預(yù)存式自體輸血聯(lián)合同種異體自然殺傷細(xì)胞輸注對胃癌手術(shù)后患者免疫功能的影響

李建武， 李灼非，戴 芳Δ

1.北京大學(xué)深圳醫(yī)院 輸血科(深圳 518036)；2.北京大學(xué)深圳醫(yī)院 胃腸外科(深圳 518036)

輸血是手術(shù)患者重要的治療手段之一,同種異體輸血是臨床上最常用的方式，但異體輸血可能導(dǎo)致溶血、過敏和疾病傳播等不良反應(yīng)，臨床報道一直較為謹(jǐn)慎。隨著先進(jìn)醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展，自體輸血已經(jīng)發(fā)展成為一項(xiàng)重要的血液保護(hù)措施，其能避免輸錯血型導(dǎo)致的溶血和異體輸血引起的疾病傳播等，具有異體輸血無法比擬的優(yōu)點(diǎn)[1]。自然殺傷細(xì)胞(natural killer cell，NK)是淋巴細(xì)胞譜系中的一類大顆粒淋巴細(xì)胞,其不同于T、B淋巴細(xì)胞，無需抗原預(yù)先致敏即可發(fā)揮殺傷作用，是天然免疫系統(tǒng)的主要效應(yīng)細(xì)胞，其能通過早期分泌多種細(xì)胞因子和趨化因子來調(diào)節(jié)獲得性免疫，是機(jī)體抵御感染的第一道防線，也是連接天然免疫與獲得性免疫的橋梁[2]。本研究以圍手術(shù)期胃癌患者為研究對象，觀察異體NK細(xì)胞與預(yù)存式自體輸血NK細(xì)胞殺傷功能的不同，探討對患者細(xì)胞免疫功能的影響，分析兩種方法的聯(lián)合治療對腫瘤患者免疫功能的調(diào)控活性，為腫瘤患者術(shù)后采用該治療方法提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2013年4月至2015年4月于北京大學(xué)深圳醫(yī)院進(jìn)行治療的胃癌患者為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)： 1)符合西醫(yī)診斷[3]；2)無內(nèi)分泌及免疫性疾病，Hb>120 g/L，Hct> 0.35，無放療、化療和激素治療史。排除標(biāo)準(zhǔn)： 1)失血量>600 mL；2)手術(shù)時間>4 h；3)應(yīng)用血管活性藥物后持續(xù)時間>10 min，術(shù)中血壓超過基礎(chǔ)值40%。共納入符合標(biāo)準(zhǔn)的患者120例，其中男72例，女48例；年齡18～50歲，體質(zhì)量46～85 kg。按照隨機(jī)數(shù)字表法將120例患者分為對照組和觀察組，各60例。對照組采用異體輸血，觀察組采用預(yù)存式自體輸血聯(lián)合同種異體NK細(xì)胞輸注。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，患者在術(shù)前均簽署知情同意書，

1.2 方法

觀察組：經(jīng)患者同意并簽訂自體輸血同意書后，于手術(shù)前1周內(nèi)釆血400 mL，釆集后在血袋上標(biāo)記清楚并置血庫專用冰箱內(nèi)保存，在手術(shù)中止血完畢后用以回輸；同種異體NK細(xì)胞，委托深圳市北科生物公司(ISO9001質(zhì)量管理體系認(rèn)證；AABB認(rèn)證)提取、純化、培養(yǎng)、檢測后100 mL(106/mL細(xì)胞)輸注。對照組：采集親屬(子女、兄弟、姐妹)外周血，手術(shù)中止血完畢后回輸；手術(shù)前配濾白懸浮紅細(xì)胞400 mL，手術(shù)完畢后輸入。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 體液免疫 檢測治療前后血清免疫球蛋白IgG、IgA、IgM水平采用速率散射比濁法，使用邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司生產(chǎn)的BS-120全自動生化分析儀測定；補(bǔ)體C3、C4水平采用單向免疫擴(kuò)散法測定，使用北京生物制品研究所生產(chǎn)的標(biāo)準(zhǔn)血清和上海翊圣生物科技有限公司生產(chǎn)的(貨號：10208ES60)瓊脂糖凝膠。

1.3.2 T細(xì)胞亞群(CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+) 治療前后采用貝克曼庫爾特商貿(mào)(中國)有限公司CytoFLEX流式細(xì)胞儀法檢測T細(xì)胞亞群，各檢測1次。

1.3.3 酶聯(lián)免疫吸附劑試劑盒測定 酶聯(lián)免疫吸附劑試劑盒由深圳欣博生物科技有限公司提供，檢測治療前后血清白細(xì)胞介素-10(interleukin-10，IL-10)、白細(xì)胞介素-2(interleukin-2，IL-2)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 兩組治療前IgG、IgA、IgM、C3及C4檢測情況比較

治療后觀察組和對照組IgG、IgA、IgM、C3及C4異常例數(shù)較治療前都有減少趨勢，觀察組比對照組減少趨勢更明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；治療后兩組血清C3和C4水平升高，IgG、IgA、IgM水平下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表1～2)。

表1 兩組治療前后IgG、IgA、IgM、C3及C4檢測情況比較(例，n=60)

注：與治療前比較，*P<0. 05；與對照組比較，#P<0.05

表2 兩組治療前后IgG、IgA、IgM、C3及C4水平比較

注：與治療前比較，*P<0.05；與對照組比較，#P<0.05

2.2 兩組治療前后CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+檢測情況比較

觀察組治療后CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+細(xì)胞異常例數(shù)均較治療前明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；對照組治療后CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+細(xì)胞異常例數(shù)較治療前明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表3)。治療后兩組CD8+細(xì)胞水平均下降，CD3+、CD4+及CD4+/CD8+細(xì)胞水平均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表4)。

