HISCL-5000高敏發(fā)光酶免疫分析儀性能評(píng)價(jià)及定量檢測(cè)感染性標(biāo)志物臨床應(yīng)用

王曉萌，辛穎，張樂，顏艷，胡靜儀，張飚

(天津市環(huán)湖醫(yī)院檢驗(yàn)科，天津市腦血管病和神經(jīng)變性重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300350)

按照醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可和醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室管理辦法的要求，臨床實(shí)驗(yàn)室所用的方法、儀器等應(yīng)保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確可靠，臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)所用的儀器和方法學(xué)進(jìn)行性能驗(yàn)證和評(píng)價(jià)，以保證所選用的方法、試劑、儀器達(dá)到臨床性能、分析性能和經(jīng)濟(jì)性能等各方面的要求[1，2]。因此對(duì)本院新購買的Sysmex HISCL-5000全自動(dòng)高敏發(fā)光免疫分析儀分別從攜帶污染率、批內(nèi)精密度、日間精密度、線性范圍、檢出限等方面進(jìn)行性能驗(yàn)證，并對(duì)臨床標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行了分析。

1 材料與方法

1.1儀器與試劑 全自動(dòng)高敏發(fā)光免疫分析儀HISCL-5000及原裝配套試劑、校準(zhǔn)品和質(zhì)控品，由日本Sysmex醫(yī)學(xué)電子（上海）有限公司提供。檢測(cè)項(xiàng)目：乙型肝炎表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎表面抗體（HBsAb）、乙型肝炎 e 抗原（HBeAg）、乙型肝 炎 e抗 體 （HBeAb）、 乙 型 肝 炎 核 心 抗 體（HBcAg）、丙型肝炎抗體（HCV-Ab）、梅毒螺旋體抗體（TP-Ab）。 HBsAg、HCV-Ab 和 TP-Ab 膠體金標(biāo)記試劑由上?？迫A公司提供。

1.2 驗(yàn)證方法

1.2.1 攜帶污染率驗(yàn)證 參照衛(wèi)生部 《臨床血液學(xué)檢驗(yàn)項(xiàng)目的分析質(zhì)量要求》行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，選取HB-sAg＞2000IU/ml的高濃度血液樣本和 HBsAg＜0.03IU/ml低濃度血液樣本，連續(xù)測(cè)定3次，測(cè)定值分別記為 H1、H2、H3 和 L1、L2、L3。 按公式：攜帶污染率=|(L1－L3)|/(H3-L3)計(jì)算攜帶污染率。

1.2.2 批內(nèi)精密度驗(yàn)證 參考美國CLSI EP15-A2指南文件[3]，分別選取各驗(yàn)證項(xiàng)目高濃度和低濃度的臨床血清樣本2份，重復(fù)檢測(cè)20次，計(jì)算20次檢測(cè)結(jié)果的算術(shù)平均值（MEAN）、標(biāo)準(zhǔn)差（SD）和變異系數(shù)(CV)。以精密度CV值小于或等于廠商給定的10%為判斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.2.3 日間精密度驗(yàn)證 參考美國CLSI EP15-A2指南文件，使用高低2個(gè)濃度水平的質(zhì)控品，每天至少檢測(cè)4次，連續(xù)檢測(cè)5d，計(jì)算Mean、SD和CV值。

1.2.4 線性驗(yàn)證 參考美國CLSI EP6-A指南文件[4]，進(jìn)行HBsAg和HBsAb線性試驗(yàn)，選取高值、中值、低值臨床樣本，將樣品按100%、80%、60%、40%、20%、0%的比例進(jìn)行稀釋，每個(gè)稀釋度重復(fù)測(cè)定2次，計(jì)算均值。結(jié)果進(jìn)行線性回歸分析，計(jì)算y=ax+b，計(jì)算相關(guān)系數(shù)r和決定系數(shù)R2。

1.2.5 檢出限驗(yàn)證 參考CLSI EP15-A2文件，用廠商配套校準(zhǔn)品和稀釋液，將濃度為0.25IU/ml的HBsAg和10mIU/ml的HBsAb的校準(zhǔn)品對(duì)倍稀釋成5個(gè)濃度系列，作為驗(yàn)證的樣本，每個(gè)濃度連續(xù)檢測(cè)20次，計(jì)算CV，CV<20%最低濃度為檢測(cè)限。

1.2.6 HISCL-5000分析儀檢測(cè)臨床樣本結(jié)果分析常規(guī)檢測(cè)2016年5月至2016年11月天津市環(huán)湖醫(yī)院。門診及住院患者臨床樣本11785例，其中HBsAg、HCV-Ab和TP-Ab陽性樣本，應(yīng)用膠體金方法進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)。

