食品中五種人工合成著色劑的高效液相色譜法分析簡析

高明陽

北京市工商行政管理局西城分局

1. 前言

食品中常見的五種人工合成著色劑檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、亮藍(lán)的應(yīng)用可增加食物外觀色澤，激發(fā)食欲。但若過量添加食用色素，會對人體產(chǎn)生危害。[1,2]本文的實驗采用GB5009.35-2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中合成著色劑的測定》[3]，選取果汁飲料類、配置酒類、硬質(zhì)糖果、巧克力豆等四種不同基質(zhì)，對食品中的五種人工合成著色劑檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、亮藍(lán)進(jìn)行了測定。

2. 實驗條件

2.1 主要試劑及標(biāo)準(zhǔn)品

2.1.1 試劑

甲醇（色譜純）、正己烷、鹽酸、冰醋酸、甲酸（88%）、乙酸銨、檸檬酸、無水硫酸鈉、正丁醇、三正辛胺（90%）、無水乙醇、氨水、聚酰胺粉（尼龍6）。除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682規(guī)定的一級水。

2.2 試劑溶液及標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

2.2.1 試劑溶液

2.2.1.1 乙酸銨（0.02mol/L）：稱取1.54g乙酸銨，加水至1000mL，溶解，經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾。

2.2.2.2 氨水溶液：量取氨水2mL，加水至100mL，混勻。

2.2.2.3 甲醇-甲酸溶液（6+4，體積比）:量取甲醇60mL，甲酸40mL，混勻。

2.2.2.4 檸檬酸溶液：稱取20g檸檬酸，加水至100mL，溶解混勻。

2.2.2.5 無水乙醇-氨水-水溶液（7+2+1，體積比）:量取無水乙醇70mL、氨水溶液（2.2.2）20mL、水10mL，混勻。

2.2.2.6 三正辛胺-正丁醇溶液（5%）：量取三正辛胺5mL，加正丁醇至100mL，混勻。

2.2.2.7 飽和硫酸鈉溶液。

2.2.2.8 pH 6的水：水加檸檬酸溶液調(diào)pH至6。

2.2.2.9 pH 4的水：水加檸檬酸溶液調(diào)pH至4。

2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置

2.2.2.1 取10mL容量瓶一個，準(zhǔn)確移入濃度為1.0mg/mL的檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、亮藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)溶液各1.0mL，以及5.0mL水，搖均，即配制成100.0μg/mL的混標(biāo)工作液。

2.2.2.2 在7個液相小瓶中分別準(zhǔn)確移入1000.0、990.0、980.0、950.0、920.0、900.0、800.0μL的水，再分別準(zhǔn)確移取上述100.0μg/mL的混標(biāo)工作液0.0、10.0、20.0、50.0、80.0、100.0、200.0μL至其中，蓋蓋搖勻，配制成最終濃度為0.0、0.5、1.0、2.0、5.0、8.0、10.0、20.0的七種混標(biāo)使用液；

2.2.2.3 另取1個液相小瓶準(zhǔn)確移入900.0μL的水，再準(zhǔn)確移取上述5.0μg/mL的混標(biāo)溶液100.0μL至其中，蓋蓋搖勻，配制成最終濃度為0.5μg/mL的混標(biāo)使用液。

2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)品

2.2.2.1 食用合成色素檸檬黃溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（濃度1.0mg/mL）；

2.2.2.2 食用合成色素莧菜紅溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（濃度1.0mg/mL）；

2.2.2.3 食用合成色素胭脂紅溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（濃度1.0mg/mL）；

2.2.2.4 食用合成色素日落黃溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（濃度1.0mg/mL）；

2.2.2.5 食用合成色素亮藍(lán)溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（濃度1.0mg/mL）。

2.3 主要儀器

高效液相色譜儀（Agilent Technologies 1260 Infinity），恒溫水浴鍋，G3垂融漏斗，天平。

2.4 檢測條件

2.4.1 液相色譜儀器參數(shù)

色譜柱：Agilent Eclipse XDB-C18 ，5μm，4.6×250mm。進(jìn)樣量：10μL ；柱溫：35℃；流速：1.0mL/min；檢測波長：254nm；