表3 兩組治療前后CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+檢測情況比較(例，n=60)

注：與治療前比較，*P<0.05；與對照組比較，#P<0.05

表4 兩組治療前后CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+水平比較

注：與治療前比較，*P<0. 05；與對照組比較，#P<0. 05

2.3 兩組治療前后血清IL-2、IL-10及TNF-α水平比較

兩組治療后血清TNF-α下降，IL-2、IL-10水平升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；觀察組治療后TNF-α水平低于對照組，IL-2、IL-10水平高于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表5)。

組別時間IL-2/(μg/L)IL-10/(pg/mL)TNF-α/(μg/L)對照組治療前3.37±0.6432.52±7.782.24±0.38治療后4.23±0.72*64.49±9.81*1.58±0.26*觀察組治療前3.32±0.6733.57±7.862.21±0.40治療后4.85±0.75*#75.51±10.29*#1.20±0.27*#

注：與治療前比較，*P<0.05，與對照組比較，#P<0.05

3 討論

隨著社會進(jìn)入老齡化階段及血液需求量日益增加，自體輸血已成為一項(xiàng)重要的血液保護(hù)措施，預(yù)存式自體輸血是在術(shù)前幾天或幾周前釆集自身的全血或者有效的血液，將成分保存到適當(dāng)?shù)沫h(huán)境下，當(dāng)患者需要輸血時再將保存的自體血進(jìn)行回輸以發(fā)揮治療作用[4-5]。

NK細(xì)胞無需抗原預(yù)先致敏，是天然免疫系統(tǒng)的主要效應(yīng)細(xì)胞，可發(fā)揮殺傷作用，是機(jī)體抵御感染的第一道防線，在機(jī)體免疫調(diào)節(jié)、造血調(diào)控、抗腫瘤和抗感染等方面發(fā)揮著重要作用，其又能分泌多種細(xì)胞因子和趨化因子來調(diào)節(jié)獲得性免疫[6-7]。機(jī)體抗腫瘤免疫中細(xì)胞免疫是關(guān)鍵，細(xì)胞的數(shù)量及質(zhì)量是宿主對腫瘤細(xì)胞免疫監(jiān)控異常重要的指標(biāo)[8]。本研究在前期研究基礎(chǔ)上，觀察預(yù)存式自體輸血和增強(qiáng)其對同種異體NK細(xì)胞殺傷“自亡和它殺”相結(jié)合的方法。通過對患者治療前后細(xì)胞免疫功能檢測發(fā)現(xiàn)，兩種方法聯(lián)合治療對腫瘤免疫功能具有調(diào)控活性，為腫瘤患者術(shù)后采用該方法治療提供了理論依據(jù)，對腫瘤患者術(shù)后免疫調(diào)控具有重要意義。

免疫細(xì)胞的數(shù)量及質(zhì)量是宿主對腫瘤細(xì)胞免疫監(jiān)控異常重要的指標(biāo)，在機(jī)體抗腫瘤免疫中細(xì)胞免疫是關(guān)鍵，手術(shù)抑制了機(jī)體免疫功能，腫瘤患者免疫狀態(tài)低下，加之可能導(dǎo)致術(shù)后感染和腫瘤擴(kuò)散，易造成多器官功能衰竭[9-11]。在免疫調(diào)節(jié)方面本研究結(jié)果顯示，兩組血清C3和C4水平升高，IgG、IgA、IgM水平下降；觀察組IgG、IgA、IgM、C3及C4異常例數(shù)少于對照組；觀察組C3和C4高于對照組，IgG水平低于對照組；觀察組CD8+低于對照組，CD3+，CD4+及CD4+/CD8+水平高于對照組；兩組TNF-α下降，觀察組低于對照組；觀察組CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+異常例數(shù)均少于對照組；治療后兩組血清IL-2、IL-10水平升高，觀察組高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

血液中血紅細(xì)胞的ATP及2.3-DPG含量均高于庫血，有較好的攜氧功能，自體輸血已經(jīng)發(fā)展成為一項(xiàng)重要的血液保護(hù)措施，其能避免異體輸血引起的艾滋病、肝炎的傳播；輸錯血型導(dǎo)致的溶血危險[12-14]；避免操作過程中配型及疾病檢驗(yàn)出現(xiàn)的失誤，同時可避免異體輸血所致高鉀、低鉀血癥及代謝性酸中毒[15-16]。NK細(xì)胞是天然免疫系統(tǒng)的主要效應(yīng)細(xì)胞，即可發(fā)揮殺傷作用，無需抗原預(yù)先致敏，能通過早期分泌多種細(xì)胞因子和趨化因子來調(diào)節(jié)獲得性免疫，是機(jī)體抵御感染的第一道防線，同時也是連接天然免疫與獲得性免疫的橋梁，在機(jī)體造血調(diào)控、免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤和抗感染等方面發(fā)揮著重要作用。在自體輸血的同時聯(lián)合輸注NK細(xì)胞可增強(qiáng)患者的免疫力，利于疾病的康復(fù)，抵抗術(shù)中、術(shù)后可能出現(xiàn)的感染風(fēng)險[17]。

綜上所述，預(yù)存式自體輸血聯(lián)合同種異體NK細(xì)胞輸注能調(diào)節(jié)腫瘤手術(shù)患者體液免疫，還能調(diào)節(jié)炎性細(xì)胞因子水平，促進(jìn)其平衡，調(diào)節(jié)T細(xì)胞亞群，有利于疾病的康復(fù)。

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