢性ITP的分子標(biāo)志物。首先，本研究對(duì)比了急性ITP和慢性ITP患者T細(xì)胞基因表達(dá)譜，結(jié)果顯示兩組患者的基因表達(dá)譜明顯不同，在被檢測(cè)的54 675個(gè)基因中，有457個(gè)差異表達(dá)基因，表明患者機(jī)體T細(xì)胞基因表達(dá)譜的差別可能影響ITP的病情。究其原因，可能是T細(xì)胞基因表達(dá)譜發(fā)生改變后，進(jìn)而影響T細(xì)胞的正常免疫功能。目前國內(nèi)外學(xué)者對(duì)此已有初步探索。馮越[13]研究結(jié)果顯示，ITP患兒調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的數(shù)量顯著低于健康兒童，且慢性組顯著低于急性組，同時(shí)，由調(diào)節(jié)性T細(xì)胞分泌的白細(xì)胞介素- 10、轉(zhuǎn)化生長因子β1等抑制性細(xì)胞因子的濃度也表現(xiàn)為此趨勢(shì)。該研究提供兩點(diǎn)重要信息：(1)ITP的發(fā)生、發(fā)展與患者機(jī)體的免疫功能具有密切關(guān)系；(2)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的減少在兒童ITP的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。另一方面，本研究在上述研究的基礎(chǔ)上進(jìn)行了拓展和延伸，提示T細(xì)胞正常免疫功能的發(fā)揮受到其基因表達(dá)譜的調(diào)節(jié)；對(duì)于ITP患者而言，上述調(diào)節(jié)發(fā)生改變后T細(xì)胞的免疫功能受到一定限制，進(jìn)而影響其預(yù)后。

本研究進(jìn)而對(duì)T細(xì)胞基因表達(dá)譜對(duì)ITP的調(diào)節(jié)作用機(jī)制進(jìn)行初步探索。差異基因互作用網(wǎng)絡(luò)分析提示，慢性ITP患者ITCH基因的表達(dá)水平升高，JUN基因表達(dá)水平降低。ITCH蛋白是一種E3泛素連接酶，能夠通過泛素化降解轉(zhuǎn)錄因子、蛋白酶、受體等多種類型的蛋白質(zhì)，從而參與體內(nèi)許多生物學(xué)過程，如調(diào)控細(xì)胞凋亡與分化、調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)等。ITCH在免疫調(diào)節(jié)方面的作用主要表現(xiàn)在控制T細(xì)胞分化和自身免疫反應(yīng)方面。研究表明ITCH缺失的小鼠表現(xiàn)出炎癥的自身免疫疾病，如肝臟、腎臟、肺等組織細(xì)胞及淋巴細(xì)胞的浸潤[14]，人類ITCH基因缺陷的表現(xiàn)亦是如此[15]。這與本研究顯示的TICH基因表達(dá)水平上調(diào)的研究結(jié)果不一致，日后課題組將通過獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)一步進(jìn)行驗(yàn)證。JUN是機(jī)體內(nèi)重要的功能蛋白，是絲裂原活化蛋白激酶信號(hào)通路、c-JUN氨基末端激酶信號(hào)通路等重要的分子，參與機(jī)體氧化應(yīng)激、凋亡、炎性反應(yīng)等多重功能。另外，有研究顯示JUN基因還可影響自身免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展。如：腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor，TNF)能夠在細(xì)胞表面吸引絲裂原活化蛋白激酶通路傳遞信號(hào)給JUN蛋白；同時(shí)另有研究顯示在ITP、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等自身免疫性疾病中腫瘤壞死因子升高[16- 17]。差異表達(dá)基因的基因-通路互作用網(wǎng)絡(luò)也可說明差異基因互作用網(wǎng)絡(luò)篩選出的兩個(gè)關(guān)鍵基因JUN和ITCH均可與腫瘤壞死因子信號(hào)通路發(fā)生交互作用。由此推斷JUN和ITCH基因可能通過激活腫瘤壞死因子信號(hào)通路促進(jìn)急性ITP向慢性ITP的轉(zhuǎn)變。基于上述研究結(jié)果，筆者推測(cè)在TNF信號(hào)通路的調(diào)節(jié)作用下，二者表達(dá)改變，進(jìn)而影響T細(xì)胞的免疫系統(tǒng)，導(dǎo)致如ITP等自身免疫性疾病的發(fā)生；結(jié)合后續(xù)的分析結(jié)果，筆者認(rèn)為若JUN基因表達(dá)下降或ITCH表達(dá)上升，則提示急性ITP患者轉(zhuǎn)為慢性ITP的可能性較大，需密切觀察，并堅(jiān)持規(guī)范治療。

