苦味酸速率法和酶法測(cè)定血清肌酐方法學(xué)評(píng)價(jià)

秦連英　鞏文平

【中圖分類號(hào)】R466.11 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】2095-6851（2018）02-0-02

腎臟疾病是嚴(yán)重危害人類健康的疾病之一，據(jù)估計(jì)，目前全世界腎病患者人數(shù)超過6億，每年死于慢性腎病相關(guān)疾病的患者人數(shù)超過100萬(wàn)，且腎病患病率還在不斷上升。肌酐檢測(cè)是腎功能檢測(cè)的一個(gè)重要指標(biāo)。血中肌酐的濃度能準(zhǔn)確地反映腎小球的功能。它的檢測(cè)結(jié)果對(duì)腎臟患者的臨床診斷、療效觀察及預(yù)后判斷有很重要的意義。測(cè)定血清肌酐最重要的兩種方法是酶法和苦味酸法。這兩種方法因?yàn)闇y(cè)定原理不同，抗干擾能力不同，導(dǎo)致兩種檢測(cè)結(jié)果有差異。但具體兩種方法各有什么優(yōu)缺點(diǎn)，筆者采用Cobas C 501全 自動(dòng)生化分析儀用兩種方法對(duì)50例臨床患者進(jìn)行對(duì)照測(cè)定，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，為實(shí)驗(yàn)室選擇適合的檢測(cè)方法提供依據(jù)。了解酶法與苦味酸速率法測(cè)定血清肌酐的優(yōu)缺點(diǎn)，為檢驗(yàn)科選用檢測(cè)方法提供參考依據(jù)。

血清中肌酐的測(cè)定是診斷和監(jiān)測(cè)腎功能損傷與療效觀察的一項(xiàng)重要生化指標(biāo)，由于苦味酸法容易被內(nèi)源性物質(zhì)干擾，特異性差，故通常采用Trinder反應(yīng)（偶聯(lián)終點(diǎn)比色法）為指示系統(tǒng)的肌酐酶偶聯(lián)肌氨酸氧化酶法、肌酐亞胺水解酶偶聯(lián)谷氨酸脫氫酶法來(lái)測(cè)定血清肌酐，但在臨床檢測(cè)中往往會(huì)遇到部分血清標(biāo)本肌酐結(jié)果假性升高或下降，與尿素氮結(jié)果不匹配的情況。因此現(xiàn)結(jié)合臨床實(shí)際對(duì)影響酶法測(cè)定的因素進(jìn)行分析。

在堿性苦味酸速率法測(cè)定肌酐時(shí)膽紅素干擾清除劑高鐵氰化鉀的量對(duì)測(cè)定結(jié)果有一定影響，試劑中加入高鐵氰化鉀后，標(biāo)準(zhǔn)液的反應(yīng)速率有下降趨勢(shì)。血清標(biāo)本反應(yīng)速率在加入高鐵氰化鉀濃度較低時(shí)有下降，但下降比率遠(yuǎn)較標(biāo)準(zhǔn)液為小，而加入濃度較高時(shí)反應(yīng)速率有明顯升高、總的效果是加入高鐵氰化鉀后使肌酐測(cè)定結(jié)果升高，且隨高鐵氰化鉀濃度的加高而加高。不同廠家的標(biāo)準(zhǔn)液則反應(yīng)速率變化的規(guī)律又略有差異。

1 材料與方法：

1.1 對(duì)象：我院康復(fù)科患者共50例，其中男23例，女27例，年齡32～70歲。全部測(cè)試為空腹?fàn)顟B(tài)。

1.2 測(cè)試儀器：Cobas C 501全 自動(dòng)生化分析儀

1.3 測(cè)試試劑： 酶法和苦味酸法所用試劑、定標(biāo)液，質(zhì)控品均為羅氏診斷產(chǎn)品（上海）有限公司試劑。

1.4 測(cè)試方法：由醫(yī)務(wù)人員于清晨7點(diǎn)抽取空腹靜脈血3ml，在2小時(shí)內(nèi)分別用兩種方法測(cè)定血清肌酐濃度。同時(shí)按美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì) EP9-A文件方案，將測(cè)定結(jié)果進(jìn)行相關(guān)回歸分析，計(jì)算兩種方法間的偏倚。每天選取10份臨床患者血液標(biāo)本加一份質(zhì)控品，并分別用兩種方法 進(jìn)行測(cè)定，每份重復(fù)做兩遍，共測(cè)定5天，記錄結(jié)果。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：用spss14.1統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2 結(jié)果