流動相梯度：C泵：甲醇 D泵：0.02mol/L乙酸銨溶液

2.4.2 液相色譜測定

將樣品提取液和合成著色劑標(biāo)準(zhǔn)使用液分別注入高效液相色譜儀，根據(jù)保留時間定性，外標(biāo)峰面積法定量。

2.5樣品處理

2.5.1 試樣制備

2.5.1.1 果汁飲料及果汁、果味碳酸飲料等（蘋果汁）：稱取5g（精確至0.0001g），放入100mL燒杯中，含二氧化碳試樣加熱或超聲除二氧化碳， 為試樣溶液。

2.5.1.2 配制酒類（白葡萄酒）：稱取5g（精確至0.0001g），放入100mL燒杯中，加小碎瓷片數(shù)片，加熱驅(qū)除乙醇，為試樣溶液。

2.5.1.3 硬糖、蜜餞類、淀粉軟糖等（硬質(zhì)糖果）：稱取5g（精確至0.0001g）粉碎樣品，放入100mL燒杯中，加水30mL，溫?zé)崛芙猓?為試樣溶液。

2.5.1.4 巧克力豆及著色糖衣制品（巧克力豆）：稱取5g（精確至0.0001g），放入100mL燒杯中，用水反復(fù)洗滌色素，到試樣無色素為止，合并色素漂洗液，為試樣溶液。

2.5.2 前處理

聚酰胺吸附法：試樣溶液加檸檬酸溶液調(diào)pH值到6，加熱至60℃，將1g聚酰胺粉加少許水調(diào)成粥狀，倒入試樣溶液中，攪拌片刻，以G3垂融漏斗抽濾，用60℃pH為4的水洗滌3～5次，然后用甲醇-甲酸混合溶液洗滌3～5次，再用水洗至中性，用乙醇-氨水-水混合溶液解吸3～5次，每次5mL，收集解吸液，加乙酸中和，蒸發(fā)至近干，加水溶解，定容至5.0mL。經(jīng)0.45μm濾膜過濾，取10uL進(jìn)高效液相色譜儀分析。

3. 加標(biāo)回收及精密度實驗

采用蘋果汁、白葡萄酒、硬質(zhì)糖果、巧克力豆作為加標(biāo)基質(zhì)，在0.5、5、20ppm三個點進(jìn)行三水平加標(biāo)，每個點做6個平行，每個點的6個平行數(shù)據(jù)計算RSD值，選用其中3個平行數(shù)據(jù)用于計算加標(biāo)回收率。

由上可知，樣品中檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、亮藍(lán)的平均回收率為100.9%、99.8%、100.5%、100.8%、100.0%，RSD≤15%，均符合GB/T 27074-2008的要求。

4、檢出限、定量限

按照《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中合成著色劑的測定》（GB 5009.35-2016）“…… 8 其他”的規(guī)定，檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃的方法檢出限為0.5mg/kg，檢測波長254nm時亮藍(lán)的檢出限為1.0mg/kg。

選用蘋果汁、白葡萄酒、硬質(zhì)糖果和巧克力豆4種樣品基質(zhì)按檢出限濃度進(jìn)行加標(biāo)，經(jīng)相同方法前處理后上機檢測。平行測定6次加標(biāo)樣品。按以下公式計算可得檢出限的質(zhì)量濃度：

MDL：方法檢出限（mg/kg）

LOQ：方法定量限（mg/kg）

SL：基質(zhì)噪音峰面積的標(biāo)準(zhǔn)偏差（平行6次）。

b：方法校準(zhǔn)曲線的斜率，參見不同組分標(biāo)準(zhǔn)曲線。

V：稀釋倍數(shù)（0.005L）。

m：稱樣量（5g）。 1000：由g/kg轉(zhuǎn)換為mg/kg的換算因子。

測得檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃檢出限均小于0.5mg/kg，檢測波長254nm時亮藍(lán)的檢出限小于1.0mg/kg，符合標(biāo)準(zhǔn)要求。

5. 結(jié)論

在五種人工合成著色劑檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、亮藍(lán)的檢測上，采用高效液相色譜法，通過外標(biāo)法定量，加標(biāo)回收及精密度實驗都取得了較好的效果，方法可靠、準(zhǔn)確、靈敏度高。

[1]谷巖,曲明.高效液相色譜法測定飲料中的食用色素[J],化學(xué)分析計量,2004,13(1),42～43.

[2]陳再潔,楊慧.HPLC同時測定飲料中的6種食用色素[M], 2011年第四屆國際食品安全高峰論壇論文集,60～61.

[3]GB5009.35-2016,《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中合成著色劑的測定》[S].