SAT-TB檢測支氣管肺泡灌洗液對涂陰肺結(jié)核的快速臨床診斷價值

許蘊怡 蔡杏珊 譚耀駒 劉燕文 周輝林 曾少芳 馬品云 劉 欣

WHO估算中國2014年的新發(fā)肺結(jié)核人數(shù)約93萬，我國位居全球第三名僅次于印度和印度尼西亞。傳統(tǒng)方法中結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)及痰涂片是確診肺結(jié)核的重要手段，雖然痰涂片所需時間較培養(yǎng)法快，但陽性率總體并不高,Bactec MGIT 960平均陽性報告時間14.1 d，快速培養(yǎng)法報告陰性需時42 d，因此，傳統(tǒng)方法由于陽性率低且耗時較長，已經(jīng)無法滿足臨床上對肺結(jié)核患者快速診斷的需求。

近幾年，結(jié)核分枝桿菌的分子生物學(xué)快速診斷方法已漸趨成熟，主要是以核酸作為檢測靶標(biāo)的分子生物學(xué)技術(shù)、基因芯片法等[1-3]。其中，結(jié)核分枝桿菌RNA恒溫擴增實時檢測技術(shù)(SAT-TB)是以結(jié)核分枝桿菌活菌中特異性16s rRNA為擴增靶標(biāo)，準(zhǔn)確快速地判斷待檢樣本中結(jié)核分枝桿菌存在與否。本研究將涂陰疑似肺結(jié)核患者收集支氣管肺泡灌洗液(BALF)，進(jìn)行SAT-TB的檢測，評價SAT-TB通過檢測BALF對涂陰肺結(jié)核的快速診斷價值。

1 材料與方法

1.1 研究對象

2016年9月1日—2016年11月4日期間，共有80例廣州市胸科醫(yī)院涂陰疑似肺結(jié)核患者進(jìn)入最后分析。研究對象首先必須滿足以下條件：①發(fā)現(xiàn)肺部異常陰影，臨床診斷為疑似肺結(jié)核患者；②痰涂片行熒光染色法結(jié)果連續(xù)3次陰性者(3次熒光染色時間間隔范圍不超過1周)。入院后肺結(jié)核疑似患者行痰涂片熒光染色結(jié)果為陽性者排除此項研究。

1.2 試劑和儀器

試劑:結(jié)核分枝桿菌(TB)核酸檢測試劑盒(仁度生物科技公司)；熒光涂片法染色液及快速液體法培養(yǎng)前處理液均由我院檢驗科自配。儀器：應(yīng)用公司ABI7300熒光定量擴增儀；BACTEC MGIT960儀器。

1.3 方法

1.3.1 BD960快速培養(yǎng)法 采用Bactec MGIT 960快速培養(yǎng)法，按照此實驗的說明書標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)格進(jìn)行實驗。

1.3.2 SAT-TB檢測 取液化好的痰標(biāo)本1 mL于EP管中，以13 000 r/min 離心 5 min,后棄上清，再加入1 mL PBS緩沖液重懸離心，棄上清。將痰液標(biāo)本加入50 μL裂解液重懸，該樣品即為待測樣本，用超聲破碎儀破碎15 min，功率300 W。后將2 μL處理物加入含30 μL擴增檢測液的潔凈微量反應(yīng)管或者反應(yīng)板中，置恒溫?zé)晒鈾z測儀上進(jìn)行檢測。

1.3.3 熒光涂片染色鏡檢法 用竹簽挑取標(biāo)本的膿樣、血樣或干酪樣部分0.05～0.1 mL于玻片正面的右側(cè)2/3中央處，并均勻涂抹成1.0 cm×2.0 cm橢圓形痰膜，薄厚適中，室溫下自然干燥。將痰涂片進(jìn)行染色和鏡檢。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

直接涂片檢查、Bactec MGIT 960培養(yǎng)、SAT-TB法，所有研究對象行支纖鏡刷檢涂片熒光染色及支氣管肺泡灌洗液，收集BALF5-10ML檢測，并記錄數(shù)據(jù)。

根據(jù)SPSS 18.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析，各以培養(yǎng)法和臨床診斷為標(biāo)準(zhǔn)作為參考標(biāo)準(zhǔn)，計算診斷的敏感度、特異度、陽性預(yù)測值(PPV)、陰性預(yù)測值(NPV)。