兩種方法測(cè)定50份標(biāo)本的肌酐濃度，苦味酸法肌酐濃度為39～102umol/l，平均為（62+-7.12）umol：；酶法測(cè)定的血清肌酐為45～110umol， 平均為（70+-7.53）umol。并且從測(cè)定的50份標(biāo)本的肌酐濃度結(jié)果來(lái)看，方法內(nèi)和方法間重復(fù)測(cè)定值離群點(diǎn)的檢驗(yàn)，未發(fā)現(xiàn)有超出質(zhì)控范圍 數(shù)據(jù)，且酶法和苦味酸法相關(guān)系數(shù)R=0.998， 回 歸方程為Y=0.921X+7.963。由此 回歸方程，對(duì)兩種方法檢測(cè)血清肌酐的結(jié)果進(jìn)行預(yù)期偏倚和相對(duì)偏倚的估計(jì)，發(fā)現(xiàn)隨著標(biāo)本肌酐濃度的升高偏倚增大。建議苦味酸法測(cè)實(shí)驗(yàn)室標(biāo)本，當(dāng)肌酐濃度大于300umol /l時(shí)，酌情稀釋結(jié)果會(huì)更準(zhǔn)確，否則結(jié)果偏低。兩種方法測(cè)定肌酐的精密度、準(zhǔn)確度均符合要求，而且兩種方法測(cè)定結(jié)果有良好的相關(guān)性，但是酶法與苦味酸速率法比較，線性范圍更寬，精密度、準(zhǔn)確度、靈敏度也更高，特異性即抗干擾力也更強(qiáng)。

3 討論

肌酐是肌酸代謝的終產(chǎn)物，在機(jī)體正常狀態(tài)下，它的產(chǎn)生和排泄都較穩(wěn)定。苦味酸法是比較經(jīng)典的一種檢測(cè)方法，但它的不足之處是特異性差，血中丙酮，丙酮酸，葉酸，抗壞血酸，葡萄糖，乙酰乙酸等都可能在此反應(yīng)中呈色，因此被稱為“非肌酐色源”。用血清作樣品測(cè)定時(shí)此類物質(zhì)可占到發(fā)色強(qiáng)度的百分之二十。此外，一些頭孢類藥物也可與苦味酸反應(yīng)顯色引起干擾。綜上原因，隨著醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)的進(jìn)步，目前大多數(shù)醫(yī)院采用肌氨酸氧化酶法測(cè)定血清肌酐。它的優(yōu)點(diǎn)是特異性強(qiáng)，準(zhǔn)確度高，受干擾的物質(zhì)少，但試劑價(jià)格相對(duì)較貴?？辔端岱▋r(jià)格便宜，但筆者多年的檢驗(yàn)工作經(jīng)驗(yàn)來(lái)看，苦味酸法也有很多的局限性，它的穩(wěn)定性不夠，因?yàn)橛休^重的著色，對(duì)比色杯的污染不容忽視?？辔端釋?duì)儀器管道也有一定的腐蝕作用。再一個(gè)就是苦味酸法受到諸多干擾物的干擾，尤其是膽紅素和血紅蛋白，造成肌酐檢測(cè)結(jié)果偏低。各醫(yī)院檢驗(yàn)科根據(jù)實(shí)際情況選用檢測(cè)方法。有條件的大醫(yī)院建議用酶法，一些基層醫(yī)院考慮成本問題，也可用苦味酸法。用酶法測(cè)定血清肌酐比苦味酸法更可靠，雖然價(jià)格相對(duì)較高，但為了給病人提供更準(zhǔn)確的檢驗(yàn)結(jié)果，建議各醫(yī)院檢驗(yàn)科還是選用酶法。

由于本次研究樣本量少，研究時(shí)間短，結(jié)果又一定的局限性。建議采用大樣品，多中心研究，期待與各位同仁作進(jìn)一步的深度分析和探索。

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