1.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 16.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或百分率表示，兩種方法檢測(cè)陽性率比較采用配對(duì)卡方檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 攜帶污染率驗(yàn)證結(jié)果 根據(jù)儀器廠家要求攜帶污染率<1.0%為合格，檢測(cè)結(jié)果見表1。

表1 HISCL-5000分析儀攜帶污染率驗(yàn)證結(jié)果

2.2 批內(nèi)精密度驗(yàn)證結(jié)果 各項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果見表2，所有項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果均符合儀器廠商規(guī)定批間CV≤10%的要求。

表2 HISCL-5000分析儀批內(nèi)精密度驗(yàn)證結(jié)果

2.3 日間精密度驗(yàn)證結(jié)果 日間精密度驗(yàn)證結(jié)果見表3，所有項(xiàng)目結(jié)果均符合儀器廠商規(guī)定日間精密度CV≤10%的要求。

表3 HISCL-5000分析儀日間精密度驗(yàn)證結(jié)果

2.4線性驗(yàn)證結(jié)果 選取的高值、中值、低值濃度分 別 為 2371.27IU/ml，146.16IU/ml，19.26IU/ml 三份HBsAg陽性標(biāo)本；和濃度為 718.75IU/ml，134.0IU/ml，36.25IU/ml三份HBsAb陽性標(biāo)本。按照100%、80%、60%、40%、20%、0%的比例稀釋后。每個(gè)濃度檢測(cè)兩次取平均值，進(jìn)行線性回歸分析，檢驗(yàn)HBsAg和HBsAb檢測(cè)系統(tǒng)的稀釋線性，要求a值范圍1±0.05，r≥0.95。兩個(gè)項(xiàng)目三個(gè)濃度稀釋后都呈現(xiàn)較好的線性相關(guān)性，其線性方程和相關(guān)系數(shù)見表4。

2.5 檢測(cè)限驗(yàn)證結(jié)果 HBsAg和HBsAb定值標(biāo)準(zhǔn)品用配套稀釋液稀釋為規(guī)定濃度，進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)，結(jié)果見表5。本次驗(yàn)證HBsAg和HBsAb檢測(cè)下限分別為0.0071IU/ml和0.306mIU/ml，低于廠家聲稱的 0.03IU/ml和 5mIU/ml。

2.6 HISCL-5000分析儀檢測(cè)臨床樣本感染性標(biāo)志物結(jié)果分析 HISCL-5000分析儀檢測(cè)11785例臨床 患 者 HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb、HCV-Ab、TP-Ab等指標(biāo)，其中HbsAg陽性331例，陽性率2.81%（331/11785），結(jié)果在 0.03-5.0IU/ml范圍內(nèi)的39例，占HBsAg陽性標(biāo)本的11.78%（39/331），大于或等于5.0IU/ml 292例，占陽性標(biāo)本的88.22%（292/331）；HCV-Ab 陽性 88例， 陽性率0.75（88/11785），TP-Ab 陽性 147 例，陽性率 1.25%(147/11785)。乙肝五項(xiàng)檢出模式見表 6，HBsAg、HCV-Ab、TP-Ab陽性結(jié)果均經(jīng)快速膠體金標(biāo)記法進(jìn)行復(fù)檢，HISCL-5000檢測(cè)陽性的HBsAg、HCVAb和TP-Ab標(biāo)本，膠體金方法檢測(cè)分別有9例、12例和11例陰性，兩種方法符合率見表7。

3 討論

乙型肝炎、丙型肝炎和梅毒分別是由乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒和蒼白螺旋體感染引起的嚴(yán)重危害人類健康的重要傳染病。乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒的靶器官是人體肝臟，病毒可損傷肝細(xì)胞，導(dǎo)致細(xì)胞壞死死亡，最終可引起肝硬化和肝癌[5，6]。梅毒可經(jīng)性接觸和血液傳播，感染后可引起全身系統(tǒng)性癥狀，近年來梅毒感染率在我國有逐年上升趨勢(shì)[7]。目前，手術(shù)、輸血和各種穿刺前對(duì) 患 者 進(jìn) 行 乙 肝 五 項(xiàng) （HBsAg，HBsAb，HBeAg，HBeAb，HBcAb），HCV-Ab，TP-Ab 和 HIV-Ab 檢測(cè)已成為患者就醫(yī)過程中的必檢項(xiàng)目。近年來對(duì)這些感染性標(biāo)志物檢測(cè)逐漸從定性的手工方法發(fā)展到自動(dòng)化的化學(xué)發(fā)光法。高敏化學(xué)發(fā)光酶免疫分析儀5000（HISCL-5000）是一款新型全自動(dòng)定量檢測(cè)系統(tǒng)，該系統(tǒng)采用新型底物CDP-Star，增加了檢測(cè)靈敏度，檢測(cè)限更低，通過創(chuàng)新的B/F分離技術(shù)，最大限度降低非特異性反應(yīng)，應(yīng)用濾鏡切換技術(shù)，提升了濃度檢測(cè)線性范圍，降低標(biāo)本稀釋頻率，縮短測(cè)試時(shí)間和試劑成本，該設(shè)備可在運(yùn)行過程中隨時(shí)更換試劑和耗材，體現(xiàn)了儀器的高度智能化和分析測(cè)試的連續(xù)性，國內(nèi)外已有文獻(xiàn)報(bào)道了其臨床應(yīng)用[8，9]。