2 結(jié)果

2.1 以臨床診斷為標(biāo)準(zhǔn)，SAT-TB法檢測BALF對涂陰肺結(jié)核的價值

若以臨床診斷作為判斷肺結(jié)核的陽性標(biāo)準(zhǔn)，臨床診斷肺結(jié)核包括培陽及涂陰肺結(jié)核，非肺結(jié)核或疑似肺結(jié)核為陰性標(biāo)準(zhǔn)，以臨床診斷作為參考標(biāo)準(zhǔn)，SAT-TB診斷涂陰肺結(jié)核的敏感度31.7%(20/63)、特異度88.2%(15/17)、陽性預(yù)測值91.0%(20/22)、陰性預(yù)測值25.9%(15/58)。見表1。

表1 以臨床診斷為標(biāo)準(zhǔn)，SAT-TB法檢測BALF對涂陰肺結(jié)核的診斷結(jié)果 (n)

2.2 以培養(yǎng)法為標(biāo)準(zhǔn)，SAT-TB檢測BALF診斷涂陰肺結(jié)核的價值

以培養(yǎng)法(BD960)作為參考標(biāo)準(zhǔn)，SAT-TB診斷涂陰肺結(jié)核的敏感度為53.3%(8/15),特異度為88.2%(15/17)，陽性預(yù)測值80.0%(8/10)，陰性預(yù)測值68.1%(15/22)。見表2。

表2 SAT-TB法檢測BALF對涂陰肺結(jié)核的診斷結(jié)果 (n)

3 討論

SAT-TB檢測的靶標(biāo)為結(jié)核分枝桿菌的16s rRNA，此檢測技術(shù)特點：活菌檢測、準(zhǔn)確、快速、簡便。最大的優(yōu)點在于檢測RNA反映標(biāo)本活菌的存在與否。SAT-TB的操作時間及檢測時間大大減少，與痰涂片熒光染色相比較，操作時間從1 d縮短到1.5～2 h。

將該技術(shù)與目前最新使用的其他分子生物學(xué)診斷方法進(jìn)行比較，近期發(fā)表的研究報道Xpert Mtb/RIF診斷涂陰肺結(jié)核的敏感61%～81%不等[4-5]，Le Palud等[6]同樣用BALF的Xpert Mtb/RIF診斷涂陰肺結(jié)核的敏感度為80%，特異度為98.6%;其他方法如Kim等[5]研究巢式PCR法診斷結(jié)核病的敏感度僅為69.4%，同一研究中的巢式PCR法和家庭式普通PCR法[7]的診斷敏感度僅分別為79.2%和59.7%,特異度為100%，而本實驗若以培陽作為計算肺結(jié)核的金標(biāo)準(zhǔn)，非肺結(jié)核為陰性標(biāo)準(zhǔn)，SAT-TB診斷涂陰肺結(jié)核的敏感度為53.3%,特異度為88.2%。因此，與其他最新使用的分子生物學(xué)診斷技術(shù)相比，本研究用SAT-TB檢測BALF診斷涂陰肺結(jié)核的敏感度與最新使用的其他分子生物學(xué)技術(shù)中的家庭式普通PCR法相似，只能說，SAT-TB法檢測BALF能提供有價值的診斷敏感度及特異度。但是，在已有研究結(jié)果中發(fā)現(xiàn)SAT-TB檢測BALF對結(jié)核分枝桿菌的檢出率較低(見表2),在SAT-TB法陰性培陽患者臨床數(shù)據(jù)中，SAT-TB對肺結(jié)核的檢出率略高于Bactec MGIT 960培養(yǎng)法，但臨床上仍有約30%以上的培陽患者通過SAT-TB法無法檢出。究其原因，發(fā)現(xiàn)如下因素可能影響該項研究SAT-TB的檢測效率：第一：標(biāo)本取出后放置的時間過久，在課題實施過程中將BALF取出、分裝等室溫下經(jīng)歷的時間長達(dá)4 h以上，留取涂片熒光染色的BALF也需要放置一段時間，與痰液相比，室溫放置的時間較之過長，可能導(dǎo)致SAT-TB對標(biāo)本中16s rRNA的檢出率降低；第二：臨床操作氣管鏡時對支氣管沖洗的部位BALF的量偏少，這些因素都可能導(dǎo)致對結(jié)核分枝桿菌的檢出率降低；第三：究其培陽而SAT-TB法陰性的比例中，且臨床診斷為肺結(jié)核者，筆者認(rèn)為，Bactec MGIT 960培養(yǎng)法有其自身的優(yōu)點，只要達(dá)到一定的菌量則會在培養(yǎng)基中正常生長。而SAT-TB操作技術(shù)雖然污染率低，速度快，但因為RNA降解快，如果患者的菌量不多，而SAT-TB操作時間控制不當(dāng)或者標(biāo)本前處理后，如放在超聲破碎儀中留置時間過長，也可能造成SAT-TB檢出率下降，出現(xiàn)假陰性可能性增加。此次實驗標(biāo)本量較少，若適當(dāng)擴大標(biāo)本量，預(yù)期會達(dá)到更加完善的實驗數(shù)據(jù)。