綜上，急慢性ITP患兒機(jī)體T細(xì)胞的基因表達(dá)譜有明顯不同，表明T細(xì)胞的基因轉(zhuǎn)錄譜可能影響ITP的發(fā)生和發(fā)展；JUN和ITCH基因?qū)TP患兒病情進(jìn)展均有一定預(yù)測(cè)能力，并可能受到TNF信號(hào)通路的調(diào)節(jié)而發(fā)揮生物學(xué)作用；二者均對(duì)ITP病情具有一定預(yù)測(cè)能力；在今后研究中，課題組擬開展獨(dú)立的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)對(duì)上述研究結(jié)果進(jìn)行進(jìn)一步證實(shí)。

[1] 秦平，侯明. 2012版成人原發(fā)免疫性血小板減少癥診治的中國專家共識(shí)解讀[J]. 臨床血液學(xué)雜志，2013，26(3)：151- 155. DOI：10.13201/j.issn.1004-2806. 2013. 02. 006.

[2] 張紅，劉慶華，田芳. 急慢性特發(fā)性血小板減少性紫癜患者外周血淋巴細(xì)胞亞群的表達(dá)[J]. 中國實(shí)用醫(yī)藥，2014，9(27)：25-26. DOI：10.14163/j.cnki.11- 5547/r. 2014.27.238.

[3] 周偉，申昆玲. 兒科學(xué)最新診斷與治療[M].20版.北京：人民軍醫(yī)出版社，2014：803- 805.

[4] 黃淑蓉. 兒童慢性特發(fā)性血小板減少性紫癜研究進(jìn)展[J]. 實(shí)用醫(yī)院臨床雜志，2009，6(4)：148- 150. DOI：10.3969/j.issn.1672- 6170.

[5] Stasi R，Evangelista ML，Stipa E，et al. Idiopathic thrombocytopenic purpura：current concepts in pathophysiology and management[J]. Thromb Haemost，2008，99(1)：4- 13. DOI：10.1160/TH07- 08-0513.

[6] McMillan R. The pathogenesis of chronic immune thrombocytopenic purpura [J]. Semin Hematol，2007，44 (4Suppl 5)：S3- S11. DOI：10.1053/j.senubgenatol. 2007. 11.002.

[7] Lazarus AH，Semple JW，Cines DB. Innate and adaptive immunity in immune thrombocytopenia[J]. Semin Hematol，2013，50 (Suppl 1)：S68- S70.DOI：10.1053/j.seminhematol.2013.03.012.

[8] 鐘雋，陳少華，郁志，等. ITP中T細(xì)胞活化信號(hào)分子c-Cbl和Cbl-b的表達(dá)變化[J].暨南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)與醫(yī)學(xué)版)，2016，37(6)：472- 475. DOI：10.11778/j.jdxb.2016.06.005.

[9] 邸鑫. ITP患者外周血T細(xì)胞FADD 表達(dá)對(duì)T細(xì)胞凋亡通路的調(diào)控作用[D]. 吉林長春：吉林大學(xué)，2015：1- 41.

[10] Huang ZX，Tian HY，HU ZF，et al. Genclip：a software program for clustering gene lists by literature profiling and constructing gene co-occurrence networks related to custom keywords[J]. BMC Bioinformatics，2008，13(19)：308. DOI：10.1186/1471- 2105- 9- 308.

[11] 左尚明. 48例大劑量地塞米松沖擊治療兒童慢性特發(fā)性血小板減少性紫癜的臨床療效觀察[J]. 中國婦幼衛(wèi)生雜志，2013，4(2)：51- 52.

[12] 李曉紅，盛光耀. 兒童特發(fā)性血小板減少性紫癜多項(xiàng)細(xì)胞因子測(cè)定價(jià)值研究[J]. 現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2011，38(15)：2964- 2967.

[13] 馮越. 急慢性ITP患兒調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子改變的研究[J].臨床軍醫(yī)雜志，2011，39(5)：955- 956. DOI：10.j.issn.1671- 3286.2011.05.51.

[14] Matesic LE，Copeland NG，Jenkins NA. Itchy mice：the identification of a new pathway for the development of autoimmunity[M].Springer-Verlag Berlin Heidelberg：Current Topics in Microbiology Immunology，2008：185- 200. DOI：10.1007/978- 3- 540- 75203- 5.

[15] Lohr NJ，Molleston JP，StraussKA，et al. Human ITCH E3 ubiquitin ligase deficiency causes syndromic multisystem autoimmunedisease[J]. Am J Hum Genet，2010，86(3)：447- 453. DOI：10.1016/j.ajhg.2010.01.028.

[16] Stohl W，Metyas S，Tan SM，et al. B lymphoeyte stimulator overexpression in patients with systemic lupus erythematosus：longitudinal observations[J]. Anhritis Rheum，2003，48(12)：3475- 3486. DOI：10.1002/art.11354.

[17] 朱效娟. B細(xì)胞活化因子在ITP中的機(jī)制研究[D]. 山東濟(jì)南：山東大學(xué)，2010：1- 151.