表4 HISCL-5000分析儀線性驗(yàn)證結(jié)果

表5 HISCL-5000分析儀HBsAg和HbsAb檢測(cè)限驗(yàn)證結(jié)果

表6 HISCL-5000分析儀檢測(cè)HBsAg陽性模式

表7 HISCL-5000分析儀檢測(cè)陽性結(jié)果與膠體金標(biāo)記法檢測(cè)結(jié)果比較

根據(jù)實(shí)驗(yàn)室管理和ISO5189的規(guī)范要求，新儀器應(yīng)用前必須對(duì)其性能進(jìn)行驗(yàn)證。因此本研究首先對(duì)HISCL-5000檢測(cè)感染性標(biāo)志物的性能進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果顯示HISCL-5000分析儀攜帶污染率為0%，小于廠商要求的1%，表明該儀器可有效避免檢測(cè)過程中的交叉污染，確保結(jié)果的準(zhǔn)確性。除了TP-Ab批間精密度和日間精密度CV%分別為9.87%和5.95%外，其余項(xiàng)目批內(nèi)和日間精密度CV%均小于5%，遠(yuǎn)小于廠商要求的10%，說明檢測(cè)結(jié)果穩(wěn)定，重復(fù)性好。HISCL-5000檢測(cè)HBsAg和HBsAb高、中、低三個(gè)濃度線性范圍，R2均大于0.99，說明被測(cè)物濃度在分析線性范圍時(shí)，所測(cè)結(jié)果可信，更接近被測(cè)物質(zhì)真值。因此HISCL-5000性能可滿足醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可的要求和臨床對(duì)感染性標(biāo)志物定量檢測(cè)的需求。

隨后對(duì)HISCL-5000檢測(cè)的11785例臨床樣本結(jié)果進(jìn)行了分析，結(jié)果顯示所檢測(cè)患者HBsAg陽性率為2.81%，明顯低于文獻(xiàn)報(bào)道的全國一般人口的7.18%[10]，慢性乙型肝炎聯(lián)合治療專家共識(shí)已經(jīng)把HBsAg定量檢測(cè)作為臨床治療慢性乙肝的參考指標(biāo)[11]，HBsAg定量也可以預(yù)測(cè)抗病毒治療反應(yīng)和肝細(xì)胞癌的發(fā)生[12]。因此準(zhǔn)確地定量檢測(cè)乙肝五項(xiàng)指標(biāo)對(duì)于療效評(píng)估和病情監(jiān)測(cè)有重要意義。HCV-Ab陽性率為0.75%，與文獻(xiàn)報(bào)道的結(jié)果相似[13，14]，丙型肝炎是輸血后肝炎的重要原因，定量檢測(cè)對(duì)輸血安全和有效避免醫(yī)療糾紛有重要意義。TP-Ab陽性率為1.25%，與我們以前報(bào)道的結(jié)果相符[15]，低于文獻(xiàn)報(bào)道的陽性率[13]。由于我院是神經(jīng)科?？漆t(yī)院，因此HBsAg和TP-Ab陽性率低于綜合性醫(yī)院報(bào)道的陽性率可能與此有關(guān)。所有陽性結(jié)果應(yīng)用膠體金標(biāo)記方法復(fù)檢，三項(xiàng)指標(biāo)陽性標(biāo)本，均存在部分膠體金結(jié)果陰性，提示作為快速檢測(cè)方法的膠體金標(biāo)記方法，敏感性較HISCL-5000差，存在一定的漏檢率。

總之，HISCL-5000高敏發(fā)光酶免疫分析儀具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、線性范圍寬、攜帶污染低、檢測(cè)反應(yīng)時(shí)間短、自動(dòng)化程度高等優(yōu)點(diǎn)，可以很好地滿足臨床對(duì)感染性指標(biāo)的定量要求，能更好地用于患者病情監(jiān)測(cè)和疫苗接種效果評(píng)價(jià)，HISCL-5000能為臨床乙型肝炎、丙型肝炎和梅毒的診斷、治療、動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)和療效評(píng)估提供準(zhǔn)確的科學(xué)依據(jù)。

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