此外，此次實驗研究仍然發(fā)現(xiàn)了2例假陽性結(jié)果，因此分析在取BALF時容易通過內(nèi)鏡消毒不嚴(yán)、標(biāo)本運送等操作環(huán)節(jié)造成標(biāo)本污染[8]；在該項技術(shù)的今后臨床使用中，以上所提及的因素是值得關(guān)注的。否則，可能限制該技術(shù)在臨床上的廣泛應(yīng)用，降低其實際診斷價值。

綜上所述，從檢測時間上比較，SAT-TB的檢測速度明顯快于快速培養(yǎng)法；檢測結(jié)果與培養(yǎng)法的一致率達(dá)72.5%，也就是說SAT-TB能夠在最短的時間內(nèi)提供準(zhǔn)確率為72.5%的診斷結(jié)果；從表1、表2中可見： SAT-TB檢測結(jié)核分枝桿菌陽性例數(shù)比Bactec MGIT 960快速培養(yǎng)法的結(jié)核分枝桿菌多(20>15)。因此，SAT-TB的檢出率略高于培養(yǎng)法陽性檢出率(31.7%>23.8%)，敏感度高。有1例非結(jié)核分枝桿菌(龜-膿腫分支桿菌)肺病患者培養(yǎng)為陽性，但SAT-TB對標(biāo)本中含有非結(jié)核分枝桿菌者檢測結(jié)果為陰性，以上實驗數(shù)據(jù)中發(fā)現(xiàn)：SAT-TB法優(yōu)于涂片法和Bactec MGIT 960培養(yǎng)法。而SAT-TB法含有非結(jié)核分枝桿菌者檢測結(jié)果陽性有2例，考慮操作過程存在污染。也說明培養(yǎng)法和SAT-TB法各有各自的優(yōu)點，而SAT-TB法更有其快速、敏感度高的顯著特點。

因此，本實驗表明SAT-TB檢測BALF是一項對涂陰肺結(jié)核患者快速、有價值的診斷方法之一。

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曲妥珠單抗如何發(fā)揮Her2陽性乳腺癌的靶向治療作用?

曲妥珠單抗屬于靶向治療性藥物，乳腺癌細(xì)胞常常產(chǎn)生一種蛋白質(zhì)——表皮生長因子受體2(英文名叫 HER2或ERBB2)，在表皮生長因子受體2作用下，乳腺癌細(xì)胞不斷分裂，腫瘤便不斷生長。因此，科學(xué)家希望設(shè)計一種抗體來阻斷表皮生長因子受體2，于是誕生了曲妥珠單抗。曲妥珠單抗被注射到乳腺癌患者體內(nèi)后，抗體與乳腺癌細(xì)胞表面的表皮生長因子受體2結(jié)合，誘導(dǎo)抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用從而殺傷腫瘤細(xì)胞。另外曲妥珠單抗結(jié)合乳腺癌細(xì)胞表面的HER2受體后導(dǎo)致胞內(nèi)信號傳導(dǎo)通路的抑制，乳腺癌細(xì)胞便停止增殖，腫瘤也就停止生長。

作者：佚名 來源：腫瘤資訊